第一篇：动物细胞转染基础知识大全
转染
转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。转染方法的分类
对外源基因转染方法的要求包括：转移效率高，不影响细胞正常生理活动，低毒性，容易使用，重复性好，易获得稳定转化子.根据转染的机制不同可划分为化学转染法和物理转染法两大类.一、化学转染法
1.DEAE-葡聚糖法
DEAE葡聚是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地用用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。
2.磷酸钙法
磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法，因为试剂易取得，价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究，先将DNA和氯化钙混合，然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过细胞胞膜的内吞作用摄入DNA。磷酸钙似乎还通过抑制血清中和细胞内的核酸酶活性而保护外源DNA 免受降解.3.人工脂质体法
人工脂质体法采用阳离子脂质体，具有较高的转染效率，不但可以转染其他化学方法不易转染的细胞系，而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA，以及RNA和蛋白质。此外，脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达，与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA 转入动物和人的体内用于基因治疗。人工合成的阳离子脂质体和带负电荷的核酸结合后形成复合物，当复合物接近细胞膜时被内吞成为内体进入细胞质，随后DNA 复合物被释放进入细胞核内，至于DNA 是如何穿过核膜的，其机理目前还不十分清楚。
二、物理方法
1.显微注射显微注射虽然费力，但是非常有效的将核酸导入细胞或细胞核的方法。
2.电穿孔
这种方法常用来制备转基因动物，但却不适用于需要大量转染细胞的研究。电穿孔法常用来转染如植物园生智体这样的常规方法不容易转染的细胞。电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。导入的效率与脉冲的强度和持续时间有关系。
3.基因枪法
基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内，这种方法适用于培养的细胞核在体内的细胞。
如何提高转染实验成功率
【组织培养试剂】
一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。
基础培养基—目前所使用的各种市售培养基（如，RPMI 1640和DMEM）。培养基的成分包括营养物质（氨基酸，葡萄糖），维生素，无机盐和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质，如HEPES，当暴露于光照下就会分解产生细胞毒性物质。
酚红试剂可保护细胞免受一些HEPES降解所产生的毒性效应，但在使用未加酚红试剂的培养基的应用场合下，如荧光素酶的测定，细胞毒性则仍然是一个问题。
胎牛血清—血清是一种含有白蛋白、球蛋白、生长促进因子和生长抑制因子的极为复杂的混和物。采集血清所用动物的年龄、营养水平、和健康状况可影响到血清中这些成分的数量和质量。因此血清易受显著生物学变异的影响。添加剂—某些细胞的生长依赖于一些对生命力或细胞分裂必不可少的物质（如，生长因子，微量元素，必需代谢物和蛋白等）。
CO2培养箱—细胞生长所需环境为37℃、相对湿度为95％的CO2培养箱。用CO2是为了控制pH值。细胞生理对pH的变化非常敏感，因此多数细胞培养基都含有碳酸氢盐缓冲体系。有些培养基需要CO2浓度为5％来有效控制pH值，而另一些则需要10％的CO2。需要向您的培养基供应者核对一下适当的CO2浓度。如果培养箱内培养条件与所需条件不一致（温度、湿度和CO2）则会导致实验结果的板间变异性。来自于培养箱内的污染物、化学物质，或真菌／细胞的污染也都可能影响到细胞生理。【细胞】
一般提示：密切观察您的细胞；确保它们状态良好。在开始转染细胞之前，先制定一个适当的种板方案，使细胞密度从转染开始到结束都保持最佳状态。
增加成功几率—细胞是转染过程中的一个关键元素，它可以是影响结果的一致性和质量的最重要的变量。
分裂细胞相比较非分裂细胞—分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源DNA。因此对大多数转染操作而言，细胞都在转染当天或前一天种板。同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于生长过度的状态。由于FuGENE® 6和HD转染试剂对于细胞作用温和，可同时进行贴壁细胞的种板和转染。此外，还常用促有丝分裂刺激物（如，病毒转化，生长因子，条件培养基，以及滋养细胞）来活化原代培养细胞。
贴壁细胞相比较悬浮细胞—在转染效率方面贴壁细胞和悬浮细胞之间的差异显著。天生趋于悬浮的细胞（如HL 60，Jurkat）非常难以转染；相反，天生为贴壁的细胞（如HEK，CHO）则可适应悬浮生长的条件。那些天然悬浮的和那些适应悬浮的细胞的浆膜是不一样的。据推测转染过程中的一个限制步骤就是通过内吞作用摄取转染分子（DNA或RNA与转染试剂的复合物）；然而，目前对此尚未有分子水平上的合理机制的解释。细胞间膜结构的差异可能是某些细胞类型天生难以转染的部分原因。所以，寻找更有效转染试剂的工作目前还主要是经验性的，尤其对于那些天生为悬浮的细胞而言更是如此。这常常是在不含血清而含有抑制转染的特殊添加剂的培养基中发生。经小心处理后，这些细胞可适应于在没有添加剂的环境中悬浮生长。如果这些适应于悬浮生长的贴壁细胞在没有这些添加剂的环境中生长，那么它们就可以被转染。
分批方案—在对培养细胞进行分批传代培养之前，必须把贴壁细胞用胰蛋白酶消化使之脱离培养基质。这个常规操作可导致正常细胞功能受到严重损害。因此分批方案的不同（如，胰蛋白酶消化时间的延长，胰蛋白酶的失活，以及消化后直到转染开始的时间）都可能对转染实验有所影响。如果在转染时细胞过于密集，那么种到培养板上的就会是细胞团块而非单个细胞。对于某些细胞／试剂组合而言，浆膜状态被改变后有可能会影响到所用试剂和DNA的最佳配用量和配比。
传代次数—传代次数是指对一个细胞系进行分批传代的频度（通常在一个实验室范围内）。在某些情况下，自建立细胞系起的确切传代次数无法得知。某些细胞系相比较其他细胞系而言较不稳定，可能会随着培养时间的延长而改变，视不同的细胞系和培养条件而定。培养条件的不同可引起克隆选择。因此名称相同的同一细胞系有关其生理学和形态学（以及转染能力）性质可能会有很大的差异。一般而言，细胞在冻存复苏后的一两代之内或直到它们完全复苏之前都很难转染。在不同细胞系之间转染效率的变化很大。某些细胞系在传代很大次后仍能保持稳定的转染效率，而其他一些则传代很少次数就表现出转染效率的差异。
细胞数量（汇聚度）—只要培养基质（组织培养皿）尚有空间，细胞就会按指数规律分裂。对于正常细胞而言，细胞生长的速度受细胞密度大小的抑制（接触抑制），但癌细胞则不受此限制而会继续生长并可互相叠加。营养物质的耗竭以及代谢废物的积聚会影响所有的细胞生长。细胞会因受到营养物质匮乏的压力而不适于转染。报告基因的表达率与转染开始时的细胞数量和细胞健康以及它们随后直到细胞溶解之前的生长情况相关。
培养物污染—培养物可被细菌、酵母、真菌、病毒、支原体、甚至其他细胞种类所污染。各种污染都会导致产生错误的结果。
支原体污染—支原体污染在所有培养细胞中的比例为5-35％，它可改变细胞生长特性，酶的作用途径，细胞膜的组成，染色体结构，以及转染效率。特别是，支原体对采用脂质、DEAE-右旋糖酐、磷酸钙或腺病毒介导的转染技术有所干扰，其结果致使转染效率偏低或非典型。这些效应会导致实验结果的不可靠以及时间和珍贵细胞系的损失。和细菌及真菌不同，支原体污染无法通过视觉检查发现。它们非常小甚至能够通过大多数的无菌滤膜；它们还对常用抗生素有抗药性。所以必需进行支原体污染的常规筛查。
交叉污染—如果同一个实验室同时培养不同种类的细胞，那就有可能发生交叉污染，即使遵循最严格的分离操作规程这种情况也有可能发生。和其他细胞系之间的交叉污染不总是能通过镜检发现。如果有少量某种生长快速的细胞掺入到培养细胞种，几个月过后它们就会完全取代目标培养物。这种变化是逐渐发生的；而您可能甚至还未发现。建立细胞系鉴定的检测标准。例如，对于人类细胞系而言，STR（短串联重复序列）图谱就是一种可靠的鉴定方法。或者更简单的解决方案就是，当怀疑有交叉污染时，如果有可能，就换用新鲜的，传代次数少的细胞源。【载体DNA】
一般提示：对您纯化所得的载体进行质量检查。确定支持其正常功能的基因序列是否适合于您的细胞体系。在对您细胞体系的参数进行测定时，一定要选用一种您已知具有功能的对照载体。
载体的完整性—种载体是否具有功能取决于它结构的完整性。转染效率受到质粒制备物的超螺旋结构和舒展结构之间比例、双螺旋中断、核酸酶的降解，以及来自于储存和处理过程中的物理压力的影响。
载体制备物－各种载体是按照不同的方案在细菌体系中制备并纯化。制备产物中残余的污染物（如CsCl，内毒素）可能会影响转染效率。
载体构造（启动子／增强子／ORI）—转染体系通常用带有强病毒调节元件（如，RSV，CMV，和 SV40）的对照载体进行优化和比较。然而，病毒启动子／增强子体系的相对有效性在不同细胞系间的差异可大到两个数量级。例如，在某些细胞系中，由于自发的质粒扩增，SV40体系可高效表达 large T抗原（如，COS）；而在其他许多细胞系中，则是CMV启动子更为有效。除此之外，各种CMV载体的表达率也会有超过一个数量级的差异，这部分是由于载体中其他调节元件所引起的。【转染方案】
一般提示：建立一套适当的转染方案；首先从一种标准方案开始，然后通过改变试剂／DNA的配比和形成复合物的数量进行优化。
转染复合物的制备—诸如转染试剂／DNA配比，离子强度，缓冲液pH值，以及温度等变量都会影响到转染复合物的组成和功能。质粒既可在无菌水又可在TE缓冲液中稀释。如果您要使用一种市售的转染试剂，就应当仔细阅读该试剂所提供的使用说明。需要对试剂提供方给予一定的信赖；除非您有很好的理由支持您做出改变，否则就应当严格按照他们所推荐的转染方案。在不含血清或其他蛋白的培养基中制备转染复合物；如果制备复合物所使用的培养基含有血清，它就会对转染产生抑制。制备转染复合物的最佳孵育时间是一个非常关键的环节，对于不同的转染试剂而言可能差别很大。
转染试剂／DNA配比（负载比）—所有的转染试剂都会在某一个试剂／DNA配比时最为有效。有时候这种最佳配比的所在范围非常狭窄；而且对于每种实验体系都必须进行优化才能得到最佳配比。为了寻找这种最佳配比往往会花费大量的时间和金钱。除了配比的重要性之外，所加入转染复合物量的多少也非常关键。
形成转染复合物所用的稀释剂—对于多数试剂而言，很关键的一点是要使转染复合物能在普通基础培养基和盐溶液中形成。
复合物数量—对转染细胞所用的转染试剂／DNA复合物的量也应当进行优化。如果用量太少，那么转染DNA的表达就太弱；如果用量太多，则可能由于细胞毒性或其他作用反而降低蛋白的表达。最佳用量通常都必须进行实验来确定。所需要的转染复合物用量与所用细胞的数量相关。转染细胞越少，所需复合物就越少。
转染复合物的加入—有两种替换方法可用来浆转染复合物加入转染细胞：1.将复合物浓缩液逐滴加入培养基，或者2.将转染复合物先用培养基稀释，然后进行培养基更换操作。第一种方法更简便，而第二种方法则更因为避免了试剂在局部浓聚而产生毒性，所以会使结果的一致性更好。
转染培养基—转染过程中所使用的培养基对转染效率可能会有正面或负面的影响。甚至对于基础培养基配方而言也是如此，尤其是在培养基中加入牛血清的情况下。胎牛血清的存在会使多种转染试剂的转染效率降低。某些公司还提供可与转染试剂配合使用的优化无血清转染培养基。而由罗氏应用科学部所提供的转染试剂则无论是否存在血清都能有效转染。FuGENE® H D是独一无二的能够转染保存在100％血清中肿瘤细胞的转染试剂。如果有抗生素（如，青霉素、链霉素、或两性霉素B）存在的情况下培养细胞，则转染有效性会降低至25％。因此，对于瞬时转染，我们建议使用不加抗生素的培养基。【时间进度】
一般提示：要确保最终结果的成功；建立一个合适的时间进度进行转染实验以保证您所需要的目标蛋白能得到最佳表达。
转染的开始—在转染前12小时，将细胞分种于培养板中。在转染开始时，培养物应当有约50-80％汇聚，这样就可以使它们在实验结束时达到接近100％的汇聚。如果在转染中去掉血清，细胞可能会暂时停止生长。细胞对转染复合物的摄取通常在0.5-6小时的时间内完成。在这段时间后，就不会再发现转染效率有所增长。
培养基更换—某些转染试剂在摄取阶段之后需要更换培养基。如果转染必须在没有胎牛血清存在的条件下进行，那么这一步骤就必不可少。至于可在血清存在的情况下使用的无毒性转染试剂（如，FuGENE® 6 转染试剂或FuGENE® HD 转染试剂）时，如果有足够的培养基用于后续表达阶段，就可以省略这一步。如果将转染复合物留在细胞中直到进行检测，那么对有些细胞系而言转染效率会有所提高，而另外一些细胞在转染开始几个小时之后其转染效率就不会再有升高。虽然在转染步骤之后转染试剂／DNA复合物通常不一定要从培养体系中清除，但在此后的长期生长阶段换用新鲜的培养基却是必须的。如果转染细胞需要生长3-7天，换培养基就尤其重要，这样一来就使它们有时间达到最高的蛋白表达量。
时间测定—通常在转染开始后的24-48小时间分析报告基因的表达。在这一时间段内，报告基因产物的浓度逐渐增加；而这种增加取决于增强子的强度、在表达外源蛋白中所涉及的细胞反应，存活细胞的健康状态，以及营养因素等。如果您要收集蛋白进行纯化，在转染后等待3-7天就更为常见了。在收集蛋白时，培养基中加入COMPLETE完全蛋白酶抑制剂（如，目录编号，11697498001；11836145001，可从罗氏应用科学部获得）用来防止蛋白降解是一个很好的措施。
【有血清时的转染】
血清一度曾被认为会降低转染效率，但只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。转染过程在两步中需要使用培养基做为稀释液：在DNA-阳离子脂质体复合物准备过程以及复合物同细胞接触过程。在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。但在复合物形成后，在加入细胞中前可以加入血清。阳离子脂质体和DNA的最佳量在使用血清时会有所不同，因此如果你想在转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用OPTI-MEMⅠ培养基，一种营养丰富的无血清培养基，或者在转染培养基中使用血清。对于对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。
【培养基中的抗生素】
抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血清培养基中细胞的健康生长，使用比含血清培养基更少的抗生素量。【细胞维护和培养的演变】
可以通过常规的次培养步骤保持转染铺板前的细胞健康。每周传代一到两次，稀释程度使得下次传代前细胞几乎融合。不要使细胞保持融合超过24小时。
大多数已建立的细胞系都是非整倍体，原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化，融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。比如，新鲜融化的NIH 3T3细胞比传代8次的细胞表现出更高的转染效率。融化细胞的进一步传代并没有降低转染效率。因此，如果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复最佳结果。或者，几种来源于经筛选，转染效率较高细胞亚系的细胞系现在有售。
【细胞铺板密度】
用于转染的最佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2×106-4×106细胞/ml时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。在三种不同密度进行细胞铺板的比较表明铺板密度最高的，CAT活性也最高。得到最高活性所需的LIPOFECTAMINE试剂的量也相应增加了。这些结果说明，对于转染相同量的DNA所需的最佳阳离子脂质体试剂的量会因细胞密度而异。
【启动子的选择】
获得高转染活性所需选择的启动子依赖于选用的细胞系和要表达的蛋白。CMV启动子在大多数细胞类型中可以获得高表达活性。同其他启动子，如SV40和RSV（劳斯肉瘤病毒）相比，在BHK-21中其活性最高。这三种病毒启动子在T细胞来源的细胞系，如Jurkat中组成表达水平较低。转染后在培养基中加入PHA-L和PMA可以激活Jurkat细胞中CMV启动子，而单PMA就足以激活KG1和K562（人骨髓瘤白细胞）中的CMV启动子。SV40启动子的表达在含有大T抗原（存在于COS-1和COS-7）时会提高，因为大T抗原可以刺激染色体外的合成。
【DNA量】
高质量的DNA对于进行高效的转染至关重要。以前研究者使用CsCl梯度离心得到的DNA进行转染，但是这种方法费时费力。其他的质粒纯化技术如Marligen的High Purity Plasmid Purification System使用独特的阴离子交换树脂纯化DNA，可以得到用于转染的高质量DNA。另外，Marligen的纯化系统实验步骤很简单，可以在2小时内完成。
【瞬时和稳定表达】
DNA转染后，转入基因的表达可以在1－4天内检测到。仅有一部分转入细胞的DNA被转运到细胞核内进行转录并最终输出mRNA到细胞质进行蛋白合成。几天内，大部分外源DNA会被核酸酶降解或随细胞分裂而稀释；一周后就检测不到其存在了。瞬时表达分析检测未重组质粒DNA上基因的表达。因此，表达水平与位置无关，不会受到周围染色体元件的影响。瞬时表达分析所需的人力和时间比稳定表达少，但因为DNA摄入效率和表达水平在不同实验中差异较大，实验必须很小心。为了进行稳定表达，转入的基因必须能和细胞同步复制。在转染的质粒自发整合到宿主基因组上时就会如此。在一小部分转染的细胞中，加入的DNA通过重组整合到基因组上。包含整合DNA的细胞很少，必须通过对药物的抗性筛选进行扩增或通过表型变化进行鉴定。稳定基因表达实验需要数周，如果需要验证蛋白产量，所需的时间更长。但得到的细胞系可以做为蛋白生产的稳定来源或用于得到转基因动物。
【瞬时转染和转染效率的监测】
基因的瞬时表达在24-72小时内就结束了。这种快速的瞬时表达非常适用于验证质粒表达和监测转染步骤的效率。可以使用报告基因来确定优化条件，其表达蛋白易检测，在目的细胞中不含此蛋白或水平很低。常用的报告基因包括氯霉素乙酰转移酶（CAT），绿色荧光蛋白（GFP），荧光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用简单的非同位素方法检测b-gal的表达以测定转染效率和活性。pCMV-SPORT-bgal质粒包含CMV启动子调控下的LacZ基因，转染入真核细胞内后可以直接表达bgal。结合简单的检测步骤，可以做为监测转染条件的一种方便灵敏的方法。
【稳定转染细胞系的筛选】
连同带有药物抗性的筛选标记基因一起转染目的基因是建立稳定转染细胞系最常用的方法。氨基糖苷磷酸转移酶基因（APH或neor）可以合成APH酶，通过磷酸化使药物失活，从而提供对GENETCIN选择性抗生素（G418 Sulfate）的抗性。抗生素抗性基因可以与目的基因在同一个质粒上，也可以在不同的质粒上。如果两个不同的质粒同时转染，两个质粒都可能整合形成稳定转化子。对于两种不同质粒的共转染，带有目的基因的质粒和带有筛选标记的质粒间的比例为3:1或更高以保证抗性克隆带有转染的目的基因。阳离子脂质体试剂提供了一种建立稳定转染株的高效方法。瞬时转染效率的改进一般也会提高稳定转染效率。比如，使用LIPOFECTAMINE PLUS试剂得到的NIH 3T3细胞GENETICIN抗生素抗性克隆的数目比单独使用LIPOFECTAMINE增加了大约3倍。要进行稳定的表达分析，在转染后次培养细胞，低密度铺板，给予生长空间，在几天或数周内保持筛选压力。生长的细胞比不分裂的细胞更快的受到GENETICIN抗生素的影响。转染后，在开始筛选前等待48-72小时，使细胞表达足够量的抗性酶，保证在开始筛选时可以自我保护。转染后48-72小时倒掉培养基，加入含有GENETICIN抗生素的培养基，抗生素的浓度根据剂量反应曲线确定，足够杀死未转染细胞。因为许多因子影响到筛选所需的GENETICIN抗生素的最佳浓度，包括细胞类型，培养基和血清浓度等，所以有必要对每种细胞作一个剂量反应曲线，确定最佳浓度（参见第7章实验步骤）。筛选最多可能需要一周时间，因为在致死剂量的GENETICIN抗生素存在条件下，细胞会分裂1-2次。在次培养细胞时使用较低剂量的抗生素，一般是筛选剂量的一半。筛选后的细胞一般是离散的克隆，根据实验目的不同，可以分别纯化（克隆），收集进行大量培养或染色并进行抗性克隆的计数。【蛋白表达和培养基的选择】
哺乳动物细胞系合成可溶的，翻译后修饰的蛋白，比细菌，真菌或昆虫细胞中表达的蛋白更有可能有生物活性。稳定转染的细胞可以合成大量的重组蛋白，而瞬时转染细胞可以快速表达，迅速地合成小量蛋白。常用的细胞系包括CHO，293和COS-7。Invitrogen提供克隆的293-F，293-H，COS-7和CHO-S细胞，来源于经筛选转染效率更高的亚细胞系。这些细胞也可用于无血清和限定化学成分培养基。重组蛋白的大规模生产一般在稳定转染的悬浮细胞中进行。这些细胞易于生长到高密度并合成更多蛋白。使用基质珠做为固相支持可以使贴壁细胞悬浮生长。用于蛋白生产的细胞的转染可以在添加有血清或无血清培养基中进行。但更倾向于使用无血清培养基表达蛋白，因为血清蛋白会干扰下游表达蛋白的纯化。无血清培养基一般针对某一特定细胞类型优化并有几类无血清培养基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培养基低得多）。无蛋白培养基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物。限定化学成分的培养基不含有蛋白或未知组成的成分。多种多样的配方使您可以选择最适合您应用的一种。在含血清时转染的细胞可以适应无血清培养基，无蛋白培养基或限定化学成分的培养基。在部分情况下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），对于已适应无血清或无蛋白培养基的细胞，可以使用其培养基进行转染。其他一些无血清培养基包含抑制阴离子脂质体介导转染的成分。在这些情况下，有必要在诸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培养基中进行培养和转染。
脂质体介导DNA转染法
脂质体(lipofectin regeant,LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy, Propyl]-n, n,n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1:1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5～100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。
用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1～5μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间(2～24小时)。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。
细胞种类：COS-
7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。
1、操作步骤[方法一]：
(1)：取6孔培养板(或用35mm培养皿)，向每孔中加入2mL含1～2×105个液，37℃CO2培养至40%～60%汇合时(汇合过分，转染后不利筛选细胞)。
(2)转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL，B液：用不含血清培养基稀释2-50μgLR，终量100μL,轻轻混合A、B液，室温中置10-15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染(如出现沉淀可能因LR或DNA浓度过高所致，应酌情减量)。
(3)转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入1mL不含血清培养液。
(4)转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6～24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。
(5)其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。
注意：转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。
2、快速脂质体转染法操作步骤如下[方法二]：
(1)以5×105细胞/孔接种6孔板(或35mm培养皿)培养24小时，使其达到50～60%板底面积。
(2)在试管中配制DNA/脂质体复合物方法如下：
①在1mL无血清DMEM中稀释PSV2-neo质粒DNA或供体DNA。
②旋转1秒钟，再加入脂质体悬液，旋转。
③室温下放置5～10分钟，使DNA结合在脂质体上。
(3)弃去细胞中的旧液，用1mL无血清DMEM洗细胞一次后弃去，向每孔中直接加入1mL DNA/脂质体复合物，37℃培养3～5小时。
(4)再于每孔中加入20%FCS的DMEM，继续培养14～24小时，(5)吸出DMEM/DNA/脂质体混合物加入新鲜10%FCS的DMEM，2mL/孔，再培养24～48小时。(6)用细胞刮或消化法收集细胞，以备分析鉴定。
稳定的脂质体转染方法如下：
(1)接种细胞同前，细胞长至50%板底面积可用于转染。
(2)DNA/脂质体复合物制备转染细胞同前(2)、(3)步骤。
(3)在每孔中加入1mL、20%FCS的DMEM，37℃培养48小时。
(4)吸出DMEM，用G418选择培养液稀释细胞，使细胞生长一定时间，筛选转染克隆，方法参照细胞筛选法进行。转染实验要注意的一些事项
DNA转染后，转入基因的表达可以在1－4天内检测到——仅有一部分转入细胞的DNA被转运到细胞核内进行转录并最终输出mRNA到细胞质进行蛋白合成。几天内，大部分外源DNA会被核酸酶降解或随细胞分裂而稀释；一周后就检测不到其存在了。因此转染也可以分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染（transient transfection）指的是转染的核酸不整合到染色体上，结果是短暂的高水平表达，可在24—96小时内检测表达效果，表达水平与位置无关，不会受到周围染色体元件的影响。瞬时表达分析所需的人力和时间比稳定表达少，但因为DNA摄入效率和表达水平在不同实验中差异较大，不长久也不稳定。超螺旋质粒转染更倾向于瞬时表达。瞬时表达适合研究启动子等调控元件——不过，诱导型的启动子除外。稳定转染，就是转染的质粒DNA整合到染色体上，或者相当于附加子（episome）可持续存在，使得转染的细胞可长期表达。外源基因整合的几率很小，要获得稳定转染的细胞株，通常需要有筛选标记（比如抗性基因）共同转染，通过选择压力维持表达的稳定——不行的统统枪毙了。质粒整合到染色体上本来就是件稀罕事儿，平均万分之一的几率，如果是线性化DNA转染，那整合的几率就高多了。不过怎么整合也就是一个或者有限的几个拷贝，所以表达量往往比较不高的。但是，“压倒一切的是'稳定'”，很多时候，转染后往往要进行稳定表达的筛选。
成功转染第一步：细胞培养注意事项
细胞系的选择通常不是我们说了算的。有时是实验的需要，有时是实验室条件的限制。如果有选择的余地当然挑个容易做的。越是接近体内的真实情况的原代细胞，通常越是难于伺候。反之亦然。此外细胞本身的特性也是需要考虑的因素。有时需要根据细胞系来选择合适的转染方法；而有时一些启动子在不同的细胞系中表现的功能也不同。这些都是设计实验时需要考虑的因素，姑且不论。不过因为受限于特定的细胞，如何选择合适的转染方法就值得考究了。因为不同的细胞可能适用不同的转染试剂和转染条件。如果实验室已经建立了全套方法，照做可也。如果是个新来的细胞株，最好查查资料看哪些成功转染案例。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，看看其中是否有你的新对手——这个FuGENE 6 比较有优势，已有750多种细胞系成功转染的资料可供参考。
当实验进行到转染这一步时需要注意的因素有哪些呢？
一、健康而茁壮成长的细胞
转染前细胞最好经过1—2次传代，以保证细胞生长旺盛，容易转染。注意，贴壁细胞生长到几乎汇片时就要赶快进行下一次传代，千万不要使细胞保持融合超过24小时。
大多数已建立的细胞系都是非整倍体，细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化，这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化，融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。比如，新鲜融化的NIH 3T3细胞比传代8次的细胞表现出更高的转染效率（融化细胞的进一步传代不会马上降低转染效率）。因此，如果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复最佳结果。
二、恰到好处的铺板密度
转染时的细胞密度对转染效率影响非常显著。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂，最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法，包括适当的接种量和培养时间等等。一般转染时贴壁细胞密度为40%-80%，但这个需要参考所选转染试剂的说明书——阳离子脂质体具有微量的细胞毒性而往往需要更高的铺板密度或者更多的悬浮细胞数，有的要求细胞90%汇片；而有些多胺或者非脂质体的配方则要求在40%—80%之间，总之是尽量在细胞最适的生理状态下转染，以求最佳的转染效果。
不同的实验目的也会影响转染时的铺板密度，比如研究细胞周期相关基因等表达周期长的基因，就需要较低的铺板密度，所以需要选择能够在较低铺板密度下进行转染的试剂。需要特别注意。
三、温暖舒适的培养基
健康的细胞培养是一切成功转染的基础。不同的细胞类型有不同的特性，需要特定的培养基、血清、补充添加剂等等。血清
血清一度曾被认为会降低转染效率，老一代的转染方法往往要求转染前后洗细胞或者在无血清培养基条件下转染，对于某些对血清要求敏感的细胞来说是个难题。不过转染产品配方几经革新后的今天，对于主流的转染试剂来说，血清的存在已经不会影响转染效率，甚至还有助于提高转染效率，比如FuGENE6、Effectene和GeneJuice等。对于多数可以在有血清条件下工作的转染试剂来说，血清的存在会影响DNA—转染复合物的形成，但只要在DNA-转染复合物形成时用无血清培养基来稀释DNA和转染试剂就可以了，在转染过程中是可以使用血清的。这些方便好用、可在有血清条件下转染的试剂包括前面介绍的Lipofectamine2000，FuGENE 6，GeneJuice，Effectene，Polyfect等等。最厉害的是Qiagen的2个产品，Polyfect和Effectene，全程都可以用有血清和抗生素等添加剂的完全培养基来操作，包括稀释步骤，不用担心培养基的变化对细胞生长有什么不良影响了。这样，就不再需要在转染前多次洗细胞，也就减少操作的复杂程度，更重要的是不必再让细胞处于无血清的“悲惨环境”中转染，不必担心对血清缺乏很敏感的细胞受到不必要的麻烦了。娇贵的细胞们，你们有福了。不过要特别注意：对于RNA转染，如何消除血清中潜在的RNase污染是值得关注的。所以血清的质量也是需要关注的。新加培养基的预热对细胞转染很有帮助。抗生素
支原体、细菌、真菌污染，无论对于细胞培养或者转染都可能会严重影响转染结果，细胞培养过程中往往会添加抗生素来防止污染。但是这些添加剂可能对转染造成麻烦。比如青霉素和链霉素，就是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这可能间接导致细胞死亡，造成转染效率低。所以，对于选择Lipofectamine2000系列转染试剂的实验，要特别注意在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血清培养基中细胞的健康生长，使用比含血清培养基更少的抗生素量。这里又要表扬Qiagen的2个产品，Polyfect和Effectene，因为全程都可以用有血清和抗生素等添加剂的完全培养基来操作，很方便的。对于筛选稳定表达株，要预留足够的时间让抗性基因表达后再添加筛选压力。
其他添加物如抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖这些物质的存在可能会干扰DNA和转染试剂形成复合物的过程，要尽量避免。
一、质粒的构建：启动子的选择
启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。
启动子可分为2大类：诱导型启动子是比较精明的，平时歇着，一旦接到诱导信号指示就马上开工干活儿。而组成型启动子比较老实的，就是从头到尾不停干活从不闲着的那种——比如我们很熟悉的CMV启动子，SV40，pMC1，PGK启动子等等。
获得高转染活性所需选择的启动子依赖于选用的细胞系和要表达的蛋白。CMV启动子在大多数细胞类型中可以获得高表达活性。在BHK-21中，CMV启动子活性比其他启动子如SV40和RSV都要高。但这三种病毒启动子在T细胞来源的细胞系，如Jurkat中组成表达水平较低。转染后在培养基中加入PHA-L和PMA可以激活Jurkat细胞中CMV启动子，而单PMA就足以激活KG1和K562（人骨髓瘤白细胞）中的CMV启动子。SV40启动子的表达在含有T抗原（存在于COS-1和COS-7）时会提高，因为T抗原可以刺激染色体外的合成。
一个强悍的高表达组成型启动子是我们做表达所求之不得的，但是对于转染本身来说却不一定好——因为任何持续过高表达外源基因都可能带来某种程度的细胞毒性，影响细胞生长——如果外源基因本身对细胞生长有毒，那更完蛋了，你很可能筛不到转染成功的细胞株，更别提稳定转染了——因为过量表达本身可能已经害死了那个转染了的细胞，没转染的细胞又死于筛选压力。这种时候一个不那么“能干”的启动子可能更适合一些。如果你曾经遇到原因不明的转染失败案例，会不会是这个原因呢？过犹不及就是这个道理咯。
诱导型启动子对于转染来说，特别是稳定转染，可能是更好的选择。它使得目的基因的表达可以受到我们的调控——转染的时候不表达，筛选稳定表达株后再诱导表达，使得表达有毒性的基因或者精确分析表达产物的生物学效应成为可能。多数诱导型启动子在接受某种信号后“打开开关”开始工作，也有的相反，在缺失某种信号后打开开关。Clontech还有个诱导系统是“剂量依赖的”，就是说不单表达开关可控，表达量多少也可以通过诱导剂的量来调控。还有一种特殊的启动子很好玩——具有时序性或者组织特异性（空间特异性），会受到特定的元件调控，在一定的时间或者特定组织细胞中表达的，比如那个转基因山羊奶里用的只在泌乳期的乳腺细胞中表达的启动子——有人说这是组成型的，我觉得应该是诱导型的，只不过诱导的因素我们不知道罢了，这类启动子在不同的细胞中会有不同的表现，需要注意。诱导系统的问题主要是本底表达，表达量有限，以及诱导剂本身对细胞的影响和如何清除。
转染DNA的启动子-增强子如果不被宿主细胞识别也会产生无法表达的“悲剧”，这是实验设计时需要注意的问题。不过现在利用现成试剂盒或者模拟国外已经成功的实验的居多，独立构建表达系统的极少，因而这种问题遇到的几率也几乎可以忽略不计。
目的基因：这个对于研究人员来说是目的，因而没有选择的余地。如果你的目的基因正好会影响选定细胞株的生长，甚至有毒，那最好选择一个诱导型的启动子，不然你可能总是转染不了。但是通常在实验之前我们不清楚我们研究的基因产物是否对选定的细胞有毒，所以正负对照很重要。当排除其他原因后转染总是失败，应当从根本上考虑原因。
二、质粒的大小和质量
线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大，又没有经验，选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些促进DNA凝聚的成分，使得DNA形成转染复合物时更致密一些，更容易转染一些。
纯化质粒的质量无疑会影响转染效率。哺乳动物细胞总归是比大肠杆菌娇气，转染难度高些，因而要求的DNA纯度要更高些。早年要做转染真是大阵仗啊，光是提质粒做超离就令人皱眉。最令人头疼的是内毒素了。内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上特有的成分，主要是脂多糖中的类脂A（lipopolysaccharides），在细菌被裂解时被释放出来，由于其化学结构和特性，在质粒提取的过程中内毒素很容易混入质粒DNA中共同纯化出来。内毒素的存在会严重地影响转染效率，此外内毒素可能会激活造血细胞（例如B细胞、巨嗜细胞等）的非特异免疫反应，造成实验中的假阳性。所以质粒DNA转染时应尽量采用无内毒素污染的超纯质粒。幸好技术的进步令复杂的操作成为过去，多数实验室会选择使用转染级别的质粒纯化试剂盒纯化的质粒来转染。对于一些“耐受性高、容易操作的”细胞株，普通的Kit已经够了。对于一些对内毒素特别敏感的细胞，就要用“去内毒素”的质粒纯化Kit了。Qiagen的Endofree系列可以得到相当于2次CsCl超速离心纯度的质粒，同时特别设计去除内毒素，专为最娇气的细胞系转染和体内DNA疫苗而设计。此外现在Invitrogen和Stratagene都有一些快速纯化质粒同时也去内毒素的Kit，使得去除质粒中的内毒素更为简便。
质粒DNA的浓度和量：既然质粒纯化已经不成问题，初学者通常都不会在乎甚至愿意多加点DNA，但是要注意的是，DNA量过少固然转染效率不高，DNA量过多同样会降低转染效率。有的初学者习惯按照说明书123地去操作而不求甚解，你“知其然”是否还“知其所以然”呢？DNA:转染试剂的比例的优化是非常重要的，特别是对于阳离子脂质体、多胺等带电荷的转染试剂来说，DNA-转染复合物所带的净电荷是由转染试剂和DNA的比例决定的，而转染复合物是否能更好地结合到带负电的细胞膜上，很大程度取决于这个净电荷。所以预实验需要按照说明书的要求，按一定比例混合适量的质粒DNA和转染试剂。有的转染试剂要求DNA的量多些，有的转染试剂效率高只要很少DNA，比如Effectene只需要常规五分之一的DNA。所以转染前最好能精确定量质粒。另外由于质粒本身的因素（比如目的基因产物是否有毒、启动子强弱等因素），单独DNA也会对细胞生长有一个基础的影响，所以同时做几组不同量的对照实验进行优化是很有帮助的。另外值得注意的是，当细胞铺板密度较高时，需要的质粒DNA和转染试剂的量也会略微提高
第二篇：动物细胞.教案doc
动物细胞【教案】
一、课型：新授课。
二、教学目标：
1、知识与技能目标（1）认识动物细胞的结构，并能说明动、植物细胞基本结构的异同；
（2）制作人的口腔上皮细胞临时装片，并使用显微镜观察；
2、过程与方法目标
通过探究法、讲授法、讨论交流法、演示法、多媒体辅助教学等多种方法相结合，以激发学生主动学习为主，提高学生学习的兴趣，引导学生发现问题、分析问题、解决问题。
3、情感态度与价值观目标
（1）体验科学探究的艰辛与喜悦，培养学生严谨认真、团结合作的精神。
三、教学重难点
1、教学重点：（1）动物细胞的基本结构。
（2）制作人的口腔上皮细胞临时装片，并使用显微镜观察
2、教学难点：（1）制作人的口腔上皮细胞临时装片
四、教具准备
1、PPT课件。
2、器材：消毒牙签、滤纸、0.9%的生理盐水、稀碘液、载玻片、盖玻片、滴管、纱布、镊子、显微镜。
五、课时安排：1课时
六、教学方法：
讲授法、探究法、讨论交流、练习法、问答法、演示法、多媒体辅助教学法等。
七、教学过程： 新课导入
【老师】同学们，上课了。首先，我们来回顾一下上节课所学的植物细胞的基本结构； 【师生互动】
【设问】我们已经知道了植物细胞的结构，那么动物细胞是什么样的呢？想看看自己身上的细胞吗？ 【学生】回答
【老师】今天我们就来通过观察自己的口腔上皮细胞，来认识动物细胞；
【板书】动物细胞 讲授新课
【板书】
一、制作人的口腔上皮细胞临时装片
【老师】首先，用洁净的纱布将载玻片擦拭干净。【演示】 【板书】擦
【老师】接着，在载玻片中央滴一滴生理盐水。【演示】
【板书】滴
【老师】接着漱口，因为口腔上皮脱落的细胞较少，而且有很多食物残渣，所以采前必须漱口。【演示】 【板书】漱
【老师】漱完口，我们用消毒的牙签在口腔内壁上轻轻刮几下，注意：不要用力太猛，以免刮伤自己哦。【板书】刮
【老师】把牙签附有碎屑的一端放在载玻片上的生理盐水中，轻轻涂几下。【演示】 【板书】涂
【老师】再用镊子夹起盖玻片，先让它的一端接触载玻片的水滴，再缓缓地放平。注意避免盖玻片下出现气泡。【演示】 【板书】盖
【老师】再在盖玻片的一侧滴加几滴稀碘液，用吸水纸在盖玻片的另一侧吸引，使碘液浸润标本的全部。【演示】 【板书】染——吸
【老师】装片做好后，我们就可以用显微镜观察了。【提问】显微镜的使用步骤是怎样的？ 【学生】回答
【讲解】取——取出显微镜，安——安装显微镜，对——对光，放——放置装片，调——调节焦距，最后观察。
【老师】下面大家就观察一下我们自己的口腔上皮细胞，并画出
生物简图。【学生】学生活动
【老师】你们观察到的细胞是不是和老师这张图片类似呢? 【学生】回答：是
【讲解】这就是人的口腔上皮细胞。
【老师】和我们之前所学的植物细胞的结构进行对比一下，你们觉得动物细胞都有哪些基本结构呢？ 【板书】
二、动物细胞 【学生】回答
【讲解】最外面的这一层叫——细胞膜，颜色最深的这块叫——细胞核，那细胞膜和细胞核之间的叫什么呀？ 【学生】回答：细胞质
【老师】对!人和动物细胞的结构就是这样的，有细胞膜、细胞核、细胞质，当然，还有线粒体。它们的功能和植物细胞中的都是差不多的。【板书】
1、基本结构
【提问】细胞膜有什么功能啊？ 【学生】保护细胞并控制物质进出 【提问】细胞核呢？
【学生】是储存遗传物质的主要场所 【提问】细胞质呢？
【学生】是细胞生命活动的主要场所 【提问】那线粒体呢？
【学生】为细胞的生活提供动力
【老师】看来大家对之前所学的掌握的不错，掌声鼓励下自己。【老师】动物细胞的形态也是多种多样的。看，这是我们的红细胞、肌肉细胞、骨细胞、神经细胞。【板书】
2、形态：多种多样 课堂小结
【老师】下面，我们一起来回顾一下本节课所学的内容。我们首先学习了口腔上皮细胞临时装片的制作，步骤是怎样的？ 【学生】擦、滴、漱、刮、涂、盖、染——吸
【老师】这里的滴，滴的是什么呀? 【学生】生理盐水
【老师】我们做植物细胞时，滴的是什么呀？ 【学生】清水
【提问】为什么我们在观察植物细胞和动物细胞时要分别滴上清水和生理盐水呢？我们把这儿的生理盐水换成清水行不行呢？为什么？
【学生】思考回答
【讲解】因为动物细胞没有细胞壁，使用清水会使细胞吸水而破裂，而生理盐水可以保持人体细胞的生活状态。所以，不能将生理盐水换成清水。
【老师】接着，我们通过观察，认识了动物细胞的基本结构，都有哪些呢？ 【学生】回答
课堂练习
【老师】下面我们就将植物细胞和动物细胞进行对比，来填一填这个表格
【师生互动】完成表格
【老师】下面就请同学们迅速的把课后第一题做一做。【老师】老师这里有两张细胞模式图，你们能区分出谁是植物细胞谁是动物细胞吗？ 【学生】 资料阅读
【老师】下面我们来阅读下书上49页，科学家的故事。【学生】活动
【老师】读完这个故事，你有什么启发呢？ 【学生】回答 课后作业
【老师】好，今天的课就上到这，下来请同学们根据动物细胞的结构，发挥自己的想象力，制作出动物细胞模型
八、板书设计
动物细胞
一、制作人口腔上皮细胞临时装片 步骤：擦、滴、漱、刮、涂、盖、染——吸
二、动物细胞
1、基本结构
2、形态：多种多样
第三篇：动物细胞教案设计
动物细胞教案
姓名：员卫兰
单位：中牟县姚家镇初级中学
日期：2018年5月
第三节 动物细胞教案
●学习目标
1．进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞。2．说明人口腔上皮细胞的基本结构。3．区别动植物细胞结构的主要不同点。4．提高制作以及观察临时装片的技能。
5．通过对动植物细胞间差别的比较提高学生的观察能力。6.设计实验、改革实验，开发自己的创新潜能，以此来体会科学探索的思想方法是不断发展的，继续形成“胆大心细”的心理素质；在“模拟制作”活动中，提高学习生物学的兴趣。
●教学重点
1．说明人口腔上皮细胞的基本结构。2．比较动植物细胞的相同点和不同点。3．提高实验能力和观察能力。●教学难点
1．制作临时装片过程中的刮取（首次观察自己身体上的细胞，学生感到新鲜又好奇，取材关系到实验效果）。
2．细胞结构的观察（与植物细胞相比不易观察、略有难度）。3．设计实验（应用以往的学习经验，是较高层次的学习）。●教学方法
谈话法、实验法。●教具准备 1．教师准备：
（1）有关制作人的口腔上皮细胞临时装片的多媒体录像。（2）人的口腔上皮细胞结构及洋葱鳞片叶肉表皮细胞挂图各一张。
（3）学生分组实验用的生理盐水、稀碘液、消毒牙签、滴管、纱布、镊子、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜、清水和熬好的清洁的琼脂。
2．学生准备：（1）3H铅笔、橡皮、实验报告纸及一些其他动物材料。
（2）各种果脯、小塑料食品袋、线等。●课时安排
1课时
●教学过程 ［导入新课］
教师活动：引入导言
用谈话式教学方法引入本节内容。具体活动如下： 上节课我们通过制作临时装片，观察并认识了植物细胞的基本结构。那么动物和人体细胞的结构是什么样子的呢？它和植物细胞结构一样吗？这节课我们就来解决这些问题。
［讲授新课］
通过学习临时装片的制作，我们掌握了观察细胞的方法，我想大家一定想看看我们自己身体上的细胞吧？我们通过实验观察人的口腔上皮细胞来观察了解一下。那么人的口腔上皮细胞在哪儿呢？（学生回答，教师作鼓励评价）它就在人的口腔内壁上。如何来取这些细胞，又如何来对它们进行观察呢？请大家自己设计方案。
实验步骤：
（一）制作人口腔上皮细胞临时装片
学生活动：应用以前学习经验设计不同的取样和制片观察的方案，同一组同学之间方案尽量不要一致，以增加对比性。通过相互观察对比，得出一种比较合理的观察方案。互相交流。
教师活动：教师引导学生把自己组的设计方案和课本设计方案对比，得出最佳设计方案，然后教师演示临时装片的制作步骤，并讲解注意事项。学生活动：学生根据老师的演示和讲解，自己动手制作临时装片。
（二）用显微镜观察人的口腔上皮细胞
教师活动：引导学生复习显微镜的使用方法。
学生活动：学生自己动手在显微镜下观察自己制作的临时装片
（三）绘图
教师指导学生边观察，边绘制自己观察到的细胞，并尝试注出各部分的名称。
教师活动：现在我们对自己的细胞已有所认识，接下来我们再来观察一些其他动物材料的装片，对所观察到的细胞作一比较总结动物细胞的结构。
学生活动：用一些其他材料制作临时装片进行观察、比较总结动物细胞的基本结构，并将所观察到的细胞结构画到实验报告纸上。
教师活动：动物细胞的结构：大家通过观察知道包括细胞膜、细胞质和细胞核三部分。（出示人体口腔上皮细胞和洋葱鳞片叶内表皮细胞挂图）请大家指出二者之间的区别在哪儿。学生回答：动物细胞没有细胞壁、液泡和叶绿体。回答非常正确，以上答案也正是区分动物细胞和植物细胞的主要依据。好了，为了进一步认识动物和人体细胞的结构，我们来做一个动物细胞的模型。请参照“模拟制作”的方法（出示熬好的清洁的琼脂）。
学生活动：利用熬好的琼脂、清水、果脯、塑料袋、线等物，依步骤做一个动物细胞的模型。并指出塑料袋、琼脂和果脯各代表动物细胞的哪些结构。
［课堂小结］
本节课我们通过对各种动物细胞的观察、讨论并总结出了动物细胞的结构，而且还和植物细胞结构作了比较，认识到动物细胞和植物细胞结构之间的区别。为了进一步加深认识，下面我们来做一些课堂练习。
［巩固练习］
1．人体或动物体的各种细胞虽然形态不同，基本结构却是一样的，都有__________、__________和__________。
2．动物细胞与植物细胞相比较，没有__________、__________和__________结构。
3．回忆所做的《观察植物细胞》和《观察人的口腔上皮细胞》的实验。
（1）实验中用洋葱鳞片叶表皮细胞和口腔上皮细胞制作的玻片标本叫__________。
（2）在制作洋葱鳞片叶表皮细胞和口腔上皮细胞实验中，开始在载玻片上分别用滴管滴一滴__________和__________。
（3）洋葱鳞片叶表皮细胞和口腔上皮细胞相比，共同的结构是________________、________________和__________。洋葱鳞片叶表皮细胞还具有__________和__________以及黄瓜表皮果肉细胞的__________是植物细胞特有的结构。
（4）《观察植物细胞》和《观察人的口腔上皮细胞》的实验中染色使用的染料都是__________？
（5）回忆《制作动物细胞模型》的过程，你认为细胞是平面的还是立体的？
4．采取人的口腔上皮细胞时，需要用的工具是（）A．消毒牙签
B．消毒棉球C．消毒镊子 D．消毒玻璃棒 5．制作人的口腔上皮细胞装片时，在载玻片上先滴一滴（）A．清水
B．稀碘液 C．生理盐
D．盐水 6．动植物细胞共有的结构是（）①细胞壁 ②细胞膜 ③细胞质 ④细胞核 ⑤液泡 ⑥叶绿体
A．①②③
B．②③④ C．②③⑤
D．①⑤⑥ ［布置作业］
按照做动物细胞膜型的思路，设计并动手做一个类似植物细胞的模型。再想一想你所用的每一种材料相当于植物细胞的哪种结构。
●活动与探究
（1）选取植物的茎的横切片、叶的横切片、根的纵切片，通过观察认识植物的各种组织细胞，同时训练显微镜的使用技术。
（2）选取动物的结缔组织、神经组织、肌肉组织、上皮组织切片，观察认识各种动物的组织结构特点。
●板书设计
第三节 观察动物细胞
一、动物细胞基本结构
二、动植物细胞结构的区别
动物细胞结构没有：1．细胞壁2．液泡3．叶绿体
第四篇：动物细胞说课稿
动物细胞说课稿
动物细胞说课稿1
1教学目标
1、怎样制作人的口腔上皮细胞临时装片。
2、动物细胞的基本结构是怎样的。
3、动物细胞与植物细胞在基本结构上有哪些相同点和不同点。
2学情分析
初一年级的学生对植物细胞的基本结构已经有了初步的了解，并且具有一定的逻辑思维能力。他们正是身体发育的旺盛阶段，也是思维较活跃的时期，探索知识的积极性很高，学习和运用知识的欲望也很强。故，本节内容比较容易。
3重点难点
重点：
1、说明人的口腔上皮细胞的基本结构。
2、比较动植物细胞基本结构的相同点和不同点。
难点：
1、制作人的口腔上皮细胞临时装片过程中的刮取。
2、细胞结构的观察
4教学过程
4.1第一学时
教学活动
活动1【活动】动物细胞
一、复习
植物细胞的基本结构
（教师提出问题，学生回答后。教师调出课件中的植物细胞基本结构图）
二、引入新课
前面，你已经知道植物细胞的基本形态和结构，那么动物细胞是什么样子的呢？下面，我们先来制作人的口腔上皮细胞的临时装片和观察人的口腔上皮细胞。
三、实验观察人的口腔上皮细胞
（教师调出课件中的目的要求、材料用具、方法步骤中的第一大步骤：“制作人的口腔上皮细胞临时装片。”其中，展现：制作口腔上皮细胞的五个步骤要一步一步的出现。指导学生进行实验操作。）
目的要求：
1制作并观察人的口腔上皮细胞临时装片
2认识人的口腔上皮细胞的基本结构
材料用具：
生理盐水，稀碘液，消毒牙签，滴管，纱布，镊子，吸水纸，载玻片，盖玻片，显微镜。
方法步骤：
（一）制作人的口腔上皮细胞临时装片
1用洁净的纱布将载玻片、盖玻片擦拭干净。
2在载玻片中央滴一滴生理盐水。
3用消毒牙签在自己已漱净的口腔内壁上轻刮几下。把牙签附有碎屑的一端放在载玻片上的生理盐水中，轻涂几下。
4用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，再将盖玻片缓缓放平盖在水滴上。注意避免盖玻片下出现气泡。
5在盖玻片的一侧滴加几滴稀碘液，用吸水纸在盖玻片的另一侧吸引，使碘液浸润标本的全部。
（二）思考
（教师先提出第一个问题，学生回答后教师调出课件中给出的答案。然后，教师再提出第二个问题。）
1制作人的口腔上皮细胞临时装片时，为什么要用生理盐水？用清水行不行？
因细胞液有一定的浓度，它与生理盐水的浓度一样，用生理盐水不会使细胞涨破或萎缩，使它维持原壮，便于显微镜下观察。
不行
2人的口腔上皮细胞的基本结构是怎样的？
要知道这个问题的结果，下面，我们用显微镜观察做好的人的口腔上皮细胞临时装片。
（教师调出课件中的这个实验的第二大步骤：“用显微镜观察人的口腔上皮细胞、和第三大步骤：绘图。”并指导学生观察细胞的结构，帮助学生绘制出看到的细胞结构图。）
四、1动物细胞的基本结构
（教师调出课件中动物细胞结构图，引导学生指出动物细胞的结构，教师总结归纳）
2形态多样的动物细胞
（教师调出课件中的形态多样的动物细胞图和参看教科书上46页想一想，议一议中出现的皮肤上皮细胞、红细胞图，帮助学生归纳出：动物细胞都具有细胞膜、细胞质、细胞核。）
五、动植物细胞结构的.异同
（教师引导学生归纳出动物细胞与植物细胞的相同点和不同点，教师调出课件中的动植物细胞结构的异同图。）
六、构成生物体的基本单位
（教师引导学生归纳出：构成生物体的基本单位是细胞。并展现出课件中的“构成生物体的基本单位”页面。）
七、活动：制作动物细胞模型
（教师展现出课件中的“活动：制作动物细胞模型”页面，并将学生分成七组进行操作。教师指导学生完成模型的制作并将各小组做好的模型进行展示。）
八、练习：
（教师调出课件练习中出现的六大题，让学生课堂上完成。）
动物细胞说课稿2
说教学目标
根据学生的认知特点及教材要求特制定以下目标：
1、知识方面
⑴动物细胞培养（知道）
⑵动物细胞融合（知道）
⑶单克隆抗体的制备及应用（知道）
2、态度观念方面
⑴初步培养学生勇于探索，不断创新的精神和合作精神。
⑵通过向学生介绍几大动物细胞工程的发展动态及一些新的研究成果，使学生明确人们对生命奥秘的揭示愈加广泛和深入，知识不断更新并向前发展。认识到学无止境，形成终生学习的意识。
3、能力方面
⑴在学习动物细胞培养过程中，学生通过阅读、自学、质疑、讨论、训练、总结等环节，逐步提高获取知识的能力、逻辑思维能力、分析问题和解决问题的能力。
⑵由植物细胞杂交技术导出动物细胞融合过程，培养学生的知识迁移能力、思维能力。
说教学内容
单克隆抗体既是本节重点也是难点
分析：动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。其中前三大技术为本节教材的主体内容，而胚胎移植、核移植技术以小字科普读物的形式出现，意在使学生在有所侧重的前提下对动物细胞工程发展概况有一个较全面的了解。在教材重点介绍的三大动物细胞工程技术中，动物细胞培养是其他技术（如单克隆抗体、胚胎移植、核移植等）的基础，其价值更多的是通过其他技术成果来体现的。而动物细胞融合技术目前较为成熟的最重要的用途便是制备单克隆抗体。由此可见，单抗技术应属较高层次的动物细胞工程技术。对他的学习有助于学生较深刻的领悟动物细胞工程的真谛，并从两位诺贝尔奖获得者对单抗独具匠心的实验设计中，深刻体会科学态度、科学方法，尤其是创造性的思维品质在科学研究、发明创造中决定性作用。基于以上认识，单克隆抗体应列为本节的重点内容。同时单克隆抗体技术本身环节多、技术复杂，加之学生对此缺乏必要的认识，所以也是本课的难点所在。
说教学方法
鉴于学生的学习特点及本节内容设计以下教学方法：指导学生自学动物细胞工程的原理、过程从中得到一些概括性的认知、启发他们进行对比联系、师生共同探究新科技、新成果。
动物细胞说课稿3
一、教材分析
1、教材的地位和作用
本节课是生物学人教版七年级上册第二单元第一章第三节的内容，本单元主要是引导学生在细胞水平上认识生物体，教学上会有一定困难。这是因为细胞结构微小，距离学生的生活经验较远。因此，应当多给学生提供用显微镜观察细胞的机会，增加学生对细胞的感性认识。本节课尽管内容比较抽象，但是学生有了前面的植物细胞的观察作为基础，学起来还是比较容易的。
2、三维目标
知识目标
① 进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞，说明人口腔上皮细胞的基本结构。
② 区别动植物细胞结构的主要不同点。
能力目标
提高制作以及观察临时装片的技能。
情感态度价值观
设计实验、改革实验，开发自己的创新潜能，以此来体会科学探索的思想和方法是不断发展的；继续形成“胆大心细”的心理素质；在“模拟制作”活动中，提高学习生物学的兴趣。
3、重点和难点
重点：说明人口腔上皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的相同点和不同点；提高实验能力和观察能力。
难点：制作临时装片过程中的刮取（首次观察自己身体上的细胞，学生感到既新鲜又好奇，取材关系到实验效果）
细胞结构的观察（与植物细胞相比不易观察，略有难度）；
设计实验（应用以往的学习经验，是较高层次的学习）。
二、学情分析
七年级的学生还是处于一个好动的年龄，在学生已经观察了植物细胞的结构并有一定的了解下，这节课采用灵活的教学方式，让学生在动手中进一步了解动物细胞的结构。而且在学生实验能力没有得到充分的锻炼下，还不是很强，所以只有充分的感性认识才能吸引学生兴趣，把握课堂的重点。
三、设计理念
新课程标准提出“提高学生科学素养”，就是要把我们在教学中只注重对学生科学知识的传授转向全面提高学生科学素养的教育，强调学生在生物学知识、科学探究技能、情感态度与价值观等领域的全面发展。因此，我在教学中遵循“从做中学，学中做”的原则，运用实验法、比较法、多媒体演示法等方法进行教学，学生在教师的指导下可以运用小组合作法、比较法、观察法等方法学习。
四、教学环节
（一）创设情境，引入新课
复习：临时装片的制作方法；植物细胞的基本结构。
温故而知新，提出问题：
①想看看自己身上的细胞吗？
②人的细胞与植物细胞有什么相同和不同之处？
引导学生联系自身，提出问题，创设学习情境，引入新课。
（二）组织实验，合作交流
出示题目，交流：“看到题目，你有何疑问？
疑问:人的口腔上皮细胞在哪？怎样取材？引导、分析。
①设计：根据已有的经验，设计实验方案（注意取材、方法、染色剂的变化）；
②制作：同组同学尽量选择不同的方案制作临时装片，增加对比性。
③观察自己制作的临时装片，然后同学间交换观察。
（三）归纳反思，学以致用
绘制细胞的基本结构图，感知动物（人）细胞的形态结构，注意绘图要领。多媒体演示不同种类的动物细胞。
（四）模拟制作，能力拓展
策略①：按照书中方法分组制作。
策略②：改进。利用现成的果冻，将一枚糖粒放入其中表示细胞核，果冻表示细胞质，包装果冻的塑料壳表示细胞膜。
（五）巩固练习，检测反馈
1、人体或动物体的各种细胞虽然形态不同，基本结构却是一样的，都有__________、__________和__________。
答案：细胞膜 细胞质 细胞核
2、动物细胞与植物细胞相比较，没有__________、__________和__________结构。
答案：细胞壁 液泡 叶绿体
3、回忆所做的《观察植物细胞》和《观察人的口腔上皮细胞》的实验。
（1）实验中用洋葱鳞片叶表皮细胞和口腔上皮细胞制作的玻片标本叫__________。
（2）在制作洋葱鳞片叶表皮细胞和口腔上皮细胞实验中，开始在载玻片上分别用滴管滴一滴__________和__________。
（3）洋葱鳞片叶表皮细胞和口腔上皮细胞相比，共同的结构是________________、________________和__________。洋葱鳞片叶表皮细胞还具有__________和__________以及黄瓜表皮果肉细胞的__________是植物细胞特有的结构。
（4）《观察植物细胞》和《观察人的口腔上皮细胞》的实验中染色使用的染料都是__________？
（5）回忆《制作动物细胞模型》的过程，你认为细胞是平面的还是立体的？
答案：（1）临时装片 （2）清水 生理盐水 （3）细胞膜 细胞质 细胞核 细胞壁 液泡 叶绿体 （4）稀碘液 （5）立体的
4、采取人的口腔上皮细胞时，需要用的工具是
A．消毒牙签 B．消毒棉球
C．消毒镊子 D．消毒玻璃棒
答案：A
5、制作人的口腔上皮细胞装片时，在载玻片上先滴一滴
A．清水 B．稀碘液
C．生理盐水 D．盐水
答案：C
6、动植物细胞共有的结构是
①细胞壁 ②细胞膜 ③细胞质 ④细胞核 ⑤液泡 ⑥叶绿体
A．①②③ B．②③④
C．②③⑤ D．①⑤⑥
答案：B
五、板书设计
观察动物细胞
(一) 制作人的口腔上皮细胞的方法步骤
擦→滴→刮→涂→盖→染→吸
(二) 观察人的口腔上皮细胞
(三) 动物细胞的结构（细胞膜、细胞质、细胞核）
观察动物细胞
一、说教材
1、教材内容分析：
本节教师要使学生通过观察自己的口腔上皮细胞和几种动物细胞，进一步掌握制作和观察临时装片的技能，概括出动物细胞的基本结构；再经比较，区别动植物细胞结构的不同特点。应注意完成“模拟制作”的教学，因为它将不易观察到的细胞膜、细胞质、细胞核等微小结构形象化、立体化，给学生留下深刻印象，还能提高学生学习细胞的兴趣。
2、教学重点：
说明人口腔上表皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的相同点和不同点。
3、教学难点：
比较动植物细胞的相同点和不同点。
二、说教学目标
【知识目标】进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞，说明人口腔上皮细胞的基本结构，区别动植物细胞结构的主要不同点。
【能力目标】
1、通过制作人的口腔上皮细胞的临时装片并使用显微镜观察细胞，熟练掌握制片的过程以及动物细胞的基本结构。
2、通过制作动物细胞模型，进一步了解动物细胞的基本结构。
3、通过比较人的口腔上皮细胞和洋葱鳞片叶表皮细胞，直到动植物细胞在结构上的异同点。
【情感目标】培养实事求是的科学态度。
三、说教学方法
本课的知识内容不多，但也有一些知识不太好理解，因此我将首先采用多媒体展示多种动物细胞或同种动物不同部位的细胞，引导学生概括它们在结构上的共性；然后让学生通过观察自己的口腔上皮细胞、绘制细胞结构简图并与植物细胞来比较，来认识动物细胞的基本结构，并区分动植物细胞结构的主要不同点。
四、说教学过程
引导与探究，多媒体辅助
课前板书：
观察人的口腔上皮细胞
一、目的要求：
1、制作和观察人的口腔上皮细胞的临时装片；
2、认识人的口腔上皮细胞的基本结构。
二、材料用具：
生理盐水、稀碘液、消毒牙签、滴管、纱布、镊子、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜。
三、方法步骤：
（一）制作人口腔上皮细胞临时装片
1、用洁净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净。擦
2、在载玻片的中央滴一滴生理盐水。滴
3、用消毒牙签的粗端在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下。刮
4、把牙签上附有碎屑的一端放在载玻片上的生理盐水滴中涂抹几下。涂
5、用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓地盖在水滴上。注意避免盖玻片下面出现气泡。盖
6、在盖玻片的一侧滴加稀碘液，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。染
（二）用显微镜观察人的口腔上皮细胞
将临时装片放在显微镜下观察，重点观察一个口腔上皮细胞。
（三）绘图
依照你所观察到的细胞，画一个口腔上皮细胞图，并试着注出各部分的名称。
课堂组织：
请一位同学上黑板画出植物细胞的模型图，并注出个部分的名称；其他同学在投影片上画，老师讲评。
问：你认为动物细胞和植物细胞是不是一样呢？以人的口腔上皮细胞为例，通过实验探究。
学生做实验，画出观察到的人的口腔上皮细胞，并试着注出各部分名称；选出几位同学画的，在投影仪上展示，老师讲评。
比较动、植物细胞的相同点和不同点。（它们都有细胞膜、细胞核和细胞质；植物细胞还有细胞壁、叶绿体和液泡，而动物细胞没有。）
动物细胞的基本结构是一样的，但形态并不完全一样。（用挂图展示肌肉细胞和神经细胞图）
学生自己设计一个方案，亲手制作一个植物或动物的细胞模型。
收拾实验室，完成实验报告
第五篇：《动物细胞》说课稿
七年级生物《动物细胞》说课稿
尊敬的老师，同学们:
大家好,我叫xx,来自xxxxx,欢迎大家莅临指导我的说课,我说课的内容是七年级生物（上）第二单元第一章第三节《动物细胞》。下面我将从教材分析、学情分析、教法和学法、教学设计四个方面来对本课题进行说明。
一、教材分析
1、教材的地位和作用
本单元主要是引导学生从细胞水平来认识生物体，而本节内容是“植物细胞”内容的自然延续，实验活动也是以第二节中的实验知识和技能作为铺垫。它的学习为后面生物体的结构层次的学习打下了基础。
2、教学目标（1）知识目标
①进一步熟练制作临时装片和说明动物细胞的基本结构。②区别动物细胞和植物细胞结构的主要不同点和相同点。（2）能力目标
提高学生制作以及用显微镜观察临时装片的技能。
（3）情感态度价值观
设计实验，开发学生的创新潜能，通过制作临时装片，养成实事求是的科学态度。
3、重点和难点
重点：说明人口腔上皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的异同点。
难点：①制作临时装片过程中的刮取（首次观察自己身体上的细胞学生感到既新鲜又好奇，取材关系到实验效果）
②细胞结构的观察（与植物细胞相比不易观察，略有难度）；
二、学情分析
通过前两的节的学习，学生初步具备了使用显微镜的技能，另外，学生已经观察了植物细胞的结构并有一定的了解，故这节课采用灵活的教学方式，让学生在动手中进一步了解动物细胞的结构。
三、教法、学法：
我在教学中遵循“从做中学，学中做”的原则，运用实验法、比较法、多媒体演示法等方法进行教学，学生在教师的指导下可以运用小组合作法、比较法、观察法等方法学习。
四、教学设计
（一）创设情境，引入新课：
复习：临时装片的制作方法；植物细胞的基本结构（回顾复习上节课所学内容，引导学生积极回答问题，加强对学过知识的记忆。）
温故而知新，提出问题：用同学们自己提出的问题“我怎样能看到自己身上的细胞呀，它和植物细胞一样吗?”引起学生的兴趣，从而引出本节课的课题。（引导学生联系自身，提出问题，创设学习情境，引入新课）
（二）组织实验，合作交流
①出示题目“观察人的口腔上皮细胞”，交流：“看到题目，你有何疑问？” 激起疑惑:“人的口腔上皮细胞怎样取材？怎样才能观察？”（引导学生通过观察和思考实验材料发现问题、提出问题并自己解决问题。培养他们的观察与思维能力。）
②播放幻灯片上的实验步骤边演示边讲解，从而引导学生认真观看老师的示范操作，获得感性认识。③进行完演示环节之后，带领他们根据以上的每个步骤用一个字来概括，加深学生对实验步骤的理解，培养他们归纳问题的能力。④学生们在本实验的理论知识方面已经初步掌握，在进行实验之前先让学生用小组讨论的方法对即将进行的实验提出问题，“其中哪些步骤与观察植物细胞的步骤不同，考虑一下这是为什么？”然后让他们带着提出的问题展开实验，在进行实验过程当中进行巡视，引导帮助。
⑤依照学生所观察到的细胞，画一个口腔上皮细胞图。（通过绘图感知细胞的形态结构）
此时教学过程中的制作临时装片和观察这个难点的内容已经基本突破。
（三）归纳总结
采用图示法的总结方式，并对本节课的重难点进行进一步的的强调。①画的口腔上皮细胞图与投影胶片上的图片做比对。②多媒体演示不同种类的动物细胞图片，向学生采用详细讲解法讲动物细胞结构以及作用，指导学生认识动物细胞的基本结构，并区别动植物细胞结构。
（四）模拟制作，能力括展
(组织学生亲手制作模型,极大地调动学生的学习积极性,有利于学生获得相关的生物知识。)
策略①：按照书中方法分组制作。
策略②：改进。利用现成的果冻，将一枚糖粒放入其中表示细胞核，果冻表示细胞质，包装果冻的塑料壳表示细胞膜。
（五）回顾小结
带领学生一起对本节课所学的内容进行回顾，使学生对于本节课的重点和难点有清晰的掌握与了解。
（六）练习巩固
检测学生对课堂所学知识的掌握情况 我的说课完毕，谢谢大家！
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