实验室标本处理

第一篇：实验室标本处理

实验室标本处理、消毒和卫生防护制度

检验科集中了医院患者送检的人体血液、体液、分泌物、排泄物等标本，这些标本大多带有不同种类的病原体，在检验过程中极易引起对工作人员及环境的污染，并随着检验报告单进一步传播。而其中医疗废弃物的排放更是污染环境的元凶。因此，在检验科做好标本处理、消毒和卫生防护，是控制医院感染的一个重要环节

1环境

（1）工作场所布局合理。检验科各室采光及通风良好，以保证室内与室外空气对流。根据工作场所可能受污染的程度，分为清洁区、半污染区、污染区。

（2）工作人员进入实验室须穿工作服，必要时戴工作帽、口罩，穿隔离衣。实验室不得存放生活用品，不得有生活垃圾。

（3）重点部门均配有紫外线灯管，定时进行空气消毒。专职消毒监督员检查落实情况，并予以记录。

2做好培训，提高认识

（1）组织全科人员参加医院主办的各种医院内感染知识讲座，重点学习医院对检验科预防感染管理的要求，从思想上和理论上提高对消毒、防护和医院内感染的认识。掌握消毒、防护基本知识和技能，规范医疗行为，人人重视消毒、防护的每个环节。

（2）提高自我健康保护意识，掌握工作中的防护技术。

3落实消毒隔离制度，防止交叉感染

物体表面

工作台面实验前、后用含氯消毒剂擦拭2次，地 面用含氯消毒液湿拖，上、下午各1次，并根据清洁区、半污染区、污染区分别使用不同标识的拖把。

工作人员的手

由于采血的需要，工作人员的手必须与患者接触，并且所有标本都要通过检验师的双手进行检测。因此要求所有人员在采集、检测、处理标本时戴一次性手套，操作完后按“六步法”正确洗手，并定期对工作人员的手、物体表面、空气进行微生物监测，发现问题及时纠正。

门诊静脉采血

坚持一人一巾、一针、一管、一止血带；微量采血，也做到一人一巾、一针、一管、一片。给每位患者采血前洗手或手消毒。采集标本时不得污染容器外部，运送过程中防止容器破碎和标本外溢，以确保环境安全。

4医疗废弃物的正确处理

（1）使用后的一次性针头存放在利器盒中集中处理；一次性注射器和使用后的一次性采血管应定点存放，由专职人员运送到医疗垃圾回收站集中处理。

（2）医疗垃圾存放在无渗透、无破损的黄色塑料袋中，由专职人员存放到医疗垃圾回收站集中处理。

报告单的处理

为防止病原微生物随着检验报告单进一步传播，报告单要求采用微机远端打印，非打印报告单送出前用移动式的紫外线杀菌车进行消毒。

第二篇：标本处理

[QUOTE=锦瑟]

病 人 的 准 备

有很多检验项目，如果病人准备不当，分析结果则无价值，甚至于造成临床上的混乱。医生、护士和检验人员有责任将该项检验病人准备 的要点，用有效的方法告知病人，嘱病人遵照执行。

（一）生理因素的影响：

1．运动：强烈的肌肉运动明显影响体内代谢，暂时的变化是血清非酯化脂肪酸迅速下降，继而上升；丙酮酸、乳酸亦接着升高，后者可 高达300%（3倍）。由于呼吸急促，可使Pco2下降，而PH值升高。持续较长时间的变化，是由于肌细胞酶的释放引起血清CK、AST、LDH、ALP的升高，CK的峰值在11小时后，可达运动前的1倍，持续60小时后才恢复到原水平。运动对RBC、W BC、Hb测定明显影响，可造成假性升高。运动对检验结果的影响程度与个体平时有无体育锻炼及有无疾病有关。

为减少运动对检验结果的影响，一般主张在清晨抽血，住院病人可在起床前抽血，匆忙起床到门诊的病人应至少休息15分钟后采血。

2．精神因素：紧张、情绪激动可影响神经—内分泌功能，致使血清非酯化脂肪酸、乳酸、血糖等升高。

3．饮食：进食后对某些检验项目有明显影响，餐后对CHE、CK、GLU、TG等影响非常显著，但对TP、Aib、ALT、AS T、ALP、r—GT、LDH、AMY、Ca2+、BuN、CRE、choI、TBiL、DbiL等指标无明显影响。建议最好在 早晨空腹抽血，必要时在进食4—6小时后抽血，血脂检查必须空腹12小时后抽血（而且检查前三天禁食肉、蛋、奶），紧急及特殊病 人可根据需要随时抽血。

4．体位及采血部位：体位或采血部位的改变可引起某些检验项目指标的显著变化。站立（或用止血带）时水分会从血管内向组织间转移，大分子物质与大颗粒物质（如细胞）不能滤过而有一定程度的浓缩，但不影响低分子量物质（如GLU）。Staland（斯特兰德）比较了不得17项生化指标在立位与卧位的差别，其中有12项立位时高于卧位，具有显著性差异（P〈0·05〉，这些项目是：K +、Ca2+、P3+、Fe2+、TP、Aib、AST、ALP、ACP、Tchol、总脂。Na、Cl、BuN、Cr、GLU 差别不明显。国内研究也证实了体位变化对血脂成分的明显影响。为此建议，统一用坐位、不使用止血带来采血，以减少对 某些项目的影响。另外，中国血液病研究所杨天楹教授就耳血和指血采血对血液细胞成分的变化进行研究，认为手指（以无名指）血细胞 成分与静脉血接近，而耳垂血与静脉血具有非常显著差异（P〈0·01〉，差别最大可达2—3倍。建议进行血细胞计数时一律用手指 血。

5．时间：在一天之中，人的代谢总是波动的，其代谢率并非是一个水平。因此在一天中，不同时间对某些项目检测要有明显影响，如在 进行RBC、WBC等计数时，上午、下午波动范围很大。因此，为了反映病人的临床状态，建议下次复查时应在上次检查的同一时间进 行。

（二）药物的影响：

药物进入人体内引起的物理和化学变化是临床检验结果错误（非病理性异常值）的主要因素之一。药物本身或它的代谢产物，可以对化学 测定的任何步骤产生干扰。干扰可以由于药物本身物理性质，如药物本身有颜色或能发出荧光，或由于药物的化学性质，如有强还原性、与蛋白质结合成复合物及对酶的抑制作用等。药物也可以通过它的生理作用、药理及毒理作用改变生化参数。这类影响有的是治疗上需要 的，但有的是不需要的，即通常所说的副作用。

任何试验都有其固定的化学反应原理和条件。因药物的参与使反应和检测条件发生了改变，直接影响了结果的准确性。例如：先锋霉素类 药物可使血Cr比色测定时的最大吸收峰由505nm变为535nm而干扰Cr的测定，且药物的量与Cr的正误差呈正相关（药量越 大误差越大）。Vit—c对AST为正向干扰，对CK、LDH为负向干扰，且随Vit—c浓度的增高干扰越大。止血敏可使血清T G显著降低。安乃近对血清LDH、Pi、Cr呈正向干扰，对TC、TG、GLU、UA则呈负干扰。Gascon研究认为，病人给 予安乃近2h后血液中安乃近仍然干扰测定，因此建议在应用安乃近6h后采血测定。长期口服避孕药的妇女，由于肝酶的诱导合成增加，可使转氨酶、转肽酶及TG升高。近年来，利用氧化酶催化过氧化氢，以Tinder生成反应检测体内多种代谢物质浓度的方法已有 多种，如GLU、TC、TG、HDL—c等。由于某些药物有较强的还原性，易于反应中过氧化氢起作用，降低红色醌亚胺生成致使测 定结果偏低。如：

（1）葡萄糖+H2O+O2葡萄糖氧化酶葡萄糖酸+H2O2

（2）2H2O2+4-AAP+酚过氧化物酶红色醌+H2O

这类药物有Vit-c、Vit-B6、V-E、巯甲丙脯酸、地奥心血康、安乃近、酚酸乙胺、盐酸氯丙嗪、复方丹参、氨茶碱、左旋 多巴等。

日本学者研究认为，药物投给后，在血液中的最高浓度，可由尿中浓缩100-1000倍排出体外。目前常用的尿试纸试验，一直是限 于一定区域内的颜色变化来定性测定为阳性或阴性，异常着色尿对此有明显干扰。临床治疗药物所见的着色尿，常见的药物有：苯妥英钠、左旋多巴、核黄素、阿霉素、正定霉素、利福平、灭滴灵等。

青霉素对磺酸法、试纸法测定尿蛋白产生不同干扰，对于尿蛋白阴性可引起假阳性，而对于阳性者则可引起假阴性反应

不同浓度的Vit-c对尿糖、潜血、尿胆原等也有不同程度的干扰作用。

长期静脉点滴的病人留取标本时可使标本稀释，造成某些项目结果偏低。又因静点时高浓度的药物进入标本中，使许多检验结果发生巨大 变化。入：K+、Na+、Cl-、Ca2+、CO2-cp、GLU等，可因静点得到高出正常值1-10倍的结果。药物还可影响某 些酶的活性，如非那西酊可引起ALP、r-GT活性升高。杜冷丁类药物可引起唾液型淀粉酶活力上升，而致总淀粉酶活力升高。许多 药物的副作用使肝、肾、造血功能发生改变而引起检验结果异常。这种影响一旦出现，即使停药也不会很快使检验结果恢复正常。如大量 使用庆大酶素及抗肿瘤化疗药物时，常给肾脏造成损害，使尿中出现蛋白、管型等异常结果。有许多种药物，如红霉素、磺胺类、对氨基 水杨酸、性激素等50多种药物可引起肝功能异常等。因此当临床医生填写检验申请单时，一定要了解病人的用药种类和时间。用量较大，时间较短对检验结果有干扰，个别药物干扰时间还会更长。当检验结果与临床症状不符时，应结合分析这种现象产生的原因及了解纠正 的办法，特别应了解的是药物对哪些项目有影响。护士应避免在静点时和用药4h以内采取检验标本，必要时停药后再查，以防药物的干 扰作用。

[QUOTE=锦瑟] 标 本 的 采 集

要想测得的检验结果真实地反映病人的临床状态，送检标本的正确与否是一个关键因素。如果标本不符合要求，检验仪器再先进，技术再 好，测得再准确，其结果也是错误的。据统计，约有半数以上的异常结果，是由于标本不符合要求造成的。其常见的原因有：

1．标本采集不正确：

（1）应当空腹抽血但是实际上病人已经进食，这时候TG、CK、chE、GLU等检验项目有明显影响。

（2）病人输液过程中，从同侧肢体抽血，甚至从输液管中取“血”，抽出来的有一半是输进的液体，严重影响检验结果。

（3）抽血量不准确，如ESR测定，按要求抗凝剂与血液比例为1：4，总量为2·0ml，但实际工作中，很多标本不合格，不是未 加抗凝剂就是量不准（最多见是血量不足），使结果波动很大。

（4）尿标本留取不准确。如留取24h尿标本时，不按要求留取，甚至估计尿量，对生化指标定量及肌酐清除率影响较大。

（5）精液标本应全量收集于干燥、清洁的容器内，但经常遇到的是收集在避孕套内，致使大量精子死亡，引起误会等。

（6）血培养应在发热初期或发热高峰期采血。一般要求选择在应用抗生素治疗之前，对已用药而不能终止的病人，也应在下次用药之前 采血。但实际工作中，时常遇到边输注抗生素边采血的情况，造成血培养阳性率大大减低。

（7）尿培养一般主张导尿，但多次导尿易引起逆行感染，故目前常采用中段尿。但经常遇到不按要求留取标本，致使培养出多种杂菌生 长而无法报告结果。

当然，还有其它不合要求的标本，不一一列举。

2．标本溶血：

溶血是临床生化检验中最常见的一种干扰和影响因素。除了常见的红细胞破坏外，血小板、白细胞等血细胞破 坏释放的某种成分亦可干扰或影响生化指标的测定。

溶血干扰的机理有三种：（1）血细胞内高浓度物质逸出，使血清（浆）分析物浓度增加。不难理解如果血细 胞中某一分析物浓度大大高于血清，则溶血无疑会导致血清中该成分浓度的增高。例如：RBC内与血清某一成分的比值：精氨酸156 9·2/

1、LDH

139·9/

1、醛缩酶135/

1、AST38·3/

1、丙酮酸激酶205/

1、K+20/

1、Cr18/

1、叶酸16·7/1

CK15·5/

1、Zn2+10·7/

1、等。（2）Hb对分光光度法测定中吸光度的干扰。溶血能引起可见光谱的短波长段（30 0-500nm）的吸光度明显增加，而影响测定结果。（3）某些细胞成分对化学反应的干扰。如血清CK动力学法测定中因RBC来 源的腺苷酸激酶（AK）参与其指示反应而使CK结果假性增高。溶血可滞血清中LDH、ACP、CK、ALT等酶随溶血加重而升高 ；使ALP、r-GT的活性随溶血加重而降低，但机理尚不清楚。溶血对酶以外的生化指标，除K+、BIL最受干扰外，对TP、A ib、Ca2+、Na+、Cl-、Fe2+、Pi3+、TC、TG、HDL-c、Cr、BuN、GLU、UA等无明显影响。溶血 还可影响乙肝五项标志物测定，对ELISA双位点一步法易产生假阳性，对竞争抑制法易产生假阴性，但对经典的两步法影响不大。

标本溶血多是由于注射器不干燥、不清洁，抽血后未拔去针头直接注入试管内等原因造成。由于血液内某些化学物质在血清（浆）与红细胞内分布不同，有的差别很大，因此采集 标本时应严防溶血。

三．标 本 送 检

有些标本采集后应立即送检，如血NH3、CO2-cp、血气分析等，取血后应该在30分钟呢测定。目前最大的问题是GLU，取血 后室温放置，由于糖酵解作用，每小时可降低6-11%，CK、BIL、URO、OB均可因分解或失活而明显降低，而血清中的K+、Cl-、Pi3+、AcP、NH3、NiT等均可因细胞内外的转移代谢显著增高。有时对不同的测定方法干扰方向可能相反，如T G抽提法随放置时间结果 偏低，而酶法则增高，前者因TG分解所致，后者是由于磷酸分解产生甘油所致。

四．标 本 处 理

许多检验项目在正式分析前需进行预处理。及时而适当的标本处理是每一个检验者必须熟知和遵循的，如血GLU测定需要及时分离血清，防止细胞作用使塘发生酵解；电解质测定亦需要及时分离血清，尤其是K+，防止K+从细胞内向细胞外转移；血氨、血气分析应及时 操作，即使是及时放入冰瓶中也应尽快分析。做CO2-cp时，抽血后应尽量避免与空气接触过久，防止血液中的二氧化碳向空气中逸 散，以保证结果的可靠性。血性胸腹水、脑脊液等在测定蛋白质等生化项目前，必须先行离心，细菌培养需根据不同要求和目的，选择合 适的培养基及时接种，防止细菌污染，提高细菌检出率（特别是厌氧菌）和准确率。

抗凝剂的选择是检验质量保证的重要环节。有资料表明，血清与血浆多个指标的测定存在差异，甚至得到与实际相反的结果。凡需全血或 血浆检验的项目标本，要选择合适的抗凝剂，如草酸钾能抑制LDH、AcP、和AMY的活性，亦不能用于Ca2+、K的测定；ED TA不能用于Ca2+、Na+和含氮物质的测定；肝素除了对个别项目如K+、LDH、r-GT、AMS有影响外，对其它项目影响 不大。[/QUOTE]

第三篇：实验室标本接收

实验室标本接收、登记、保存与使用制度

为了确保以病人为中心,以质量为核心,根据检验科工作性质，现对标本管制做如下规定:

1、样品接收程序 1.1、接收程序：

1.1.1正常白班标本 每天7.30由护士工作人员接收服务中心送检病房的样本。通过lis系统逐个扫描标本信息纳入微机程序保存。纳入结束后将其名单打印一份交给送检人员双签备存。并按检验项目直接摆放在各室的标本框内。

1.1.2急诊白班标本 送检人员直接将急诊标本送采血室，并且亲自在登记簿上填写标本信息，然后由采血室人员送到各室检测。1.2、验证 ：进入各实验室的样本在进行操作前,工作人员应再次认真查对姓名,联号,住院号,病区床号,项目等对不符合要求者应作记录,并及时通知采样科室,正确及时地补采样,以免延误病人的检测结果报告,对书写不清楚的申请单, 当事者要及时与病房联系(可电话),明确受检 者姓名,住院号,性别,年龄,病区, 床号和检验项目等。

1.3、转送 ：在查对过程中一旦发现有其他实验室(包括病理科)或本科各实验室的样本,要提高责任性,及时地转送(可电话通知)有关实验室(尤其是争论急诊项目)切勿延搁样本,延误检测,影响检验结果和报告时间,对人为造成的样本遗失, 漏检 和由之延误检测违反承诺限时报告引起病人纠纷和投诉, 将追究当事者和当事实验室责任。急诊标本及各病房零散标本：由采血室人员登记并转送相关实验室 1.4、外单位送检 ：外单位送检的样本,一律登记后,再转交各实验室检测, 报告结果由检测者传真发出或由服务台人员转发。

1.5、标本放置 ：接收后的样本须统一放置在固定部位并有明显标志的样本盒中, 以便其他实验室的同志来拿取各实验室对如何转送和取样本应有明确的规定,包括定时定点,由检测实验室同志询查收集, 对超时样本要求(急诊样本除外),必要时通知和催促有关实验室的同志来拿取, 并作记录。

1.6、多张检验单标本 ：凡有两张以上的检验申请单(包括其他实验室或外送兄弟医院实验室作检测以及本科不同实验室检测的项目)原则上要分装各管, 随检验申请单一起分别放置各样本盒 ,对采样困难者要主动跟踪样本,并作详细记录以免漏检,分清责任。

1.7、特殊标本处理 ：对暂不检测的项目和超规定时间的样本,要随时登记和交班,以免漏检, 遗失和延误检验,对没有登记实验室和当事者,一旦发现有此样本的差错发生,一律追究责任。对特殊样本或特殊病人的样本,实行“首接”负责制, 所谓特殊样本是指难于采集的样本,以及特殊病人的样本一律实行“首接”负责制,无论那位工作人员(包括进修生和实习生,违者根据实际情况分别追查当事者或带教老师责任)一旦收到样本后,均须负其责任,不得以任何借口推托, 及时和正确保管和转送样本到有关实验室或有关人员,同时作交班记录和双签名。

2、样品使用

2.1.将当天送来的标本，根据编号的基本原则，给当天的标本编好号，每个样本的每个检测项目对应一个唯一的编号。2.2.每张单和对应的样品管上条码号标记相同。2.3.在lis上每个样本的记录都包括以下信息：接收时间、医院、科室、医生、病人信息、实验结果（当天实验后填上）、发报告时间、样本采集时间等。

2.4.微生物样本将编号完毕的标本，分别接种于血平板，营养平板，麦康凯平板、沙保弱氏平板，35度18－24小时孵育后，按卫生部操作规程进行系统鉴定。并将结果作好记录，再一一把实验结果填入相应化验单。

3、样品保管

血液样本每天使用后不能立即处理，要留至该样品报告结果以后，按编号摆放样本储存盒内，放入样本储存冰箱冷藏2-8℃7天后处理销毁。尿液、痰液、脑脊液、胸腹水、粪便在结果报出后当天销毁。

4、样品处理及销毁

将各实验室所有废弃物消毒后装入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，将垃圾带出实验室交给医院集中进行无害化处理。

5、样品运送要求

对于各病房及门诊需要送检的标本要严格按照无菌、安全、及时的原则由陪检人员运送至实验室。标本应置于被承认的、本质安全、防漏的容器中运输。

第四篇：处理病理标本

怎样处理病理标本

制作时将部分有病变的组织或脏器经过各种化学品和埋藏法的处理，使之固定硬化，在切片机上切成薄片，粘附在玻片上，染以各种颜色，供在显微镜下检查，以观察病理变化，作出病理诊断，为临床诊断和治疗提供帮助。

1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：

(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。

(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。

(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。2．固定

(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。

(2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。(3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。

3．脱水透明标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块内的水分置换出来，这一过程叫做脱水。无论是用石蜡切片，还是用火棉胶切片，都必须除去组织中所含水分，因含水组织与石蜡、火棉胶等包埋材料不相容，常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。脱水的步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。

丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作用，在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶于石蜡，还要经过一个能溶于石蜡的溶剂替代过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水杨酸甲酯等。4．浸蜡、包埋

(1)使石蜡浸入组织中，取代组织中含有的透明剂。

(2)包埋：将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中，石蜡凝固后，组织即被包在其中，称蜡块，此过程称为包埋。5．切片和贴片(1)修整蜡块：可视其组织的大小，在组织边缘约0.1～0.2cm处，切去余蜡部分，否则易造成组织皱缩不平。

(2)准备好切片用具：切片刀、毛笔、眼科镊子（弯）、漂烘温控仪(3)安装蜡块：将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上。

(4)安装切片刀：将切片刀安装在切片机的刀台上，把刀台上的紧固螺丝旋紧，使切片时不产生振动，能保持一定的切片厚度。

(5)切片的厚度：切片机的厚度调节器上刻有0～50μm或0～25μm，可任意选择其厚度，石蜡切片的厚度一般在4～6μm。(6)切片

(7)铺片：用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在40～45℃的水面上，借水的张力和水的温度，将略皱的蜡带自然展平。

(8)贴片、烘片：待切片在恒温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水，置入60～65℃恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片15～30分钟，脱去溶化组织间隙的石蜡。

6．染色和封片常用的染色方法是苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin）染色法，简称H.E染色法。这种方法对任何固定液固定的组织和应用各种包埋法的切片均可使用。苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色，如细胞核中的染色质等；伊红是一种酸性染料，可使组织中的嗜酸性物质染成红色，如多数细胞的胞质、核仁等在H.E染色的切片中均呈红色。

H.E染色程序如下:脱蜡、脱苯、复水、染色、脱水、透明、封固

常规苏木素染色中的对比染色是用伊红,近年来在英、美国家的一些实验室则采用焰红（phloxine）,此外也有用桔黄G（OrangeG）、比布里希猩红(Biebrich scarlet)、波尔多红(Bordeaux red)等作为对比染色。伊红为染胞质、胶原纤维、肌纤维、嗜酸性颗粒等常用的染料。

第五篇：检验标本采集处理

一﹑临床常用检验项目的标本采集和处理

（一）血常规检验标本

一般用EDTA-2K（EDTA-K2-2H2O）1.5～2.2mg/ml抗凝（EDTA抗凝管）采血。采血注意事项为：

1.采血后立即上下颠倒混匀（5-10次，不可用力震荡）；

2.应按抗凝管刻度准确采血至2ml；3.采血后应尽快送检（需显微镜观察形态的标本采血后 应及时推片固定，因为超过2h WBC形态会发生改变）。

（二）红细胞沉降率（血沉，ESR）测定标本

静脉采集枸橼酸钠（109mmol/L，即32.06g/L）抗凝血（枸橼酸钠抗凝管采血）。注意事项：

1.采血后立即上下颠倒混合5-10次；

2.单独采1管血,准确采血至2ml（抗凝剂：全血 = 0.4 ：1.6）； 3.采血后应尽快送检（必须2h内检测）。

（三）凝血检测（PT、APTT、TT、FBG、DD）标本

静脉采集抗凝血（最好真空负压系统采血），抗凝剂用枸橼酸钠（109mmol/L，即32.06g/L,抗凝剂:全血 = 0.2：1.8）。采血注意事项：

1.空腹采静脉血（餐后脂血影响检测结果，使因子Ⅶ活化，导致PT延长）；

2.采血时患者应保持平静状态30min以上（剧烈活动可使因子Ⅷ活化，APTT明显缩短）； 3.应单独1管血；

4.必须准确采血至刻度线2.0ml；

5.采血后应立即上下颠倒混匀5-10次，不可有凝块； 6.采血后应尽快送检（必须2h内检测）。

（四）血型 与 血交叉标本

为EDTA-2K抗凝血。采血注意事项：

1.最好血型与血交叉各采1管血（要求保留血样）； 2.采血量分别为1.0ml和1.0～2.0ml； 3.采血后立即上下颠倒混匀（5～10次）。

（五）尿液常规检查标本

１.尿液常规检查标本应按以下原则进行采集：

（1）新鲜晨尿最佳，门诊病人亦可留随机尿；

（2）尿液采集于干净带盖容器中，不可使用未经洗涤的装药物或试剂的器皿；

（3）避免混有经血、白带、精液和粪便；

（4）尿液标本冰箱可保存6～8h，但细胞等有型成分会有破坏，会有结晶析出；

（5）尿液成分定量检查应留取24h防腐混合尿100～200ml（须记取24h尿液总量）；

（6）根据不同检测目的选择不同的防腐剂：临床最多用的尿液防腐剂为:①甲醛（formalin），用于尿液有形成分检查，浓度为400mg/L尿液即40%；②甲苯（toluene），常用于尿糖和尿蛋白等化学成分的定性或定量检查，5-20ml/L尿液；③浓盐（hydrochloric ａｃｉｄ），用于定量测定尿１７－羟、１７－酮、肾上腺素、儿茶酚胺和尿钙等，浓度为１ｍｌ/L尿液。

２.尿液常规检查标本采集方法：

（１）晨尿最好（安静状态下留取清晨第一次尿，浓缩，无其他影响）；

（２）随机尿较常用（随时留尿，适用于门诊和急诊病人，结果易受多种因素影响）；

（３）清洁尿（中段尿、导管尿、膀胱穿刺尿，用于病原微生物学培养、坚定和药敏）；

（４）24h尿（用于尿液成分24h定量检查分析，一定要教会病人留取24h尿正确方法）。

（５）３ｈ、１２ｈ等计时尿和餐后尿等特殊实验尿，则应按医嘱要求进行留尿。

（六）粪便常规检查标本

1.一般应为新鲜的自然排出的粪便３～５ｇ，必要时可肛拭子采取； 2.送检粪便应盛于洁净带盖的塑料盒中送检，要做好标记；

3.要选取粪便的脓、血、黏液等异常成分进行检查，表面无异常时应从粪便表面、深处及粪端多处取材；

4.检查蛲虫卵需用透明塑料薄膜于半夜12pm或早晨排便前，于肛门周围皱襞处拭取标本，并立即送检；

5.检查血吸虫卵时应取黏液、脓、血部分，如须孵化毛蚴应留取不少于30g的粪便，并尽快送检，必要时留取整份粪便送检。

6.检查痢疾阿米巴滋养体时，应床边留取新排出的粪便，从脓血和稀软部分取材，并立即保温送实验室，并且实验室接受标本后应立即进行检查。

7.做便隐血试验时，应嘱病人检查前3d内禁食肉类、含动物血的食物及某些蔬菜，禁服铁剂和维生素C等对实验有干扰作用的药物。

（七）浆膜腔积液检查标本

（1）浆膜腔积液标本一般由医生无菌穿刺采取；

（2）送检标本量：理学检查、化学检查、细胞学检查各留取２ml；细菌学检查用 无菌管采集标本，厌氧菌培养留取１ml，结核菌检查留取１０ml。

（3）标本采集后必须立即送检（否则可出现细胞变性，标本凝集，细菌溶解）；

（4）用于细胞学检查时，可在标本中加适量EDTA盐抗凝，但还须留取１管不加抗凝剂的标本用于观察积液的凝固性；化学检查标本宜用肝素抗凝。

（八）临床化学检验标本

临床化学检验多用非抗凝血标本，有条件应使用真空负压采血管。临床化学检验血标本采集主要注意事项是：

1.多项化学检测一般可采1管血；

2.采血量视检查项目多少不同而异，单通常为4.0～5.0ml； 3.如果检测项目不是很多，生化和免疫也可以采1管血；

4.多项检测同时采血时应按下列顺序采血：①血培养；②无添加剂管；③凝血管；④有添加剂管的顺序为：a橼酸盐管；b肝素管；cEDTA管；d草酸盐/氟化钠管。

5.不论是抗凝血还是非抗凝血，为了缩短血清或血浆与血细胞的接触时间，以避免由此而影响结果的准确性，血液标本收集后，都必须尽可能早地将血清或血浆从全血中分离出来。从血液标本采集开始，必须在2h内将全血处理为血清或血浆。

（1）血清（非抗凝血）：采血后标本必须颠倒混合5～10 次，22～25ºC（室温）15～30min后可自行（自发）完全凝固，禁用木棍和玻棒等剥离凝块；冷藏标本凝集较慢，加促凝剂时凝集加快。

（2）血浆（抗凝血）：应采用抗凝管采血，采血后立即颠倒混合5～10次，采血后数min内可离心分离血浆。

（3）冷藏标本：用于稳定血液中温度依赖性成分的（抑制细胞代谢），标本于2-8ºC冷藏（标本采集后立即置冰屑或冰水混合物中，冷藏必须充分）；标本需冷藏的测定项目有：儿茶酚胺、胃泌素、甲旁素、PH/血气、NH3、乳酸、丙酮酸等。，全血标本一般不冷藏，血钾测定标本冷藏不得＞2h（4）代谢抑制剂和防腐剂的应用：用于抑制细胞代谢。血标本中加入氟化钠后，血细胞未分离情况下血标本中Glu，22～25ºC稳定24h，2～8ºC稳定48h；氟化钠不适用于新生儿及儿童的Glu测定（因儿童PCV高，细胞糖酵解难以控制）；氟化钠-麝香草酚混合剂不适合酶学检测（因氟化钠-麝香草酚混合剂能抑制酶活性）；甲醛—草酸钾抗凝保存剂不适用于血糖测定。

（5）实验室离心标本的准备：不主张用小棍强行剥离凝血块(诱发溶血)；必须剥离时应动作轻柔；真空采血管应一直保持封闭垂直位置直到离心取出血清或血浆。

（6）关于标本离心（指标本处于离心机里的一段时间）

①离心时间和相对离心力：离心时间为5～10min；相对离心力（RCF）为1000～1200×g；

②温度控制离心：离心时产热，不利于分析物稳定。温度依赖性分析物（ACTH﹑环腺苷酸﹑儿茶酚胺等）离心温度应控制在4ºC；无特殊温度要求的分析物离心温度在20～22ºC；冷藏运送标本应利用温度控制离心机离心。

③再离心：最好一次完成标本离心。普通采血管二次离心时必须在首次离心后短时间内完成；带分离胶的采血管不可以二次离心。

（7）离心后标本处理（指标本离心后和用于检测的血清或血浆被取出 一定量之前）(1)血清/血浆与接触的细胞/凝块应于采集后2h内尽快分离；(2)分离出的血清或血浆的储存：

①8h内可以储藏于22ºC，8h以上储藏于2～8ºC 48h以上储藏于－20ºC；

② 标本不可反复冻融（只能一次，且不可储藏于无霜冰箱）；

③分离胶上面的血清或血浆，可保存2-5天；

④用非凝胶分离物质时，离心后必须立即移开血清或血浆；

⑤ 血清或血浆必须密闭保存（置于带塞或封口的试管中）。

（九）血气分析标本

血气分析标本为动脉（股﹑肱﹑挠动脉）抗凝全血，抗凝剂为肝素钠（0.05mg/ml，即1000u/ml，用9g/L的生理盐水配制）。标本采集注意事项为： 1.采血一定要用厌氧技术（让血液尽量少的与空气接触）；

2.采血前先吸入足够量液体肝素抗凝剂于注射器内，使其尽可能湿润注射器内壁，然后排出液体肝素，留下注射器死区内液体肝素约0.1ml即可； 3.采血量0.5～1.0ml（最好2.0ml）；

4.抽出的血液不能有气泡，如有气泡应立即排出；

5.标本采好后立即封闭注射器针头，用两手挫动注射器针筒使标本混匀后立即送检。

（十）微生物学检验标本

微生物学检验标本的正确采集﹑运送及处理，与细菌的培养﹑鉴定结果有十分密切的关系；对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS ﹑炭疽﹑肺鼠疫等）患者采集标本时，必须按国家规范化要求严格注意生物安全；医生﹑护士﹑检验人员均应重视微生物学检验标本正确采集的有关问题，并有责任向患者及其家属进行正确采集标本的宣传和指导。1．微生物学检验标本采集、运送、验收和处理注意事项

（1）标本采集

1）申请单标记必须清楚（姓名、性别、年龄、病例号、临床诊断、标本来源、采集时间、检查项目、抗生素应用情况等），以便实验室能够合理选择培养环境和培养基； 2）尽量在抗生素应用前采集标本，以避免漏检和提高阳性检出率； 3）标本采集应严格执行无菌操作；

4）咽拭、肛拭、伤口拭子等拭子标本，应插入运送培养基送检；

5）痰、尿液、伤口拭子等混有正常菌群的标本，不可放入肉汤培养基内送检； 6）采集标本的容器必须经灭菌处理，但不可用消毒剂。

（2）标本运送

1）标本采集后应尽快送到微生物实验室；

2）标本采集后在室温下超过2h未送达实验室，可视为不合格标本。

（3）标本验收

1）实验室只能接受和处理合格标本；

2）实验室对不合格标本退回必须说明原因，并应及时与临床联

（4）处理

根据检验目的结合临床资料选择合适的培养基接种标本；混有正常菌群的标本应做定量细菌培养；不能精确定量或常规定量操作较困难的痰、伤口拭子等标本，应分离出优势菌做细菌鉴定和药敏实验，同时注明细菌量化指标；抗菌药物治疗的标本，必要时应加入某些物质以中和药物对细菌的抑制作用。2．微生物学检验标本采集和处理

（1）尿液标本采集和处理 通常留取晨起第一次尿液（此时尿液在膀胱内储存4h以上）；尿液采集后要及时送检，并保证2h内接种；不能及时送检和接种时，尿液应置4-8℃冰箱保存；冷藏标本应于8h内接种；怀疑沙门氏菌感染时，应于发病2w左右采集尿液，怀疑钩端螺旋体感染时，应于发病后2w采集尿液，上述时间此时阳性率高。尿液微生物学检验标本采集方法如下。1）中段尿采集法：成年男性和女性分别用肥皂水清洗尿道口和外阴部，再用灭菌水冲洗尿道口，然后排尿弃去前段尿液，于带盖的无菌盛器中留取中段尿液5～10ml 2）导尿法：用导尿管导取10～15ml尿液，置灭菌容器中送检；长期留置导尿管者应更换新导尿管留尿；留置导尿时，用无菌消毒法消毒导尿管外部及导尿管口，用无菌注射器通过导尿管抽取尿液送检（不可采集尿液收集袋中的尿液送检）；

3）集尿法：怀疑结核分枝杆菌感染时，于清洁盛器中留取24h尿液，取其沉渣10～15ml送检；

4）耻骨上膀胱穿刺法：培养结果与临床病情矛盾时可采用此法，一般较少应用； 5）肾盂尿采集法：必须由临床医生采集。

（2）粪便标本采集和处理 1）采集时间：

①腹泻患者于急性期，尽量在用药前采集粪便；

②伤寒患者于发病2w以后采集粪便；

③怀疑霍乱时立即采集粪便送检。2)采集方法：

① 自然排便：取新鲜粪便的黏液、脓血、或絮状物等有意义成分，2-3g或1-2ml，盛无菌容器内或置于保存液或增菌液内送检；

②直肠拭子：用于难以获得粪便或排便困难的患者和婴幼儿，标本采集后插入灭菌试管内送检。

（3）痰及下呼吸道标本采集和处理 1）自然咳痰法：

① 晨痰为佳；

② 先冷开水漱口清洁口腔和牙齿；

③ 再用力咳出呼吸道深部的痰；

④ 痰量不得少于1ml；

⑤痰咳出困难时可先雾化吸入NaCl溶液（100g/L，加温到45℃）使痰容易咳出。2）小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭子深入咽部，小儿因压舌板刺激引起咳嗽，喷出的肺或气管分泌物粘在拭子上可送检。

3）支气管镜、支气管穿刺、支气管肺胞灌洗等采集法：此采集方法必须由医生操作。

（4）血液及骨髓培养标本

1)抗生素治疗前，严格无菌静脉采血8～10ml（儿童1～4ml）；

2）无菌注入专用培养瓶（成人、儿童、需氧菌、厌氧菌、L型菌不同培养瓶）中送检； 3）如已用抗生素不能停用时，可于48h内分别于下次用抗生素之前，采取6份血液标本送检；

4）必要时可需氧菌、厌氧菌（占10%）和L型菌同时培养；

5）疑为心内膜炎时，为提高阳性检出率，可酌情不同部位、不同时间，多次采血或动脉采血进行培养；

6）必要时可取骨髓1～2ml，无菌注入专用培养瓶中送检(5）脑脊液培养标本

1)采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最是在应用抗生素之前采集脑脊液。2)采集方法：无菌腰穿采集脑脊液3～5ml，分装到3个无菌小瓶中（各1～2ml）。用于细菌和病毒检测时脑脊液量不少于1ml；用于真菌和抗酸杆菌检测脑脊液量不少于2ml。

（6）穿刺液培养标本包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等穿刺液培养标本。1)采集时间：一般在用抗生素等抗菌药物治疗之前，或在停止使用抗菌药物之后2-3d采集标本。2)采集方法：

①无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本；

② 标本采集量应＞1ml（结核分支杆菌培养时应为1～5ml）；

③ 标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检；

④可在盛器中先加入灭菌肝素然后再加入穿刺液，以防止穿刺液凝固（0.5ml肝素可抗凝5ml标本）

（7）胃液及胆汁培养标本

抽取空腹胃液5ml，置无菌管内送检；胆汁培养标本由十二指肠引流法或胆囊穿刺法或手术中留取胆汁，采集胆汁量为5ml，置无菌管内送检；胃液和胆汁采集后必须立即送检。

（8）脓汁和病灶分泌物培养标本采集前局部消毒，然后无菌采取脓汁或病灶分泌物或组织。标本采集后立即置无菌管内送检。

（9）眼.耳.鼻.咽拭子培养标本用拭子常规采集各种标本。标本采集过程中应注意避免被黏膜上的正常菌群污染，标本采集后连同拭子一起置无菌管内送检。

（10）泌尿生殖道培养标本

1）尿道分泌物：清洗尿道口采取尿道口溢出的脓性等分泌物，或用无菌拭子插入尿道2～4cm处轻轻转动后取出，置无菌试管中送检。

2）阴道、宫颈分泌物：通过阴道扩张器，用灭菌拭子采取阴道口或宫颈管1～2cm处分泌物，置无菌试管中送检。

3）宫腔分泌物：在必要时用外套保护膜的灭菌导管抽取。

4）前列腺液：清洗尿道口冲洗膀胱后用前列腺按摩法采取前列腺液送检。

5）精液：受检者应5d未排精，清洗尿道口后手淫或体外排精法，射精于无菌容器内送检。

6）溃疡分泌物：灭菌生理盐水溶液清洗患处，用无菌拭子取其边缘或基底部的分泌物，置无菌试管中送检。(11）烧伤感染培养标本

烧伤12h后用无菌棉拭子无菌操做采集标本；要注意从多个创面取样；烧伤严重感染时易发生败血症，创面取样的同时应该采集血样送做血培养（最好同时做需氧菌培养和厌氧菌培养）。

（12）厌氧菌感染培养标本 1）标本采集

①要注意避免标本污染和与空气接触，严格遵守无菌操作；

②用注射器抽取胸水、腹水、心包液、关节液、胆汁、脑脊液或无菌手术抽出脓液；

③抽出液体标本后，要尽快排除注射器内的空气。2）标本运送

① 标本采集后不得冰箱储存，必须尽快（半小时内）送实验室；

② 运送方法：

a注射器运送（标本抽取后尽快排除空气）或接种到专门的运送培养基中直接运送； b含运送培养基的无氧小瓶运送； c厌氧罐运送（组织块）；

d 大量液体标本运送时要装满标本瓶并立即驱氧，加盖运送； e一般不采用棉拭子法。(13）真菌感染培养标本 1）浅部真菌感染标本采集

① 皮肤：常规消毒皮肤，从皮肤癣菌皮损边缘刮取鳞屑，置无菌平皿内送检；皮肤溃疡则采集病损边缘脓汁或组织；

② 指（趾）指甲：消毒指（趾）指甲并去掉其表面部分，取可疑病变部分，用刀片修成小薄片5～6片，置无菌容器内送检；

③毛发：采集根部断折处，至少5～6根送检。2）深部真菌感染标本采集

① 血液：无菌采血8～10ml，注入未用过抗生素的或可中和抗生素的血培养瓶中，立刻送检；如不能立刻送检时血培养瓶应放室温，但不可超过8～9h；

② 脑脊液：采样量不少于3～5ml，分别注入两支无菌试管中送检（一管做真菌培养和墨汁染色；一管测隐球菌抗原和其他培养）；③呼吸道及泌尿生殖道深部真菌感染标本采集同一般菌培养标本。

（14）病毒感染标本

1）标本采集原则：根据不同检查目的采集不同的标本，见表1。尽量于疾病早期采集标本；尸检标本应在患者死亡后6h内采集标本。2)标本采集方法：

① 呼吸道病毒感染标本用咽拭子采集；让患者先咳嗽，再口服0.5%乳蛋白水解物15ml，反复含漱3～4次后吐到容器中立即送检；儿童常应用无菌棉拭子，先沾好0.5%乳蛋白水解物，再去涂拭扁桃体周围组织，并立即泡在0.5%乳蛋白水解物中，立即送检；

②乙脑病毒需采集血清或血浆，置无军菌容器中尽快送检；

③ 尿液则取其中段尿立即送检（否则置4℃冰箱12h内接种）；

④肠道病毒和柯萨奇病毒则采集新鲜粪便，尽快送检。

3）标本运送及保存：多数病毒对热不稳定，标本采集后应立即送检接种；如48h内接种，须置4℃冰箱保存；空运标本须置冰壶中48h内送到实验室并接种。