第一篇：胡小兰学习体会
学习《反腐倡廉》心得体会
胡 小 兰
反腐倡廉工作是我党立党之本、执政之基，全力推进党的反腐倡廉工作是我党面对新形势新任务做出的历史抉择。通过学习《警示》后，我不仅为腐败者的沉沦感到痛心疾首，更使我深刻认识到，作为一名基层党员肩负的职责重担。只认真学习，执行中央反腐倡廉和干部廉洁自律的有关规定，时刻牢筑反腐倡
廉的思想防线，一心为党、一心为公，廉洁自律，克己奉公，永葆党员干部的纯 洁公仆本色，拒腐蚀永不沾，才能保证党的事业不断前进，不断取得新胜利。要 提高拒腐防变的能力，保持廉洁自律，就要做到以下几个方面：
一、不断学习，提高认识，增强拒腐防变的免疫力
从《警示》腐败者违法犯罪的轨迹中，不难看出，他们的不义之财来自权力的“魔棒”，他们用权力演绎了一场场淋漓尽致的权钱、权色交易之戏。他们无视党纪国法，目无组织纪律，不顾群众利益，弄虚作假，独断专行，横行霸道，腐化堕落，不仅严重败坏了党风政风而且使人民群众利益遭受了严重损失。通 过这次组织学习《警示》教育活动，使我看到少数党员干部由于放松了对世界观、人生观的改造，抵御不住诱惑，走向了犯罪的深渊，以致身陷囹圄，结果令人痛 心、扼腕疾首。在物欲横流的当今社会，人们无利而不往，做为一个共产党员，要清醒的认识到身上担负的历史使命，深刻领会党中央在党的廉政建设中的深谋远虑，全面增强对拒腐防变的认识，提高自身的免疫力，不断增强政治学习的紧迫感和责任感，加强思想改造，树立牢固正确的人生观、价值观、世界观、权利关，时刻清醒的认识到权力是谁负于的，应该利用手中的权力为谁谋利益，要真正做到权为民所用、利为民所谋，时刻牢记全心全意为人民服务的宗旨，做到自重、自律、自警，常怀律己之心，常修为官之德，始终保持共产党人的浩然正气。
二、以案为鉴，警钟长鸣，筑牢拒腐防变的防线
学习完《警示》后，发人深醒，令人深思，所谓一失足成千古恨，贪官们留 下了千古骂名，永远被钉在历史的耻辱柱上，以案为鉴，才能警钟长鸣，做为一 名共产党员要清醒地明白自己该做什么,不该做什么。“手莫伸，伸手必被捉”，“人莫贪，清贫为官是正道”，古往今来，贪官贪恋美色、钱财、权力，如和坤
之流永远被钉在了历史的耻辱柱上。《警示》的案例详实、全面，个个如警钟长 鸣于耳，不时地警示、提醒着自己。阅读会员限时特惠 7大会员特权立即尝鲜古人云：“其身正，不令而行；其身不正，虽令不从。”是讲为政者必须身 正行直，办事公道。作为一名基层管理人员，如果说一套，做一套，就逐步失去 群众的信任，就会影响党在群众中的形象。因此，在本职工作岗位上，一定要树 立正确的权力观、政绩观，要立共产主义的大志，成人民群众的大事，把心思用 在工作上，用在干事业上，用在为人民群众谋利益上，对等权力要有如履薄冰的 精神，要慎权，要严于自律、公道正派、洁身自好，清廉自守，否则就“一失足 成千古恨”。要把组织和群众的监督当作是一面镜子，经常照一照，检查一下，及时加以改进和纠正。在日常工作中要常怀律已之心，常思为民之责，手莫伸、人莫贪，在自己面前真正筑起一道防腐防变的铁篱笆。
三、勤奋做事，廉洁做人，永葆公仆本色
通过此次《警示》的学习，使我深刻领会到，做为一名共产党员要时刻将自 己的工作实践，跟人民群众的具体利益联系在一起，做事谦虚谨慎、严于律己、廉洁奉公，要为民做老实事，做本分事，要在错综复杂的社会中找准自己的人生 价值航标，千万不能背离了为民办事的航线，否则悔之晚矣。在市场经济的形势 下，只有自觉地进行世界观、人生观和价值观的改造，坚定自己的信念，牢记为 人民服务的宗旨，坚持立党为公、执政为民，提高自我约束能力，提高自我警省 能力，坚决抵制市场经济条件下物欲横流的诱惑，过好权利关、金钱关、人情关，经受住各种考验，抵御住各种诱惑，才能立于不败之地。严格践行“三个代表” 的要求，牢记全心全意为人民服务的宗旨，站稳党和人民的立场，做到眼光远大，心胸开阔，自觉奉献，才能永葆人民公仆的本色，拒腐蚀永不沾。
小学三年级安全教育班队会教案
三（4）胡小兰
一、教学目的：
1、通过读新闻、演小品、讲演等形式引起同学们对安全的重视。
2、通过本次班会活动，使同学们了解一些基本的安全常识，树立生命安全意识。
二、课前准备：
1、让同学们收集有关学校安全的新闻。
2、组织学生排演小品，号召学生准备讲演稿。
3、选好及训练班会主持。
4、了解一些基本的安全常识。
三、活动过程：
（一）主持读有关学校安全的新闻以引入主题。
1、主持A读新闻。
2、主持B：大家听了这则新闻有什么感想呢？
3、同学们议论，各抒己见。
4、主持小结：
A：生命在你手中，安全不容忽视。
B：所以今天我们就一起来学习安全常识，树立生命安全意识。
（二）安全知识竞赛（抢答形式）
1、交通讯号灯有哪些颜色？都有些什么作用？
2、打雷的天气能不能看电视？
3、夏天中暑了怎么办？
4、怎样注意饮食卫生？
5、小明上学时带小订玩，可以吗？
6、发生地震时该怎么办。
（三）看小品，议一议：
1、小品内容：教室突然着火，学生相互逃生。
2、议一议：
（1）这些同学谁做得对？
（2）谁做的错了？
3、把同学们的错误纠正过来。
4、由小品、谈心得体会。
（四）学生讲演
（五）小结：
1、同学们小结，谈自己的收获。
2、班主任小结：生命只有一次，幸福快乐掌握在你的手里，希望同学们通过这次班会活动，学会珍惜生命，树立安全意识。
反思：同学们通过这次班会活动，学生学会了珍惜生命，树立了安全意识，达到了很好的效果。
小学生“防溺水”安全教育主题班会教案
胡小兰
教学目标：
1、使学生了解溺水事件及其发生的原因。
2、使学生学会珍爱生命，学会自救及抢救的方法。
教学过程：
一、导入
夏天就要到了，不少同学会去河里游泳，大家听一听有关溺水事件的报道。
师：听了这个报道，我想在座的每一位同学心里都不会感到轻松。你是否感叹，是否惋惜，一个生命就这样在世界上转瞬消失?此刻，你在想什么?请同学谈谈你的看法。
生：讨论、发表自己的看法
小结：人，应该珍爱生命。今天这节课我们就来学习珍爱生命，防止溺水的安全教育。
二、探讨溺水的原因
师：什么是溺水？
生：讨论
小结：溺水是常见的意外，溺水后可引起窒息缺氧，如心跳停止的称为溺死，如心跳未停止的则称近乎溺死这一分类以病情和预后估计有重要意义，但救治原则基本相同，因此统称为溺水。
衔接：溺水已成为我们小学生的头号杀手，随着天气逐渐变热，溺水的危险将增加。
师：溺水原因主要有哪几种？
生：讨论，小结：不会游泳；游泳时间过长，疲劳过度；在水中突发病尤其是心脏病；盲目游入深水漩涡。
衔接：在炎热的夏季，许多人喜欢游泳，因为缺少游泳常识而溺水死亡者时有发生。据有些地区统计，溺水死亡率为意外死亡总数的10%。
师：如何保证游泳的健康和安全，避免溺水事件的发生？
生：我们外出游泳洗澡严格遵守四不：未经家长老师同意不去；没有会游泳的成年人陪同不去；深水的地方不去；不熟悉的江溪池塘不去。
三、学习自救及抢救的方法
师：讲解自救及抢救的方法：对水情不熟而贸然下水，极易造成生命危险。万一不幸遇上了溺水事件，溺水者切莫慌张，应保持镇静，积极自救，对于溺水者，除了积极自救外，还要积极进行陆上抢救。
生：学习自救及抢救方法
同学们，生命的全部意义在于无穷地探索尚未知道的东西，在无穷的探索里，你会看到光辉、灿烂的前景。让我们珍爱生命，防止溺水。祝愿大家今天好，明天会更好!
第二篇：学习胡兰精神,践行“七一讲话”
1，平原的解说
1,孟春时节,现如今的刘胡兰故乡文水县的别致风景,夕阳撕扯出几道血纱，绚丽的镕金般色彩渐渐淡褪光华,晚风轻拂,文水县的万顷麦田正欣欣然拔节入梦,麦田苍翠湛青,宁静,幽深,而庄严,这片生机的沃野融入了英烈的鲜血,被赋予了不朽的爱国情怀,默默地染绿质朴的黄土,酝酿收获的季节.2，一棵树的解说
深秋,山西吕梁山间,油然一碧的天空覆盖了夕阳的血焰,峰回路转,曲折蜿蜒,通往文水县的山路旁,伫立着一株遒劲的古木,凛冽寒风中,蓊郁而又凝重,远方清晰而又柔和的曲线上,似乎有汾水的溪流在流淌,把附近的天色洗得越来越亮,文水县,这个依山傍水的小山村,如黄土高原上酒红色的高粱,哺育了质朴的文水县人民,青山绿水中,纯洁的灵魂在田野里抽穗拔节,勾勒了一幅安宁祥和的画卷,然而,1932年一个不平凡的女子诞生了,她以身躯作笔,蘸着鲜血涂抹铿锵瑰丽的壮言.刘胡兰，原名刘富兰，1932年10月8日出生于山西省文水县的一个中农家庭。刘胡兰8岁上村小学，10岁起参加儿童团。10 月，她参加了中共文水县委举办的 “ 妇女干部训练班 ”。
3，刘胡兰的解说
追忆历史碾过的血色车辙，我们来到了 1947年1月28日萧瑟的冬季，山西的文水县的氛围干冷而又静默，刘胡兰用傲然不屈的精神诠释了对党的坚贞，她用带刺的思想指向敌人的心脏，可墨色的铡刀让鲜红的血液流淌不止。。。历史悠悠，可生命短暂如虹，依然撑起民族的脊梁，她英勇就义的场景在这片热土打上了深深的烙印，慷慨激昂的壮言润湿了缺乏信仰的干涸灵魂，斗转星移，英烈的壮言依然在我们耳畔回响()1947年1月12日，阎军突然袭击云周西村，刘胡兰因叛徒告密而被捕。
“你就是刘胡兰？”
刘胡兰响亮地回答：“我就是刘胡兰，怎么样？”
“你给八路军干过什么事？”
“只要我能办到的，什么都干过。”
“那么你们村长是谁杀的？”
“不知道!”
“你们区上的八路军都到哪里去了？”
“不知道!”
：“你，你，你就什么也不知道？”
刘胡兰镇静地回答：“不知道，就是不知道”
“你为啥要参加共产党？”
“因为共产党为穷人办事。”
“以后你还会为共产党办事不？”
“只要我还有一口气，就要为人民干到底”。
“自白就等于自救，只要你自白，我就放你，还给你一份好土地，给你钱……”
刘胡兰轻蔑地说：“你就是给我一个金人，我也不自白！”
“你小小年纪，好嘴硬啊，难道你就不怕死吗？”
刘胡兰逼进一步，斩钉截铁地说：“怕死不当共产党！”
刘家有女，胡兰是名。
云周西村，投身革命。
少年即入党，巾帼建奇功。
叛徒嘴脸恶，阎匪铡刀凶。
烈士信念坚，不为名利动。
视死竟如归，坚贞兼英勇。
遗范垂后世，风采映苍穹。
主席毛泽东，感而撰其铭。
落笔仅八字，千载壮忠魂：
“生的伟大，死的光荣！”
1:24:10升华{{放烟花的时候}} 忆往昔，1949年10月，以毛泽东同志为主要代表的第一代中国共产党人，领导千百万革命志士，用鲜血和生命赢得了中国革命的伟大胜利。天安门城楼上新中国的庄严宣告，响彻大江南北，震惊整个世界。
叹今朝，九十载的风雨历程，九十年的光辉业绩。沧海桑田，神州巨变，我们的祖国振翅一飞，冲向云霄。巨人的呐喊，震荡环宇，让群山响应，大海回波。中国向一头雄狮，以一个大国的身份屹立于世界的东方。
我们党的创始人之一李大钊说过，为世界进文明，为人类造幸福，以青春之我，创建青春之人类。我们党的创始人，一代又一代中国共产党人，大多数都是从青年时代就满腔热血参加了党，决心为党和人民奋斗终身。我们党的队伍里始终活跃着怀抱崇高理想、充满奋斗激情的青年人，这也是我们党历经90年风雨而依然保持蓬勃生机的一个重要保证。
90年来，向刘胡兰一样的青年，在党的发展史上的作用巨大，是党的队伍发展壮大和永葆生机的活力之源。胡锦涛总书记的“七一”重要讲话有着鲜明的“青年特质”，他强调了青年在党史上的地位，阐述了代表、赢得、依靠广大青年的重大意义，指出要关注、关心、关爱青年，并对青年提出希望和嘱托。我们深切体会到，党和青年的关系是一个共生共融的哲学存在，如同树与土壤，紧密相连，相依相偎，须臾不可分离。
青年是祖国和民族的未来和希望，也是执政党立于不败之地的竞争力所在。“全国广大青年一定要深刻了解近代以来中国人民和中华民族不懈奋斗的光荣历史和伟大历程，永远热爱我们伟大的祖国，永远热爱我们伟大的人民，永远热爱我们伟大的中华民族，让青春在为党和人民建功立业中焕发出绚丽光彩。”胡锦涛总书记对我们的谆谆教导，殷切期望，青年要铭记在心。
生命需要精彩，青春永不言败！我们是五月的花海，用青春拥抱时代。我们是初升的太阳，用生命点燃未来。让我们坚守理想与信念，传承刘胡兰的精神，用知识的浪花去推动思考的风帆，用智慧的火星去点燃思想的火花，用浪漫的激情去创造美好的生活，用科学的力量去强劲腾飞的翅膀！乘风破浪、与时俱进，以满怀的豪情再创新世纪的辉煌！
第三篇：五年级科学总结 胡俊兰
2011——2012学第一学期教学工作总结
五年级科学
胡俊兰
一转眼，本学期即将结束。在这学期，我担任五年级六个班的科学教学任务，在这个学年中，我认认真真教学、踏踏实实工作，虽然很辛苦，但收获颇多。为了能更好的提高教育教学质量，先将本学期的工作总结如下：
一、德
认清新课程改革的目标，从思想上重视课程改革目标的能动性。全面贯彻党的教育方针，全面推进素质教育。使学生具有爱国主义、集体主义精神、热爱社会主义，逐步形成正确的世界观、人生观、价值观；养成健康的审美情趣和生活方式，成为有理想、有道德、有文化、有纪律的一代新人。
二、能
小学科学课是以培养学生科学素养为宗旨的科学启蒙课程，目前越来越受到各界的重视，我深知自己肩上的担子的重要性，并下决心以我微薄的力量来推进我校科学教育的向前发展。我知道，要想提高教学质量，首先要立足课堂，教师要从常规课上要质量。“研在课前，探在课中，思在课后”这几句精辟的话一直指导着我的教学思想，尽管课时任务重，我仍尽力精心预设每一节课,创设轻松愉悦的情境进行教学，与学生共同学习共同交流共同进步。一学期下来，我积累了不少教学经验，学生的合作意识和合作能力得到大大的增强。
1、扎扎实实打好基础，拼命赶进度不可取
在每次单元考试或作业中，学生答题存在的问题，与他们平时没有准确地理解和掌握科学的基础知识和技能有很大的关系，因而在教学中重视和加强基础知识和基本技能的学习仍然是首要的。抓基础知识，就是要抓科学课本知识，教学中力求每章节过关。由于各学生之间的智力差异和学习基础不同，学生对科学知识的掌握能力不同，我针对学生实际情况因材施教，因人施教，尽量降低教学目标。抓基本技能，要抓好科学用语的使用技能和实验基本技能。平时的实验教学中，对课本上的基本概念基本原理要深入浅出地分析，力求全部的学生理解，要让学生真正了解每个实验涉及科学原理，多给机会让学生动脑思考问题的时间，多给学生提问的空间，多让学生动手做实验，体验通过实验进行观察和研究的过程和乐趣，切实提高学生的实验能力。
2、重视获取知识的过程和科学探究能力的培养
要提高学生的能力，就要在教学中加强学生科学素养、发现问题、分析问题和解决问题能力的培养。平时教学与复习，都不能“重结论，轻过程，重简单应用的机械操练、轻问题情景和解答思路分析”。应该重视获取知识的过程，让学生掌握学习科学的“基本学科思维方法”。平时科学试题中常出现科学探究内容，这对科学教学提出了更高的要求。我们应该准确把握课程改革方向，以课本知识为基本探究内容，以周围环境为参照对象，让学生亲身经历和体验科学探究活动，主动学习，逐步形成科学探究能力。
3、密切联系社会生活实际，抓好知识的应用
平时试题中涉及能源、环保等社会热点的内容，从多角度对学生的知识与能力进行考查。这类试题的考查力度今后将逐步加强，这就要求科学教学要突破单纯灌输课本知识的限制，减少机械操练耗费的时间和精力，让学生有时间阅读课外科技知识，尽可能多地接触和认识社会，要求学生多关注社会热点问题。用科学视角去观察问题和分析问题，学以致用。
三、勤
本学期，我做到了出满勤，干满点。没有因私事请假，没有无故给学生耽误一节课，对教研组组织的教研活动，积极参与，学校组织的各种活动，我也做到深入其中，学期中，认真学习各种规章制度，认真撰写业务笔记和德育笔记，努力提高自身的素质和业务能力。
四、绩
从学校实际出发，我注重了全体学生在原有基础上的全面提高，努力提高合格率，争取较高优秀率。通过努力，圆满地完成了教学任务，这与学生的努力是分不开的。下学期我将继续保持，并争取更大的进步，使自己的教学水平更上一层楼。
2011-12-29
第四篇：胡秀兰孝顺父母先进事迹
心怀感恩、孝顺父母
——胡秀兰 胡秀兰、女、1958．10月出生，高中学历。在工作期间连续被评为先进工作者。2011年10月被评选为“百名孝子楷模”。
心怀父母恩 孝顺父母是人伦
胡秀兰是八府庄社区的一名残疾志愿者，母亲83岁。胡秀兰在社区工作，平时很忙，但她还是无微不至的照顾着老人，热了为老娘想办法做凉爽的饭菜，冷了把火炉般到老人房子，邻居见了，也都经常夸他们母亲：“你们的子女真孝顺，有福气啊！”得到邻居们的称赞，老人脸上也露出幸福的笑容。面对邻居们的赞许，胡秀兰越是觉得自己做得不够，越是感到自己所作所为是天经地义的，与父母的风雨几十年付出相比自己的所作所为就微不足道了。然而，邻居的赞誉深深地触动了胡秀兰的心，想到自己小小的付出竟然换来邻居们的如此好评，而父母的付出有那么多却无人夸耀，真是可怜天下父母心。想到自己也在为人父母，也在尽心尽力为子女，“养子才报父母恩”这话一点不假，孝敬父母天经地义。
胡秀兰的母亲今年83岁，身体还算硬朗，又一次，要求附近医院给母亲量血压，她让母亲先下楼，可是等她下来的时候却看不见老娘，她急的快哭了到处去找、大家都劝她回去想想老人能去哪、好有目的的找、当她回到家里猛然看到老人在家了看电视，原来是母女俩走岔路了。
孝顺父母是奉献 奉献亦幸福
胡秀兰说：她不想留下“子欲养而亲不待，子欲孝而亲不在”的遗憾。一人独自侍奉老人，按说在家里还有兄妹，但她没有把责任推给他们，其主要原因是：她对孝敬父母有独到的认识，她认为孝敬父母不是只管老人的吃和穿就行的，还要与老人进行心灵的交流，让老人着实找到家的感觉，这才叫孝敬。
胡秀兰说：“把孝敬父母当作是福，那就会找到无限的乐趣”。一个家有老人，有小孩，这才像个家。
第五篇：小兰老师
盐城师范学院论文设计
基因工程在生物制药领域的应用
孙中楼
[摘 要] 本文主要介绍了基因工程的概念、基因工程技术开发生物药物的一般过程及一些以开发利用的基因工程药物,生物药物较传统的化学药物、中草药的优越性及它的特殊疗效,同时探讨了今后利用基因工程技术进行药物开发、研究的发展方向及广阔的应用前景。[关键词] 基因工程 基因治疗 基因重组 生物药物基因工程概述
所谓的基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子, 构成遗传物质的新组合, 并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞内, 而能持续稳定地繁殖[1]。
基因工程的第一个重要特征是跨越天然物种屏障的能力,即把来自任何一种生物的基因放置在与其毫无亲缘关系的新寄主生物细胞中去的能力。这表明人们有可能按照主观愿望创造出自然界中不存在的新物种。第二个特征是, 它强调了一种确定的DNA 小片段在新寄主细胞中进行扩增的事实,才能制备到大量纯化的DNA 片断, 从而拓宽了分子生物学的领域, 使之在生物制药领域有巨大的应用。
基因工程自从20世纪70年代初期问世以来, 无论是在基础理论研究领域, 还是在生产实际应用方面, 都已经取得了惊人的成绩。基因组核苷酸全序列的测定与分析, 是基因工程技术促进基础生物学研究的一个出色范例。2001年2月12日, 由6国的科学家共同参与的国际人类基因组公布了人类基因组图谱及初步分析结果, 这结果为人们提供了约3000多个基因可用来制药, 将推进基因制药产业的快速发展[2]。由于基因克隆技术的发展, 已使得基因工程技术在工业生产尤其是制药生产中发挥了重要作用。以前人们利用微生物自身生产有用的产品, 如利用青霉菌生产青霉素、利用链霉菌生产链霉素等。但是从这些生物体中分离纯化这些药物, 不仅成本昂贵, 而且技术上也相当困难。如今将编码这些药物的基因克隆并转移到合适的生物体内进行有效的表达, 就可以方便地提取到大量的有用药物。基因工程技术开发药物的一般过程
利用基因工程技术开发一个药物, 一般要经过以下几个步骤: ① 目的基因片断的获得: 可以通过化学合成的方法来合成已知核苷酸序列的DNA 片段;也可以通过从生物组织细胞中提取分离得到, 对于真核生物则需要建立cDNA 文库。② 将获得的目的基因片
盐城师范学院论文设计
断扩增后与适当的载体连接后, 再导入适当的表达系统。③ 在适宜的培养条件下, 使目的基因在表达系统中大量表达目的药物。④将目的药物提取、分离、纯化,然后制成相应的制剂。
以上方法大部分是以微生物或组织细胞作为表达系统,通过微生物发酵或组织细胞培养来进行药物生产。近年来, 通过转基因动物来进行药物生产的“生物药厂”成为目前转基因动物研究的最活跃的领域, 也是基因工程制药中最富有诱人前景的行业。转基因动物制药具有生产成本低、投资周期短、表达量高、与天然产物完全一致、容易分离纯化等优势, 尤其是适合于一些用量大、结构复杂的血液因子, 如人血红蛋白(Hb)、人血白蛋白(HSA)、蛋白C(Pro tein C)等。英国的爱丁堡制药公司通过转基因羊生产α1-抗胰蛋白酶(α1-AAT)用于治疗肺气肿, 每升羊奶中产16 g AAT, 占奶蛋白含量的30%, 估计每只泌乳期母羊可产70 g AAT[3]。另外, 转基因植物制药比转基因动物制药更为安全, 因为后者有可能污染人类的病原体。目前, 已经开发出许多转基因植物药物, 例如脑啡肽、α-干扰素和人血清蛋白, 以及两种最昂贵的药物即葡萄糖脑苷脂酶和粒细胞-巨噬细胞群集落因子等[4]。基因工程药物
基因工程药物自20 世纪70 年代末期以来, 有了飞跃的发展。1978 年首次通过大肠杆菌生产由人工合成基因表达的人脑激素和人胰岛素, 1980 年美国联邦最高法院裁定微生物基因工程可以获得专利, 1982 年第一个由基因工程菌生产的药物—— 胰岛素, 在美国和英国获准使用以来,各种基因工程药物犹如雨后春笋, 得到了蓬勃发展。我国的医药技术的研发和产业化也取得了长足的进展。3.1 抗生素类
传统的抗生素生产, 主要利用化学合成或微生物发酵来获得, 其生产过程中菌种的表达水平比较低, 生产成本比较高, 而且在使用过程中容易产生耐药菌群。而利用基因工程技术可以对生产菌种进行基因改造, 得到表达水平高、产品目的性强的菌株, 如大肠杆菌生产青霉素酰胺酶。德国一个科研小组对生产半合成青霉素的材料6 APA, 用基因工程来增强大肠杆菌的青霉素酰胺酶活性。将大肠杆菌的基因PBR 322 的质粒克隆化所形成的菌株, 其酶活力比原株提高50 倍, 从而提高6APA 生产能力。我国王以光利用基因重组技术对螺旋霉素产生菌进行改造, 增强了丙酰基转移酶的基因在螺旋霉素产生菌中的表达, 并提高了丙酰螺旋霉素的产量[5]。3.2 活性多肽类
盐城师范学院论文设计
在人体中存在一系列含量较低, 但生理活性很高, 而且在人体代谢过程中起着重要的调节作用的活性多肽类物质如激素等, 这些物质在临床上可以作为药物来治疗相应的因此类物质失衡而造成的疾病。此类药物的制剂多来源于各种动物的脏器, 生产方法复杂, 成本高, 个别产品还必须从动物的尸体中进行提取, 无法进行大规模工业化生产,自基因工程技术问世以来, 通过基因重组技术, 可以由微生物进行生产, 这是基因工程技术的最大成就之一, 以下是这类药物中比较典型的两个。3.2.1 胰岛素
Genentech 公司在1978 年, 由Goeddel 等学者应用基因重组技术开发出使用大肠杆菌生产人胰岛素。随着基因工程技术的不断发展, 生产胰岛素的工艺和技术也不断得到完善, 在临床上已经完全取代了由动物脏器提取得到的产品。目前, 我国新疆转基因羊已能够成功表达人胰岛素原[6] , 为胰岛素的生产开发了新途径。3.2.2 生长素
人类生长素临床用于治疗侏儒症和肌肉萎缩症, 传统制造方法是由人脑下垂体抽提精制而得, 其原料来源困难, 产量受到极大限制。全世界侏儒症患者中仅有1%可以得到治疗, 原因是生长素价格极其昂贵, 达每克5 000 美元。1979 年Genentech 公司由Goeddel 等学者应用基因重组技术首先开发出使用大肠杆菌生产人生长素,近年来还开发了以酵母菌来生产生长素, 其产量可达到1.4×106 ～4.7×106 分子/ 细胞。目前, 我国基因工程人生长素已研制成功, 并投入市场和用于临床使用。
除上述药物外, 运用基因工程技术生产的这类药物还有神经生长因子(PDGH)、人基底成纤维细胞生长因子、绒毛膜促性腺激素等。3.3 细胞免疫调节因子
基因工程技术用于细胞免疫调节因子的产品较多, 临床广泛应用于抗肿瘤和免疫调节等。近年来, 由于基因重组和细胞融合两大技术的进步, 加上高压液相层析技术、氨基酸序列分析装置以及蛋白质的精制和解析技术的改进, 使一些调节细胞免疫活性物质的研究和开发得到快速发展, 如干扰素(INF)、白介素(IL)、集落刺激因子(CSF)和肿瘤坏死因子(TNF)等。
干扰素是其中研究较为广泛, 技术比较成熟, 产业化较早的一个产品。第一代干扰素是从血液中进行提取而得到。据芬兰的K Cantell 报道, 处理23 000 L 血液, 所得纯度1%以下的干扰素不足100 mg , 所以产量很低。而且由于血源质量不能保证, 可能造成血源性传染病的传播。第二代干扰素是采用基因工程技术进行生产的, 其生产水平可达250 000
盐城师范学院论文设计
分子/ 细胞, 每升可含2.5 亿单位, 成本显著下降, 产品纯度很高, 含量可达90%以上[7]。目前, 已经商品化的基因工程干扰素有α、β、γ三种, 而且生产技术也在不断完善。俄罗斯科学家构建了以假单胞菌为载体的表达系统来生产基因工程干扰素, 与传统的大肠杆菌表达系统相比其培养周期短, 细胞易于破碎便于提取。随着基因重组技术的不断发展, 一些研究人员对干扰素基因进行改造, 构建靶向干扰素基因及表达载体。利用限制性内切酶分别从含有抗乙型肝炎S 抗原(HbsAg)人源单链抗体与人干扰素a 质粒中切出目的基因, 连接到pET 22b 质粒中, 构建成单链抗体靶向干扰素表达载体, 在大肠杆菌中表达成功[8]。3.4 疫苗
传统的疫苗是病源微生物的减毒或灭活物质, 但这些疫苗都不理想, 有可能发生回复突变, 恢复毒性;或者因为灭活不适当引起疾病流行。利用基因工程技术生产的新型疫苗, 可以克服传统疫苗价格昂贵、安全性能差等缺点, 能为目前尚无有效疫苗的某些特殊疾病如艾滋病, 提供有效的治疗手段。
第一个商品化的基因工程疫苗是抗人乙型肝炎病毒(HBV)的疫苗。我国大约有10%的人口受到HBV 的侵害, HBV 的感染通常还与特殊的肝癌(HCC)有着密切的关系, 每年全世界死于HCC 的病人有30 万左右。HBV 具有高度的寄主专一性, 只能感染人类和黑猩猩, 这意味着只能从肝炎患者身上才能获得有限数量的病毒, 供做疫苗使用, 而且从患者血液中提取制备的疫苗, 还有传染艾滋病的可能。利用基因工程技术生产的抗HBV 疫苗克服了传统疫苗的缺点, 质量和安全性高, 用量极少, 一般剂量为10 mg 以下, 接种3 次, 为普通药品用量的千分之一。1982 年P Valenzuela 等人将S 基因(HBV 表面抗原基因)的一个片段克隆在一种载体上, 结果在酵母中合成出来HBV 表面抗原(HbsAg)颗粒, 其产量达25ug/ L , 酵母表达系统现在已经能够大规模生产供给人类使用的重组肝炎疫苗[9]。
大约20 年前, 人们发现“裸露”DNA 注入体内能够诱发免疫反应, 科学家们进行了大量研究, 开发出了新型的核酸疫苗。所谓核酸疫苗, 是指将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA)直接转移到动物体内, 通过宿主表达系统合成抗原蛋白, 诱导宿主对该抗原蛋白产生免疫应答, 以达到预防和治疗疾病的目的[10]。现已开发出多种核酸疫苗, 例如: 流感核酸疫苗、艾滋病疫苗、狂犬病疫苗、结核病疫苗[11] 和乙型肝炎疫苗和戊肝疫苗等[12]。3.5 基因治疗制品
基因治疗在1990 年开始进行实验, 1993 年美国FDA 给人类基因治疗下的定义为:
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“基于对活性细胞遗传物质的改变而进行的医学治疗, 这种改变可以在活体外进行, 然后应用于人体, 或者直接在人体内进行”。因此,基因治疗存在两种方式, 即间接体内法和体内法。间接体内法主要是通过在体外进行基因转移, 筛选可表达外源基因的细胞, 然后再转移到体内;体内法则是直接在体内改变与修复遗传物质。随着分子生物学、基因重组技术的发展, 有关目的基因的获得方法已趋成熟, 但是, 目的基因的转移传递系统、目的基因的表达调控以及疗效和安全性还需进一步研究证实。目前, 基因转移系统主要是两类: 一类是由病毒介导的基因转移系统, 主要包括逆转录病毒(Rt)、腺病毒(Ad)、疱疹病毒(HSV)和腺病毒相关病毒(AAV)载体等。Naldini 等开发出一种基于HIV 的重组Rt 载体, 不需要辅助细胞, 能广泛感染各种非分裂细胞, 同时保留了能整合在宿主染色体上的特点。世界上第一例基因治疗所采用的载体即是Rt 载体, 治疗腺苷酸脱羧酶缺乏所致的严重联合免疫缺乏症(ADA-SCID)。另外一类是非病毒介导的基因转移系统, 包括脂质体、分子偶联载体、基因枪和裸DNA 等[13]。
另外, 反义核苷酸技术也应用于基因治疗, 尤其在抗乙肝病毒的基因治疗方面, 包括反义DNA、反义RNA 和核酶RNA 等。2001 年, Ro baczew ska 等首次通过静脉给予反义DNA, 选择性抑制北京鸭HBV 在鸭肝脏中的复制和表达, 证明了反义DNA 在动物实验中的有效性[14]。美国Viag ene 公司研究出一种被称为“艾滋病毒免疫制剂”,该药为一种鼠逆病毒与核心蛋白编码的基因序列和HIV 表面抗原RNA 结合产物, 在小鼠和灵长类动物试验中确定该药能诱导出强的HIV-特异性杀伤细胞。结束语
基因工程技术使药品开发发生了根本性的转变。传统的
药品开发方式是在大量的化学合成物质和微生物代谢产物中进行随机筛选, 得到其中的有效成分作为新的药物。采用基因工程技术开发新药, 是通过对致病机理的研究, 找到那些可用于治疗目的的有效成分以及其编码基因, 经过基因重组将其转入适当的载体, 大量表达其有效成分作为治疗药物。同时,基因工程技术给药品生产技术带来了革命性变化。过去一些生产困难的产品, 如激素、酶、抗体等一些生物活性物质, 通过基因工程手段可以高质量、高收率地付诸生产, 同时生产成本也大幅度降低, 提高了患者的用药水平和生活质量。
基因工程技术在传统医药不能有效治疗的一些疾病, 如癌症、艾滋病、遗传病等的诊断、治疗和预防等方面提供了有效的新手段, 并取得了一些重大的突破。如发现了致癌基因,可使癌症的早期诊断和治疗药物的开发成为可能。随着分子生物学和基因重组技术的发展, 我们相信这些严重危害人类生命的疾病, 在不久的将来会得到有效的预防和治疗。
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[参考文献] 1 吴乃虎.基因工程原理(上).第2 版.北京: 科学出版社, 2001.45 2 丁锡申.基因制药产业化发展概况.生物工程进展, 2001, 21(5): 4 3 张磊, 田莉.转基因动物制药发展现状及前景.天津药学, 2001, 13(1): 5 4 Gl ynis Giddings , 汪开治.利用转基因植物生产生物药.生物技术通报, 2001,(5): 36 5 王以光.基因工程技术在大环内酯抗生素及硫霉素改造中的应用.医学研究通讯, 2002, 31(2): 23 6 庄林根.制药新技术的发展与新世纪展望.中国药学杂志, 2002, 37(1): 1 7 王文仲.应用微生物.北京: 中国医药科技出版社, 1996.454～455 8 夏小兵, 成军, 杨继珍.抗Hb sAg 单链抗体靶向干扰素的构建及原核表达.中华肝脏病杂志, 2002, 10(1): 28 9 吴乃虎.基因工程原理(下).第2 版.北京: 科学出版社, 2001.376 10 李海星, 曹郁生, 陈燕.核酸疫苗研究, 药学进展, 2002, 26(4): 220 11 李学荣, 余新炳.核酸疫苗及其免疫机制研究.中国人兽病共患杂志, 2000, 16(6): 22 12 徐菲莉, 赵飞审.核酸疫苗及其在传染病学中的应用.地方病通报, 2000, 15(3): 87 13 刁勇, 王广基, 许瑞安.基因治疗研究进展.药学进展, 2001, 25(1): 12 14 杨光, 司建华.抗乙肝病毒基因疗法的研究现状.国外医学情报, 2002, 23(8): 10
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