临床现考中常见的问题

第一篇：临床现考中常见的问题

现考中的常见问题

一、现场考察的目的

1、评估是否遵循法规，指导原则及SOP进行Ⅱ、Ⅲ期临床试验。（四期不涉及现考）

2、确定受试者权益和安全性是否获得保障。

3、确定临床试验资料的真实性。

4、促进临床试验更加规范。

二、现场检查的类型

按检查方式分类

1、定期、常规检查

定期进行基地复核、机构复核

2、有因检查

在以下情况发生后进行的检查称为有因检查：

被人举报违规、严重违背GCP、同期承担过多项目或多个相同项目、入组率过高或过快、安全性或有效性结果异常、既往不良行为。

现场检查类型

1.按检查方式分类 a）、飞行检查：

当研究者涉嫌有违规操作时可进行的突击检查，且不需要提前通知

b)、跟踪检查：

在整个实验进行中或实验结束后针对整个实验操作各方面的规范性进行的检查

2、按检查对象分类 a)、机构/专业检查

基地核查、机构核查

b)、研究项目/专项检查

在药物报生产之后进行的检查

三、检查要点

1、实验条件

a)、承担临床试验机构及相关专业应具备相应资格。b)、具有《药物临床试验批件》及伦理委员会批件。c)、具有并遵循所制定的临床试验管理制度。

d)、试验人员承担的相应工作，研究时间应与原始记录和申报资料记载一致。e)、仪器、设备应与试验项目适应，其型号、性能、使用记录等应与申报资料一致。

2、实验记录

知情同意书应由受试者或其法定代理人签署，必要时可电话核实。

3、试验用药的接收和使用

a)、质检报告、临床试验方案与总结报告，以及申请资料中试验用药批号应一致。b)、试验用药的接收，使用和回收应有记录及相关人员签名，接收，使用及剩余数量间的关系应对应一致。

c)、试验用药的用法用量及使用总量应与用药原始记录及临床试验报告对应一致。

4、数据溯源

a)、CRF与原始资料（需核查原始病历，实验室检查，影像，ECG，Holter，胃肠镜等检查的原始记录。。。）以及申报资料须对应一致。

b)、原始资料中各种临床检查数据须能溯源，必要时应对临床检查部门（检验科、影像室、各种检查室等）进行核查。

现考中先考人员可抽取一些病例与原始数据核对，查看是否真是。

c)、临床试验总结报告中完成病例数与实际临床试验病例数对应一致。

在此过程中，可能存在以下问题，总结报告中各个中心的的病例数与分中心小结中的病例数不一致，是因为分中心小结中的病例是包括了这个中心的所有病例，而总结报告中的病例数不包括剔除的病例

d)、统计报告与临床试验总结报告须对应一致。

e)、药动学与生物等效性试验的原始图谱溯源。

1）2）纸质图谱是否信息完整，并与数据库中电子图谱一致。原始图谱及数据是否与总结报告对应一致。3）4）进样（或采集）时间与试验时间、仪器使用时间是否对应一致。图谱记录的测试样品编号与对应受试者标本编号记录是否对应一致。

5、委托研究

a)、是否有委托证明材料，其所反映的委托单位，时间，项目及方案等是否与申报材料一致。

委托证明包括申办方对我们CRO机构的委托函及我们对医院的委托函

b)、被委托单位出具的报告或图谱是否为加盖公章的原件。c)、可对被委托机构现场核查，已确证其研究条件和研究情况。

6、现场核查中须注意的几点区别

a)、违规与不规范的区别

 违规是指违反了GCP和SOP的规定的操作行为

 不规范则是指包括基地的培训不到位、在操作中存在漏洞不规范等可更正、可弥补的操作问题

b)、未作与不完整的区别 c）、造假与不严谨的区别 d）、组织与个人行为的区别

7、可能存在主要问题

a)、无SFDA批件（这种情况现在较少）或批件效期已过（申办方一般会在批件过期之前开展试验）

b)、无伦理委员会批件或先实施，后批准

违规行为：

 方案：方案或修订后的方案没有经过伦理委员会的批准就实施，或是先实施后经过批准的行为都是违规的行为。

 研究者：过伦理是如果我们的研究者也是伦理委员会的成员之一，则不能参加伦理委员会的投票，否则属于违规行为。

 安全性报告：严重不良事件延迟或未向伦理委员会提交备案的行为。不规范行为：

 招募广告：在医院张贴招募广告之前需要先经过这家医院伦理委员会的批准并备案后方可，所以在此之前需先了解这家医院对招募广告的要求。

c)、知情同意书确实或签署存在问题

 丢失或不完整，并得不到合理解释；

 知情最好粘贴在原始病例中，预先留出粘贴页；

 签署时间，最低也要在首次服用试验药物之前。

对于个别可能存在未签署知情同意书便进入试验，或先纳入后签署的行为，我们的底线要求是知情同意书签署时间必须在服药之前，对于有些已经做过检查后才参加试验的患者需要在签过字之后才可以服用药物，这个是必须要保证的。

d)、应用错误或非母语：

 国际多中心临床试验中由于知情同意书比较长、专业术语比较多，即便是附有中文译本，但仍然可能存在中英文翻译不一致的情况，这时我们就要考虑实验中的条件、要求是否能够遵循、符合我国的法律法规。

 知情同意书的的修改方案应按照首研的要求进行，如果分中心有单独的要求也要针对这个中心的要求进行修改，但这份修改后的知情同意书只在这一家中心实施。

e)、违背试验方案

f)、无原始病历或原始病历中记录不全 g）、检查结果不能溯源

h)、试验用药接收，发放，回收数量不符或记录不全 i)、同期承担过多项目或多个相同项目。

四、详细问题分析

问题1—知情同意

1.知情同意书丢失或不完整，且无合理解释。2.未签署知情同意书就进行，或先纳入，后签署

3.应用错误或非母语的知情同意书版本或其内容不合乎要求 4.受试者/研究者未签署日期或任意修改日期

如果研究者没有签署日期，需要让研究者补签，并要保证签署时间的正确性。

5.受试者与研究者笔迹相同或多位受试者笔迹一致 6.未提供副本给受试者 现考时应将副本撕下。

问题2—违背试验方案

1.未按随机编号入组，入组日期与编号顺序不符，未按药物编号依入组时间顺序发放药物。

要保证患者的入组日期进行药物发放、编号。

2.入组受试者不符合纳入标准或排出标准要求（肝酶过高，肾功异常，ECG异常等）

对于肝肾功能异常的患者，我们要根据实际情况进行入组可能性的判断，对于一些影响不大的患者在入组困难时可以入组，但要保证对此患者全程合理有效的关注。

3.未完成方案规定的检查项目（仅有用药前检查，检查项目不全等）或未遵循规定的时间窗。

4.未记录合并用药或应用禁用药物。

对于一些老年患者或特殊患者，在整个试验中如果没有合并用药的可能性不大，应关注此类患者的真实性。要求记录通用名及起止时间。

问题3—原始病历溯源

1.不能提供住院病历

要求在医院中可查到整个住院记录。

2.住院病历中无任何与药物临床试验有关的记录或记录不全 3.无用药处方及起止日期。4.无AEs 观察及记录。5.门诊受试者无门诊病历。

● ● ● 住院病历中未查见原始报告单 检验室未查见书面或电子文档

检验室书面文档极不规范（废纸记录，无关记录纸背面潦草记录，铅笔记录，记录不完整……）

● ● ● 检验报告复印件缺页眉（无姓名，时间，机印改为手写……）时序性不一致或多处修改 检验单连号，或缺财务章 ● ● ● ● ● ● ● 大量检验单不粘贴或无序粘贴。心电图结果溯源

为保存图谱，解释结果正常故未保留，或图谱给受试者保存。部分图谱缺受试者姓名，检查时间及结果分析。图谱文字本为机打，但裁减后改为手写。胃肠镜检查无原始报告单。

较多检验报告及心电图报告缺页眉，凡报告为复印件者页眉处姓名，日期均为手写。

● ● ● ● ● 治疗前后检查间隔1月或更长，但多份检验单联号。多份检验单修改报告时间（如1997-2000，2003-2008，……）检验报告时间先于送检时间数月或晚于送检时间半年。

移花接木（受试者甲生化报告不能溯源，其检测值完全同受试者乙）所有免疫检查报告申请人与报告人笔迹相同，且报告人均为检验科主任签名。

问题4—药物管理

1.无药物管理相关记录或记录不完整 2.试验用药接受，发放，回收数量不符 3.药物分发不当 4.回收药物数量异常

5.接收药物不核对或不登记厂家、批号，效期 6.试验用药检测报告所检批号非临床用药批号 7.药物储存不当

特殊药物可能，避光、防潮药物，药物包装盒要确保完整

8.过期药物仍用于临床试验

过期药物要及时回收，结束后也要及时回收

9.试验结束后较长时间在试验中心仍查见试验用药

问题5—不良事件

现考关注问题：对方案的遵从性、溯源性、安全性 1.原始病历中无AE记录

原始病例中没有不良事件记录表；或不良事件记录表或不良事件随访表记录不全

2.AE未记录于CRF中（肝肾功能异常，血小板降低，ECG异常）

研究者没有意识到的不良事件，这个问题较严重：如果发生不良事件而没有记录，大家应进行高度关注，；例如：实验室检查入组时正常，而在出组时异常，这就是不良事件。

3.原始病历和CRF记录不符

4.日记卡记录的AE未在CRF或/和原始病历中记录

研究者可能疏忽患者在病历卡中填写的不舒服情况。

5.不按规定报告SAE 6.与其他中心比较AE发生率过低

各个中心发生不良事件的几率应该是相差不大的，如果在某个中心不良事件发生率较其他中心少或是没有，则这个中心受试者真实性便存在可疑。

问题6—研究者资格

1.不符合研究者资格人员实施药物临床试验

2.不符合研究者资格人员填写CRFs 或签署试验文件

3.研究者未充分或未参加试验或PI未履行相应职责。

对于没有资格或是正在学习阶段的研究者需在后面让有资格的研究者在后面签上字。

问题讨论：

1、在医院之外的地方张贴招募广告是否还需要过伦理？

只需在首研伦理进行备案

2、如果受试者在入选时打破了随机，是否要剔除这部分病例

这个问题应该依据自己的数据管理报告情况而定，如果患者充足则可以剔除，如果患者不足可以不剔除。

3、受试者签认证代码表或者类似这样的需受试者签名的文件，明显看上去是研究者自己签的，这个问题如何处理？

这种情况很普遍，还有就是受试者签的不是中文全名而是字母缩写，这个问题应该提早发现提早解决，确保受试者的笔迹不同，如果到了试验最后就很难补救了。

4、如果发生SAE，已经填写SAE报告表，还需要填写不良事件表吗？SAE要写随访报告吗？

 如果发生了SAE填写了SAE报告表后便不需再填写不良事件表了。 如果发生了SAE严格上讲必须要把首次、随访、总结三次报告填写完整，但如果研究者不能完成这三个报告也要把首次和总结填写完成。

关于新药临床试验现场考核注意事项

1.ICF核查注意事项：保证所有病例均有知情同意书，注意知情同意书签署日期疗前实验室检查日期之前（或者同一天），核查医生和患者是否均已签字，并核查科研病例中是否留下的患者联系方式，并随机抽打电话，询问患者是否参加试验以及当时服药后疗效情况（省局核查医院时会随机抽20%-40%询问有患者是否参加实验，服药多少天，疗效如何等等）。2.实验室检查核查注意事项：核查化验单是否齐全，心电图核查（需注意疗前疗后是否为同一人的心电图，并且注意心率是否和CRF记录一致）；血常规、血生化核查：需要到医院检验科仪器中核查到方可，这样方为溯源，以防止医生人为造出假化验单，针对部分病例可能缺少便常规和尿常规、可以允许有少量患者缺少，不可以大范围缺少。

针对CRF中异常检查尤其是血生化中异常较为明显的数值，要重点核查，省局官员会重点核查那些化验单的真实性，会针对总结报告和统计报告中安全性检查异常（如疗前正常疗后异常的检查），假如有临场解释的话，也需要核查总结异常解释是否和CRF解释一致（或是和DRQ异常解答一致）

3.试验结题资料完整性：方案、临床批件、伦理批件、试验物资交接单、试验药品销毁证明、实验室质控证明、试验启动培训记录、研究者签名样张、受试者完成目录、受试者签认代码表等等

4.试验药物的发放与回收：注意核对药物发放记录表每一药物发放和回收是否与CRF中药物发放是否一致，如果可以做到的话，实验结束后回收药物数量总数要与CRF记录总数一致。尤其注意脱落病例的回收药物情况是否一致。

5.核对本实验重要的指标（不容易造假的一项指标）：需要核查每一例患者是否有X光片检查报告单（注意报告背面可以显示有复写纸印迹），并且核查是否存在X片子，如果医院保留患者X光片到医院仪器上（即如生化检查一样，存有电子版）需要核查，如没有电子版的话，则需要核查该院放射科X光片患者登记本，以保证确实该患者做过X光片检查。

6.核查科研病例中数值是否与CRF中一致。

7.针对受试者拼音缩写：南方的医院可能会导致拼写错误。

8.入选表是否保证随机，需要各中心患者服药日期与药物顺序号一致即可。

9特殊病例---脱落病例、剔除病例等要与总结报告和分中心小结表一致。

10.筛选表病例转归以及筛选失败原因。

第二篇：期转现常见问题

期转现常见问题

1．何时可以申请期转现？

期转现申请时间为该合约上市之日起至交割月份前一个月倒数第三个交易日（含当日）。

标准仓单期转现要在交易日11：30前提交申请。

2．客户想申请期转现，需要提交哪些材料？

双方客户应向交易所提交下属材料：期转现申请、现货买卖协议、相关货款证明、相关的标准仓单（或入库单或存货单）等货物持有证明。

会员可以通过大商所网站（.cn）/业务指引/交割业务指引/业务资料栏目下载《期转现申请表》。

3．期转现审批时限？

采用标准仓单期转现时，交易所在申请当日内予以审批。

采用非标准仓单期转现时，交易所在收到申请后的三个交易日内予以审批。

4．期转现批准日当天，交易双方的持仓按照什么价格平仓？

批准日结算时，交易所将交易双方的期转现持仓按协议价格进行结算处理，产生的盈亏计入当日平仓盈亏。

5．交易所负责买卖双方的仓单交收和货款支付吗？

标准仓单期转现中，交易所负责买卖双方的仓单交收和货款支付；非标准仓单期转现中，交易所不负责货物交收和货款支付，由双方客户自行约定。

6．客户申请了标准仓单期转现，什么时候能拿到货款/仓单？

标准仓单期转现在批准日结算后，卖方拿到货款，买方接到仓单。

7．期转现的手续费按照什么标准收取？

标准仓单期转现手续费按交割手续费标准收取，不再另收交易手续费。

非标准仓单期转现手续费按交易手续费标准收取。

8．当日新建的持仓可以申请期转现吗？

可以。

9．标准仓单期转现与非标准仓单期转现有什么区别？

标准仓单期转现在申请当日审批，非标准仓单期转现在三个交易日内审批。

标准仓单期转现收取交割手续费，非标准仓单期转现收取交易手续费。

标准仓单期转现中，交易所负责买卖双方的仓单交收和货款支付；非标准仓单期转现中，交易所不负责货物交收和货款支付。

第三篇：面试项目经理职位常见问题现

1)你做项目经理几年了? 能讲下你作为项目经理主要的职责是什么么?

2)你目前工作中遇到的最大挑战是什么?

3)能举例讲一个你在管理项目中遇到的一个困难, 你最终是如何解决的?

4)平时项目进度是怎么监控的?

5)你的项目中都管理哪些数据, 怎么收集及分析的.6)项目出现人手问题时, 你是怎么处理的?

7)有没有出现在一些问题上和经理意见分歧的时候, 你是怎么处理的?

8)项目中会出现那些决策, 你般怎么做决策, 你会做么?

9)你在把那些内容记录在风险管理中?

10)如果项目需要员工周末加班, 但那些员工并不是你的直接下属, 出现过不合作的情况么, 怎么处理的?

11)项目经理需要那些必须的素质, 你的强项和弱项有哪些?

12)有和其他部门合作的经验么, 合作上遇到过困难么? 遇到不合作怎么处理?

13)你的项目的主要参与人(stakeholder)都有哪些?

14)当遇到跟产品经理意见不一致时, 怎么处理?

15)你如何安排一天的工作?

16)当项目顺利进行时, 有额外的新需求进来, 你如何处理?

17)当前项目的资金运行情况怎么样?

18)尝试过敏捷开发么? 遇到过什么问题, 有哪些不足?

19)项目使用三方产品么, 如何采购及签定三方合同?

20)你对项目中出现的技术问题关注么, 参与技术讨论么? 遇到重大技术问题如何处理?

第四篇：临床执业医师考试常见问题总结

临床执业医师考试常见问题总结

临床执业医师考试是每一个医生都必须面对的考试，大量的医学内容是需要记忆的，让很多考生非常困扰，对于临床执业医师考试复习过程中常遇到的一些问题的解决方法搜索整理了一下，希望能够帮到大家！

1.基础差：这就要求你花费比别人更多的时间来看书或听课，厚积方能勃发，量的积累才能达到质的变化。或者报网上学习班，这样能有针对性的系统复习，能少走弯路，事半功倍。

2.学习效率低：每天看书的时间也不少，可是为什么知识点还不是很清楚呢？所以学习计划是关键。看书时，一定要记笔记，认为重点的一定要重点记忆和标记，方便以后复习的时候再重点温习。不能反反复复在一个内容上磨蹭，有些内容实在不懂，课后要通过做题来巩固，掌握该知识点的出题特点，有技巧的记忆是关键。

3.不注意劳逸结合：不要让学习成为思想负担。我们往往在拼命压迫自己的时候，不论是在身体上还是在精神上都承受着沉重的负荷，时间久了是不健康的。您每天8小时学习，从16点～凌晨1点多，时间久了心理上也会疲劳，适当的走出来，听听音乐，放松一下，这样生活，人才能恢复活力，学习才能提高效率医|学敎 育网。

4方法欠缺：其实临床执业医师考试不难，关键看我们能不能有足够的时间和坚定的毅力。以上两点您都有，那么您的问题在哪里呢？我认为主要是方法。不要把临床执业医师考试看的多难，只要按照计划学习就一定能通过。

5.战略上藐视敌人：有些人自我感觉良好轻视对手，这里提醒一句，无论你是哪个学校的都不可以放松，毕竟康是的范围还是很广的。最后，预祝大家取得好的成绩，顺利通过考试！

附：考场注意事项：

1、多备一支笔。

规定黑色水笔答题外，建议考生再多准备一支笔。

2、不要让考场中可能出现的情况影响自己。

原因：你在考场中可能会碰到非常紧张焦躁、情况不断的考生，这时，一定要把握住自己，千万不要浪费时间在和考试无关的事物上。

3、考场突遇好久未见的朋友，不要出现情绪波动。

原因：考场按学科分，考生很有可能遇到自己的朋友、同事，谈起自己现在工作、生活情况等等，不要因此而影响自己的情绪。医学`教育网搜集整理毕竟马上要进考场了，心理上的波动都可能会影响正常发挥。

4、习惯监考老师站在身边。

原因：有些考生会出现如果监考老师站在自己身边就会觉得浑身不自在，没有思路，落不下笔的情况，这其实都是紧张的心理在作怪。考生要学会集中注意在试卷和答题上，营造好像只有自己一个人的答题环境。

5、考完单门，尽快离开考场，不要对答案。

6、注意身体，不要生病。如果生病也不要影响心态。

原因：考试前，要特别注意冷暖，不要让自己生病。但万一正好有些感冒、发烧，也不要给自己太大的心理压力。其实，如果考试中完全投入到做题中，身体上的一些小病并不会带来太大的影响。关键是心态上千万不要总觉得自己处在劣势，那么这场仗，还没打就已经输

第五篇：临床荧光PCR结果分析及常见问题

临床荧光PCR结果分析及常见问题

中国人民解放军三零二医院 王海滨

一、荧光 PCR 技术在临床诊、疗中的应用

PCR 技术是于 1983 年由 Mullis 发明，后来传到我国，但是由于实验污染的问题，1998 年卫生部取缔 PCR 实验方法在临床诊断中的应用。荧光 PCR 出现后，污染减少很多，但近几年由于磁珠的应用，污染又再起。2003 年，PCR 在 SARS 的早期诊断中非常有效，当时使用的是电泳法。H1N1 甲型流感（2009）：荧光 PCR 技术作为确诊指标（755 份 / 天）。疾病易感基因的研究（SNP）： CR1/ 丙型肝炎 IL-28B。疾病（肿瘤）易感基因的鉴定。

二、影响临床荧光 PCR 检测结果的因素

（一）影响临床荧光 PCR 检测结果的常见因素

1.检验因素：

实验室硬件、仪器、试剂、人员素质、技术水平、管理水平。2.非检验因素：

标本采集、质量、部位、标本保存、条件、时间、标本中的干扰物质、样本丢失！

（二）加强检测前标本的质量管理——避免问题重复发生

规范标本前处理流程、制度化的重要性，建立不合格标本记录和定期总结制度、制定解决措施与可行路径（编号和项目错误等），查找标本丢失可能的环节。加强本室新进工作人员流程培训，经常性进行临床医护的交流与培训。

（三）实验室分区

分为：试剂配制、核酸提取、PCR 扩增以及开放产物分析等区域。分区目的：通过物理分割达到标本、试剂或使用器具等被沾染或掺入污染，标本间的交叉污染等。

分区要求：至少要有清洁的试剂配制和核酸制备区

三、试剂配制

（一）试剂配制室的设置与维护

以空间内无核酸气溶胶为准！．正压、清洁进风(壁挂式空调)。

试剂冰箱内勿存放病原或核酸相关物品！定期清洁除霜！2 ．有效氯消毒液清洁实验室台面、地面。3 ．移液器：使用前的清洁。．离心机等：每周定期木浆纸巾擦拭，方法。“一次性物品的使用没有质控就没有质量保证

对一个完整的实验，一定要注意有空白对照，阴性对照与临界对照，临界对照是对精密度的考核。另外，有平行定量标准品。如果试验测的是血清，质控标准品也应该是血清，而不是人造核酸。

质控品在结果报告中的应用非常重要： 1.空白对照

一般放在第一孔的位置，监控扩增试剂及环境污染。2.阴性对照

第二孔位置，监控核酸提取，试剂是否污染，可自行制备。3.临界对照

实验室自行制作，是实验精确度需求。4.等效定量标准品

中间位置或最后，实验准确性前提，参与核酸提取，标准范围宽。

（六）质控品的制作

HBVDNA ：介质的选择、临界质控的制作： 400IU/ML-50IU/ML ； HCVRNA ：介质的选择、临界质控的制作： 3000IU/ML-100IU/ML ； EBVDNA/CMVDNA/H1N1/HPV 等定性试剂盒的质控，阳性标本，稳定性实验；质控品的朔源： WHO 标准或 COBAS 等；自建质控品：建立数据记录（稳定性等）；室间质控与室内质控的有机结合！

（七）HBVDNA 结果分析（质控在控与失控）HBVDNA 结果分析，就是荧光曲线的分析，要尽可能保证报告的数值，低限值和高于低限值的线要平行，尽可能不要失控。

临界质控品： 400IU/ml ；基线的选择：平均荧光值的 3-7% ；斜率：保持在 3.0-3.6(均值 3.3)；相关系数： r=0.999。

1.COBAS 定量内标(QS)的失控

PPT21 显示的是 COBAS 定量内标失控的情况。2.不同定量区域 QS 值分布

PPT22 显示的是不同定量区域 QS 的分布，例数是 900 多例。如果内标出现了失控，定量值就无法参考了。

3.假阴性曲线的识别

在荧光 PCR 曲线里面，如果有荧光曲线是阴性、不规则的，要考虑是不是有干扰物质，在试剂配制或者标本里边有干扰物质。此时需要复检。

五、实验室人员（与职称和学历无关）

（一）实验室人员分类

1.实习型：

按照操作说明进行操作，但环节控制、环节间衔接和防污染意识差！2.工作型：

能够再现说明书操作要求，具有质量环节控制意识，具有一定的防污染常识，但发现问题和解决问题能力稍差。

3.示教型：

明晰试验操作的关键环节，并能够对下级工作人员进行演示和示教，具有完整的防污染意识、质量实现和一定的发现问题解决问题能力。

4.专家型：

能对商品试剂盒存在的问题进行改进，具有提前预知的质量意识。

（二）移液器的使用

移液器的使用，是小问题，大学问。1.移液器加吸头的要点，需慢慢压，不能用力压。2.不同量程移液器的应用要点（液体性质）。3.移液器连续分液挂滴对实验的影响。4.如何避免移液器连续分液导致的污染。5.移液器吹打混匀带来的污染！6.移液器的清洗，需要高压吗？ 7.移液器的校准，很多单位无法实现。

（三）质量环节意识的培养（轮流当主任）

1.环节控制能力

质量环节的认知：明晰实验操作环节的组成和目的！关键环节的实现：细节的严谨性与准确性！环节的连贯性与细节实现：实现完整实验！2.防污染素质

实验室环境防污染意识：具备科学防污染清洁意识和实现能力，如标本外溢的处理、实验室环境（空气、桌面、地面、移液器等）清洁，实验废物的管理和处理，离心机的清洁和维护等。标本间交叉污染的预防意识和实现能力：避免移液过程中的隐形迸溅污染（移液器）；试剂加样过程中的沾染污染；标准品的携带污染等。扩增产物的外露污染：产物回流预防能力；产物处理流程。

（四）人员的培养与专业技能比对

不同职务、职称和学历人员同时进行；环节操作与结果同时计分；比对结果记录在案并作为评聘指标。

六、试剂盒的质量与评价

（一）评价标准：抗干扰-理论值与实际值的吻合。

1.特异性：不同血清型对特异性的影响，抗污染性能和污染试剂 2.敏感性：血清量、加样量对敏感性的影响（1+1=2 ？）, 试剂系统的组成与敏感性 : 引物、探针序列的选择与用量，跨栏式试剂： 10 9-10 2 IU/ml 应处在线性范围内、且均存在荧光信号的上平台。

3.重复性：取决于核酸提取方法与扩增效率。

（二）关于临界检测结果的漂移

例如，本场检测的时候，一个病人，一次检测是 53IU，一次是 <20IU，这都是漂移，这个技术方法性能本身，是正常的和合理的。但这种漂移的原因，是试剂盒核酸提取的稳定性问题。

七、关于内标

（一）实时荧光定量 PCR 无需内标

实时荧光定量 PCR 技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在软件之中，通过对每个样品 Ct 值的计算，根据标准曲线获得定量结果。

1.Ct 值的重现性：

PCR 循环在到达 Ct 值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此 Ct 值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的 Ct 值是恒定的。

2.Ct 值与起始模板的线性关系：

由于 Ct 值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量 PCR 是一种采用外标准与标本同步进行核酸提取的曲线定量方法。

（二）内标对实时荧光定量 PCR 的影响

若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则 PCR 反应变为双重 PCR，双重 PCR 反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。正因如此，定量方法虽然加入内标，仍为一种半定量方法。

美国 Texas 大学的科研人员进行了外标法定量和内标法定量的方法学比较，得出的结论是：内标法作为定量或半定量的手段是不可靠的，而外标准曲线的定量方法是一种准确的、值得信赖的科学方法。

AppliedBiosystems 公司的 7700 型实时荧光定量 PCR 仪是全球公认的荧光定量 PCR 的金标准，可实现多色荧光同时检测，但定量检测仍然采用外标准曲线的方法，而不用内标进行定量。

（三）内标对 PCR 扩增的影响

PPT34 显示的是内标对 PCR 扩增的影响。

左图，可以看到加入内标后线性范围变窄，无内标线性范围较宽。右图，无内标时是直线，有内标后，变成曲线。

个人建议：试剂盒在报批时，或使用单位对试剂盒质量进行评估时，使用内标对试剂盒性能进行评价！检定：正如 ELISA 试剂盒的批批检！

八、如何就分子诊断结果与临床和患者沟通？

医生和患者，都会对检验结果提出一些质疑。质量、速度应该还是个硬道理，应该权威的结果加虚心的请教。