瘦肉精检测方法

第一篇：瘦肉精检测方法

目前，检测瘦肉精的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。而我国结合自己的实际情况，2001年农业部首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标淮。该标准选择确定了两种：即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）。其中将HPLC法作为检测瘦肉精的半确证性方法，其最低检测限为 0．05μg/kg，优点是检测精确度高，而且假阳性率低；缺点是检测过程烦琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。而GC一MS法优点是能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析。GC－MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，已将GC－MS法定为检测瘦肉精的确证性方法。GC－MS法的缺点同HPLC相似。

(1)试剂和材料 以下所有试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB／T6682规定的二级水。

①盐酸克伦特罗对照品：含盐酸克伦特罗不得少于98．5％

②盐酸

③无水甲醇

④氢氧化钠

⑤磷酸二氢钾

⑥磷酸

⑦盐酸溶液 取盐酸4．2ml，加水至1000ml，即得。

⑧o．5mol／L磷酸二氢钾溶液 取磷酸二氢钾68g，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．O，用水稀释至1000ml，即得。

⑨0．05mol几磷酸二氢钾溶液 取磷酸二氢钾6．88，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．0，用水稀释至1000mi，即得。

a．氢氧化钠溶液 取氢氧化钠48，加水使溶解成100mi，即得。

b．盐酸克伦特罗对照品储备液(1mg／mi)准确称取28．3mg盐酸克伦特罗对照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。

⑩盐酸克伦特罗对照品工作液(10ttg／mi)取lmg／mi储备液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。

⑾盐酸克伦特罗对照溶液(100ng／m1)取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。

⑿盐酸克伦特罗检测试剂盒(2～8~C冰箱中保存)

⒀固相萃取柱C，s：100mglml含碳量≥17％

(2)仪器和设备

①酶联免疫反应读数仪

②分析天平精度0．00001g

③天平精度0．01g

④冷冻离心机

⑤50mi具塞离心管

⑥匀浆机

⑦微型振荡器

⑧回旋振荡器

⑨微量移液器 单道20uL，50ul，100uL；多道50～250uL，⑩干热浓缩器

①空气压缩机

(3)测定步骤

①试料的制备(尿)

取供试尿lml，于3000r／min离心l0min，上清液作为供试试料，直接供酶联免疫测定法测定。

取空白尿lml，于3000r／min离心l0min，上清液作为空白试料，直接供酶联免疫测定法测定。

取空白尿2ml，于3000r／min离心l0min，上清液1.0ml添加l00ug／L的克伦特罗对照溶液20／H。作为2ug/l空白添加试料，直接供酶联免疫测定法测定。

②试料的制备(肝)

取约l00g新鲜或冷冻后融化的空白或供试猪肝,用匀浆机以10000r／rain匀浆1-2min，使均匀呈糊状，一20~C以下冰箱中贮存备用。

取均浆后的供试肝样，作为供试试料。

取均浆后的空白肝样，作为空白试料。

取均浆后的空白肝样(1土0．05)e添加l00ng／m1的克伦特罗对照溶液20tzL作为2ng／g空白添加试料。

a：提取(肝)取(1士o．05)z试料，置50ml离心管中；加盐酸溶液5.0mi，旋涡混匀，中速振荡1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度离心15min；上清液移人另一50ml离心管中，加入氢氧化钠溶液300gL，混匀，振荡15min；加0.5mol／l磷酸二氢钾溶液4。0ml，混匀，2—8~C放置过夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度离心15min，上清液备用。

b．净化(肝)C，固相萃取柱依次用无水甲醇3mi、0.05mol／L磷酸二氢钾溶液2mi预洗，不使柱床干涸；将备用上清液全部过柱；用0.05mol／L磷酸二氢钾溶液2ml淋洗，挤干，弃去所有淋洗液；用无水甲醇2mi洗脱，流速控制在0.5ml／mm以下，挤干，收集洗脱液；于50～60~C下用氮气或空气缓缓吹干洗脱液；残余物用水1.0ml溶解，以4000r／mill以上的速度离心15rain，清液作为试样溶液供酶联免疫测定法测定。

③测定

a．室温应控制在19～30~C。

b．取在19—30~C放置1—2h的试剂盒，按每个标准溶液和试样溶液至少两孔计算所需酶联板条的数量，插入框架。每个微孔加入用缓冲溶液100倍稀释的抗体100~tL，封口膜封板，室温孵育30min。

c倒出孔内液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体。用多道移液器加水250pL到酶联板的微?L内，稍后倒出孔内液体，再将酶联板倒置在吸水纸上拍打，如此重复操作洗板3次。

d．分别吸取标准溶液、空白试料、空白添加试料和供试试料各20uL，分别放入不同微孔底中央，并在每孔内加入用缓冲溶液100倍稀释的酶结合物100~I。，在微型振荡器上混匀，用封口膜封好，室温孵育30min。

e．倒出孔内液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体，重复洗板3次。

f．用多道移液器加入用底物缓冲溶液10倍稀释的底物100uL，室温避光孵育15min。

g．用多道移液器每孔加终止液100uL。

h．在1h内将酶联板放于酶标仪内，于450nm波长处测定吸光度值。

(4)计算 用数据分析软件对结果进行分析，绘出标准曲线，并得出试料中克伦特罗的含量。

(5)灵敏度和回收率

本方法的平均检测下限为0.1mg／Kg。

本方法在1ug／kg添加浓度水平上猪尿回收率范围为60％一120％，猪肝回收率范围为40％～120％。

第二篇：瘦肉精检测方法

瘦肉精检测

中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名盐酸克伦特罗；是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。盐酸双氯醇胺；克喘素；氨哮素；氨必妥；氨双氯喘通；氨双氯醇胺。英文名：Clenbuterol;Spiropent;Planipart;NAB365；4-Amino-3,5-dichloro-alpha-(((1,1-dimethylethyl)amino)methyl)benzenemethanolCAS号：37148-27-9

分子式：C12-H18-Cl2-N2-O

理化特性

白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。

编辑本段

瘦肉精检测方法

GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定气相色谱-质谱法（GC-MS）

GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。Fente C.A等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g；Pteer Batioens应用气相色谱－串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织

中的CLB含量进行检测，最低检测限为2ng/g；刘琪等用GC-MS法（EI离子源）检测猪尿中的CLB，检测限为0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB，衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。另外，GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。因此，我国将GC-MS法定为检测CLB的确证性方法（NY/T468~2001）。

高效液相色谱法（HPLC）

HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且，HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。黄士新等(1995)应用紫外检测器，在λ=243nm，色谱柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn，流速：1mL/min，柱温：室温30℃的条件下检测猪肝脏和猪肉中的CLB残留，最低检测限可达2ng/g[4]。国外有人应用HPLC(二极管阵列检测器)测定动物性食品中CLB残留，测得最低检测限为1.26ng/g，回收率达98.9%[5]。目前，我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证性方法，最低检测限范围为1～15ng/g，其优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高，而且假阳性率低；缺点是样品处理时间长，检测过程烦琐、难于操作，需贵重仪器，在实际应用中受到一定的限制。

酶联免疫吸附法（ELISA）

利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用，通过化学

方法将植物辣根过氧化物酶（HRP）与克伦特罗（CL）结合，形成酶偶联克伦特罗。将固相载体上已包被的抗体（羊抗兔IgG抗体）与特异性的抗克伦特罗抗体结合，然后加入待测克伦特罗和酶偶联克伦特罗，它们竞争性与克伦特罗抗体结合，洗涤后加底物，根据有色物的变化计量待测克伦特罗量。若待测克伦特罗多，则被结合的酶偶联克伦特罗少，有色物量就少。用目测法或比色法测定样品中的克伦特罗含量，比色的最佳波长为450 nm，参比波长应大于600 nm。胶体金免疫层析法（Colloidal gold immunochromatography）利用竞争法胶体金免疫层析技术，检测液中的Clen与金标垫上的金标抗体结合形成复合物，若Clen在检测液中浓度低于灵敏度值，未结合的金标抗体流到T区时，被固定在膜上的Clen-BSA偶联物结合，逐渐凝集成一条可见的T线；若Clen浓度高于灵敏度值，金标抗体全部形成复合物，不会再与T线处Clen-BSA偶联物结合形成可见T线。未固定的复合物流过T区被C区的二抗捕获并形成可见的C线。C线出现则表明免疫层析发生，即试纸有效.液相色谱—质谱/质谱法（HPLC-MS/MS）

参见SN/T 1924—2007 进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法。

本标准适用于动物源性食品肌肉和内脏中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测。

试样中的药物残留采用pH5.2的乙酸铵缓冲液提取，同时加入β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶进行酶解后，提取液经C18和SCX

双SPE柱净化，液相色谱—质谱进行测定，内标法定量。

第三篇：新型瘦肉精种类及其检测方法

新型瘦肉精种类及其检测方法

“瘦肉精”是指能够抑制动物体脂肪生长，促进蛋白质合成的一类药物统称。它并不是一种特定的物质，广义上来说，凡是通过非正常手段促进瘦肉生长，抑制肥肉生长的的饲料添加剂均可成为“瘦肉精”。

传统的瘦肉精主要是β—兴奋剂类的药物，例如盐酸克伦特罗、莱克多巴胺等。近年来人们对瘦肉精的危害越来越了解，因此各国政府对违法添加瘦肉精行为的打击力度也越来越大。盐酸克伦特罗、莱克多巴胺等传统瘦肉精逐渐销声匿迹。但由于利益的驱动和检测技术的相对滞后，新型瘦肉精开始出现。新型的瘦肉精不但种类繁多，也更加不易被现有技术手段检测，食用后对人体健康的危害也更严重，对儿童、年老体弱者作用更明显。

下面列举几种常见的新型瘦肉精及一些新型瘦肉精的检测方法： 1．苯乙醇胺A 苯乙醇胺A是苯乙醇胺衍生物中一种，又名克伦巴胺，能够明显提高猪的生长速度，增加瘦肉率。研究发现在饲料中添加苯乙醇胺A，猪的肌纤维密度增加，肌纤维横径增粗。苯乙醇胺A还可以显著提高猪血清生长激素和甲状腺素水平，从而使血清葡萄糖含量明显增加，有利于蛋白质在体内沉积，并提高基础代谢水平，使体脂趋于分解。但食用含苯乙醇胺A的猪肉后，人体会出现恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状，长期食用则有可能导致染色体畸变，会诱发恶性肿瘤。

2．赛庚啶

第二类常见的新型瘦肉精是赛庚啶。它又名二苯环庚啶，是一种5-羟色胺和组胺H1受体拮抗剂，有明显的抗胆碱和中枢抑制作用。由于食欲受中枢神经系统5-羟色胺的抑制性调节，赛庚啶能够阻断下丘脑其活性，从而兴奋摄食中枢，引起饥饿感，减少糖的消耗利用，使食量和体重增加，提高猪的生长速度，短期内增加猪的体重。人体中毒的症状表现为恶心、嗜睡、昏迷、呼吸急促、全身无力、皮肤苍白、口唇和指（趾）发绀、呈急性面容、瞳孔扩大、对光反射消失、中毒缺氧等。

3． 可乐定

可乐定是属于咪唑啉衍生物类药物，过去为常用的中枢性降压药，也具有一定的抗焦虑、增强记忆、镇痛及镇静地作用。在临床研究中发现可乐定能显著促进腺垂体合成和释放血清生长激素，提高血清生长激素水平，因此不法商家将其作为促进生长，提高瘦肉率，降低脂肪比率的药物。但食用含有可乐定的猪肉轻则出现头晕、乏力、嗜睡、口干等症，严重者还会出现视物模糊、肌肉麻痹、口齿不清等症状。

4．巴氯芬

巴氯芬也是一种新型瘦肉精，它是γ一氨基丁酸的衍生物，作用于中枢神经系统脑和脊髓的骨骼肌松弛剂、镇定剂，被广泛用于脑卒中后偏瘫、脊髓损伤后截瘫和多发性硬化等疾病引起的瘫痪等的临床治疗。该药可以抑制脑干呼吸中枢的整合作用，使呼吸频率减慢，缓和动物在热应激时的热性喘息，减少料重比，增加体重，提高猪采食量、日增重和营养物质吸收率，但巴氯芬作为镇静剂会使人产生嗜睡、眩晕、抑郁、呕吐、腹泻、头疼等症状。

为了应对市场上新出现的瘦肉精种类，一些新的检测方法应运而生，一些传统方法经过适当改进也被应用到新型瘦肉精的检测中

1．酶联免疫吸附法

该法特异性强、灵敏度高，操作简便，是基层兽药残留检测实验室普遍采用的筛选方法。市场上针对盐酸克伦特罗、莱克多巴、沙丁胺醇等传统瘦肉精的商品化试剂盒生产厂家较多，技术较成熟，价格适中。而由于缺乏相应的抗体，新型瘦肉精试剂盒品种及生产厂家较少，且多为进口试剂盒，价格昂贵。因此开发出技术成熟、价格适中的试剂盒成为监测新型违禁药物的重中之重。

2．高效液相色谱法

该法具有灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点。有研究表明其对饲料中赛庚啶检出限为0.05 mg/kg，定量限为0.1 mg/kg，回收率达到89.1%～93.9%。但是如果样品基质复杂，该方法则易受其它组分干扰，从而出现假阳性的情况。因此该法目前还不能作为不能作为确证方法。

3．高效液相色谱串联质谱法

该法把色谱高效快速的分离能力和质谱高灵敏度的定性分析有机结合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性和定量分析，并且具有更高的检测限。作为目前世界上唯一公认的新型瘦肉精残留检测的确证方法，近年来该法发展较快。各种新型瘦肉精都已开发出在不同基质中检测的方法。

4． 生物传感器法

生物传感器是一门有多种学科互相渗透成长起来的新兴学科，已引起世界各国的重视。其原理为待测物与分子识别元件特异性的结合后，所产生的复合物（或光、热等）通过信号转换器转变为可以输出的电信号、光信号等，从而达到分析检测的目的。用它检测瘦肉精的原理与酶联免疫法几乎相同，只是将酶与底物反应的化学变化用换能器转化为电信号输出，从而可得待测物质的含量。该法具有选择性好、响应速度快、样品用量少、操作简易、价格低廉、定量准确，且其结构简单、体积小、携带和使用方便、可以实现连续的在线检测和反复使用等优点。

由于新型瘦肉精的危害，农业部已将苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定等列入“禁止在饲料和饮水中添加的物质”。为防止新型瘦肉精流向餐桌、危害消费者，必须积极探讨各种先进的检测方法和检测技术。试纸条和试剂盒法虽然存在假阳性的缺点，但操作简便、成本低，适合在道口、养殖场等现场检测。作为确证方法的液相色谱串联质谱法，虽然灵敏度高、重复性好，但仪器昂贵、前处理复杂，基层实验室很难配备。因此，检测新型瘦肉精应先筛选、后确证，这样既节约人力、物力，又不会漏判、误判。

参考文献：

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第四篇：瘦肉精检测

通许县动物卫生监督所关于

外销生猪“瘦肉精”检测的报告

开封市动物卫生监督所：

为了保证畜产品质量安全，保障人民身体健康，全面推进和谐社会的创建，2010年6月21日，通许县畜牧局下发文件开展世博会期间整顿生猪经营处等检疫秩序活动，特别是重点开展 “瘦肉精”的检测工作，坚决杜绝在饲料中使用莱克多巴胺及克伦特罗等违禁药物，整顿和规范饲料、兽药市场，严厉打击假冒伪劣产品，实现全县生猪生产的安全无污染，确保外销到市场的是“放心猪”。

通许县动物卫生监督所认真学习贯彻了县局文件精神，开展以“瘦肉精”和重大动物疫病为主的检测检验；加大对使用“瘦肉精”的打击力度，建立生猪疫病防治体系，确保生猪及其加工产品的质量安全。对检测出“瘦肉精”的生猪产地在3个月内禁止外销，经检测合格后重新申请进入市场。逐步推行生猪产品市场准入制度、“一猪一标一码”标识管理制度。对生猪“瘦肉精”进行重点抽检，检验中凡发现有“瘦肉精”的生猪均进行销毁，并向产地通报和封停该地生猪进入市场。

据汇总统计，2010年6月至8月份我县共外销生猪8603头。分批次发往浙江省慈溪市、江苏省无锡市、安徽省和县、浙江省宁波市、江苏省常州市、广东省湛江市、安徽省合肥市、安徽省淮南市、安徽蒙城县等九个城市和地区。“瘦肉精”检测全部呈现阴性。其中6月份外销生猪2053头，抽检生猪尿样110多个，检测结果全部呈现阴性，合格率达到100%。7月份外销生猪3190头，抽检生猪尿样160多个，检测结果全部呈现阴性，合格率达到100%。8月份外销生猪3360头，抽检生猪尿样170多个，检测结果全部呈现阴性，合格率达到100%。

二○一○年九月八日

主题词：瘦肉精 抽检 报告

通许县动物卫生监督所二○一○年九月八日印

第五篇：(瘦肉精)检测制度

第十节

屠宰企业违禁药物（瘦肉精）检测制度

（适用实行瘦肉精企业自检的地区）

一、为规范生猪定点屠宰厂（场）待宰生猪尿样违禁药物“瘦肉精”的日常检验工作，制定本制度。

二、定点屠宰厂（场）必须有满足日常检测需要的工作场所及实验室，并应保持光线充足，通风良好，室内环境整洁，基本设施齐全。

实验室必须配备能满足检测工作需要的检测人员和审核人员。

三、检测人员必须经过有关单位的培训，能独立操作，包括样本的采取和检测。

四、定点屠宰厂（场）必须建立瘦肉精检测台帐，并建立人员岗位责任制，所有检测设施、器材、记录等都要专人妥善保管。

五、严格执行省政府的有关要求，生猪宰前必须进行瘦肉精检测，并实行每批必检制度（一个检疫证号为一批）。

六、检测结果应在屠宰厂（场）内固定场所以醒目方式对外公示。

七、若检测出现阳性结果，屠宰厂（场）必须将检测结果立即报送当地动物防疫监督机构处理。

八、检测方法按照《动物组织中盐酸克伦特罗的测定 气相色谱/质谱法》NY/T 468-2006的规定执行。

九、屠宰厂（场）应自觉接受屠宰管理机构和动物防疫监督机构对检测工作开展监督检查、指导。