半保留复制实验证明

第一篇：半保留复制实验证明

半保留复制实验证明 Watson和Crick在他们发表在1953年4月25日的Nature上的具有划时代意义的题为“Molecular structure of Nucleic Acids”论文的最后一段这样写道：“It has not escaped our notice that the specific pairing we have postulated immediately suggests a possible copying mechanism for the genetic material.The structure itself suggested that each strand could separate and act as a template for a new strand,therefore doubling the amount of DNA, yet keeping the genetic information,in the form of the original sequence,intact.”翻译成中文的意思是，“特定的碱基配对性质让我们立刻注意到遗传物质可能的复制机制。结构(双螺旋)的本身意味着每一条链可以分离开来，作为新链的模板，于是DNA的量加倍了，而且保证了遗传物质以原封不动的序列形式存在。”在文中，他们虽然并没有提及DNA复制的具体机制，但已经就DNA复制的可能采取的是一种半保留方式做了大胆的预测。然而，细胞内DNA复制是不是就是以这种方式进行的，光凭预测是不够的，还必须用实验去验证。由Meselson和Stahl(图32－50)设计的被誉为生物学最美丽的实验“the most beautiful experiment in biology”最终证明了Watson和Crick预测的正确性。

1953年，Meselson在加州理工学院(Caltech)开始了以化学为专业的研究生阶段的学习。他进了Pauling的实验室，最终完成了其博士论文第二个阶段关于N,N-二甲基丙二酰胺(N，N-dimethyl malonamide,)晶体结构的工作。这部分工作的重点是确定这个分子中含有的肽键是不是共平面的，即是否与Pauling的共振理论相符。与他的博士论文的第一个部分关于大分子的密度梯度平衡沉降技术在DNA研究上的应用相比，这一部分鲜为人知。身为Pauling的弟子，在听过Pauling开设的有关化学键的课程以后，他对当H被其同位素氚(2H)取代以后氢键的相对强度产生了兴趣。就在他对氚参入到生物分子以后，生物体如何能够生存下来的问题发生兴趣的时刻，Meselson正好去听了Jacques Monod在Caltech做的有关细菌诱导酶合成的学术报告。Meselson推测，如果细菌能在重水里培养，然后被转移到一般的水里培养以后一旦加入诱导物，则任何新合成的蛋白质就应该具有正常的密度，与原来老的蛋白质的密度是有差别的，利用密度差异可以将“老”的蛋白质和新合成的蛋白质分开。事实上，如果在一个具有中间密度的溶液中离心，“老”的蛋白质可能沉降下来，而新合成的蛋白质应该悬浮在上面。

不久，他开始将注意力转移到DNA复制的问题。在与Max Delbrück进行了有关DNA双螺旋结构和可能的复制方式的一番热烈的讨论以后，他突然想到相同的方法也许可以用来研究DNA复制。于是，他决定要投入精力去确定DNA复制是否就是按照Watson和Crick预测的半保留的方式进行的。与此决定无关的一件事也许对其最后的成功带来决定性的影响：1954年的夏天，Meselson去马里兰州位于Woods Hole的海洋生物实验室协助Watson进行一些滴定实验，以获得RNA双螺旋结构的证据。巧合的是，来自Rochester大学的Frank Stahl博士也在Woods Hole修生理学课程。一天正当Stahl在树下思考噬菌体遗传性的一个问题的时候，他们相遇了，并从此成为了朋友和学术伙伴。就在Meselson对噬菌体遗传学还似懂非懂的时候，他在微积分上的专长帮助Stahl解决了问题。于是，他们变得更加熟悉了，不久Meselson提出了利用Stahl在研究噬菌体DNA上的特长使用噬菌体DNA来合作研究DNA复制的可能性。他还提出了使用氚来重标记DNA的设想，以此用密度梯度离心来分离重的DNA和轻的DNA。然而，他们很快就意识到使用噬菌体DNA进行实验带来的复杂性问题，因为噬菌体DNA之间存在高频的重组事件，由此引起亲代和子代DNA片段的交换是可以预见的，这势必会影响到结果的分析。幸运的是，Stahl已经打算去Caltech做博士后研究，以方便以后的讨论和合作。既然噬菌体行不通，较为简单的单细胞系统——E.coli也许是一个不错的选择。后来Meselson想知道更多有关DNA合成前体分子性质的知识，在文献调研中，得知胸腺嘧啶的类似物——5-溴尿嘧啶(5-bromouracil，5-BrU)能够代替T参入到正在合成的DNA分子之中。5-BrU相当于T，除了由Br原子代替嘧啶环C5上的甲基以外。Br与甲基具有几乎相同的范德华半径，但由于5-BrU与T的离子化程度不同，Meselson想到也许可以用5-BrU标记DNA，然后利用电泳的方法将它与含有T的DNA分离开来。特别重要的是，他特别想到含有5-BrU的DNA要比含有T的DNA重得多！于是，他考虑使用5-BrU来重标记DNA以验证DNA半保留复制的可能性。因为需要超离心技术的关系，他认识了Caltech的超离心技术奇才Jerry Vinograd，并学会了如何操作当时最先进的Beckman Spinco E型超离心机。在Vinograd悉心指导下，Meselson开始尝试用7 mol/L的CsCl重盐溶液来沉降DNA。使用CsCl的主意来自他认为可以将重标记的DNA与轻DNA分开来的设想——重标记DNA沉降下来，轻DNA悬浮在表面。然而，令他们惊诧的是，在高速离心场下，一种盐密度梯度很快就形成了，而且DNA迁移到与其等密度的区域，形成很窄的条带。于是有关密度梯度离心的概念被Meselson提出来了，相关的论文后来发表在1957年5月份的Proceedings of National Academy Science上。论文中的图和理论计算实际上是他博士论文第一部分的内容。论文中还记录了含有5-BrU的DNA(在含有5-BrU培养基中培养的受T4噬菌体感染E.coli中，得到被5-BrU标记的T4噬菌体DNA)在密度梯度离心中的沉降情况。结果显示，被5-BrU标记的DNA条带所处位置的密度是

1.8g/cm3，而含有T的DNA所在位置的密度是1.7g/cm3。尽管文中没有提到使用这种方法研究DNA复制，但用于研究完整病毒和生物大分子的报道还是非常富有开创性的。

似乎幸运之神正在一步一步地将Meselson和Stahl带到研究DNA复制的里程碑的实验设计思路上去。他们本来想用5-BrU去重标记DNA的，但后来担心5-BrU能诱发DNA突变和因此细胞产生的毒性，以及能否获得标记的均一性的问题，他们决定使用15NH4Cl作为唯一N源的合成培养基去培养E.coli以获得被15N标记的重DNA。他们首先将E.coli放在15NN4Cl培养基中连续培养十几代，得到了几乎都被15N标记的E.coli DNA；然后，随着细菌的指数生长，用10倍过量的14NH4Cl稀释培养基。期间在不同的时段，将DNA从细菌中抽取出来，并使用CsCl密度梯度离心的方法进行分析。

他们的结果是，起初完全被15N标记的DNA具有单一的条带，而在14NH4Cl培养基中培养的第一代细菌中的DNA的密度介于15N-DNA和14N-DNA之间，为杂交带DNA(15N/14N-DNA)。随着杂交带的出现，亲代的条带(15N-DNA)消失了。而在第二代细菌中，得到几乎等量的14N-DNA和杂交带DNA。随着培养代数的增加，杂交带始终存在，而且它的量维持不变，但14N-DNA的量越来越多。由此可以得出结论，DNA复制以半保留的方式进行。为了进一步确认这一点，Meselson和Stahl在密度梯度离心之前用热变性处理CsCl溶液中DNA样品(100℃下30 min)，结果发现，杂交DNA分成了15N-DNA和14N-DNA两条带。不久，他们将数据整理，投给了PNAS，并很快得以发表。

第二篇：实验半期总结

河溪小学实验室半期总结

---张福

这学期领导从上到下都非常重视实验教学，对实验教学有了很多新的要求，自然而然对理化生实验室各个方面都加强了管理，引导我们去管理、要求年级上按照新的要求来做，同时做了任何一件事都要留下“痕迹”，要有表表册册，各种数据来支撑，把我们做的事情记录下来，加强痕迹管理。这些都是实验室在变化的地方，也是我们需要努力改进的地方。

一、实验方面

1.演示实验

演示实验主要集中在物理和化学两个学科上，按照要求理化演示实验开出率保证在99%以上，高标准高质量的保证一线教学需要，这是我们的本职工作，再累再辛苦我们都不会抱怨一句，坚决服务好老师和学生。

2.学生分组实验

开学初，就按照领导要求，和备课组积极沟通，要求备课组制定分组实验目录，其目的就是督促年级上，保证分组实验的开出率，凡是能做的学生分组实验都一定要按时开齐。到目前为止统计的情况来看，化学和生物学科都做了2轮，下一轮也在计划当中，物理也在准备阶段。

二、管理方面 1.领导重视实验教学，对各方面都加强了管理，要把实验室打造出一个全新的面貌，为此我们也对各备课组也加强了管理，借还制度的完善，学生分组实验提高要求，新的实验目录制定。常统计三个实验室实验开设情况，及时汇报，让领导知道实验教学开展情况如何

三、问题和建议

在本期的实验教学中，虽然取得了一定的成绩，但也存在着不少问题，主要表现在以下几个方面:

1、仪器借用还不充分，还有待加强。

2、课外活动开展的条件还有待改善，特别是相关器材还需要购进，保证课外实验顺利开展。

3、实验教研还有待加强，让教研为教学服务的意识不足，存在着为研而研，实践不足的弊病。

4、教师培训中的自我培训意识有待加强。

5、仪器维修作为实验室管理人员来说还需要加强学习。

6、实验教学就和其它学科进行优化整合，让其它学科促进实验教学，也让实验教学促进其它学科的教学。

2017.11.8

第三篇：实验证明

实验证明

知识小结：

1、为了证明某种结论或某种推断，设计相应的实验方法，当出现预料的某种实验现象时，就可以得到证明。选择的实验方法力求简单易行、实验现象明显。

2、初中化学里的实验证明题，一般都是证明某种成分，或某种物质含有的某种成分，以定性证明为主。

3、应熟悉常见的检验方法，如检验水、二氧化碳、一氧化碳、氢气和碳酸盐及氯离子、硫酸根离子、铵根离子等等。检验时要注意排除干扰，避免误检。

例题分析：

1、怎样用实验证明下列事实或结论？写出实验操作步骤、实验现象、实验结论及有关化学反应方程式。

（1）酒精中含有少量水分。

（2）生石灰中含有未“烧透”的石灰石。

（3）氢氧化钠溶液长期露置在空气中，已部分变质。

2、实验室用锌粒跟稀硫酸反应制取氢气（其中含有水蒸气），现要求证明氢气具有还原性，及氢气氧化后的产物是水，试从下图中选出所需的装置（各装置可重复选用），并从左到右连成一套实验装置，完成实验要求。回答：

（1）装置连接顺序（填序号）→→→→。

（2）在C、D装置中反应的化学方程式：。

（3）证明氢气具有还原性的和氧化产物是水的现象。

提高练习：

1、为了证明盐酸中是否含有少量的硫酸，可以：

A：加入少量氯化钡溶液，观察是否有白色沉淀；

B：加入少量硝酸银溶液，观察是否有白色沉淀；

C：加入少量锌粒，观察是否有气泡产生；

D：加入少量碳酸钠溶液，观察是否有气泡产生。

2、为了证明某气体中含有水蒸气和氢气，选用下图装置连接成一套装置的顺序为： A：甲→乙→丙→丁；B：丁→丙→甲→丁→乙；

C：丁→乙→丁→甲→丁；D：甲→丁→乙→丙。

3、某混合气体由二氧化碳、氢气、一氧化碳和水蒸气组成。试胳膊下列A~E五种装置（假设每步反应都完全，每种装置限用一次），设计一个实验程序，用来证明该混合气体中确实。

4、欲证明某硫酸钠溶液中含有氯化钠。试回答：

（1）取少量样品，放在试管里，加入过量的溶液。

（2）检验溶液中硫酸根离子已全部沉淀的方法。

（3）取上层清液于另一试管中，滴加溶液，看到，证明有氯离子。

6、为了证明某混合气体是二氧化碳和一氧化碳的混合气体，做以下实验：

（1）使混合气体通过盛的洗气瓶，看到，证明混合气体中含有二氧化碳。

（2）再使混合气体通过盛溶液的洗气瓶，使混合气体中的二氧化碳全部吸收，反应的化学方程式是。

（3）再将剩余气体通过灼热的，看到，反应的化学方程式是。

（4）最后将剩余气体通过，看到，说明一氧化碳的（填氧化或还原）产物是二氧化碳。

第四篇：户档保留证明

毕业生学号：_________

用 人 单 位 接 收 证 明

（申请户档暂留毕业生用）

中国人民大学：

兹证明，贵校_________学院_________专业_______届毕业生_________（姓名），已被我单位录用，落户手续正在办理中，请学校为其保留户口、档案。

单位名称：_________

单位性质：党政机关科研单位中初教育高等教育其他事业国有企业

三资企业其他企业部队（请在对应项划 √）

单位所在地：_____省_____市_____区

单位联系人：_________

单位联系电话：_________

毕业生本人联系方式（手机）：_________

单位公章

第五篇：重庆村社区证明事项保留清单

重庆市村（社区）证明事项保留清单

（共10项）

要求序事项名称 号

单位 证明提供

证明用途

依据

备注

家庭经济状况证1

明 司法行政部门 申请法律援助、认定法律援助资格

《重庆市法律援助条例》第二十六条

村（居）民委员会提供证明

在办理国内公民收养登记中证明收养人有无子女、抚养国内公民办理收2

养证明

女情况等 民政部门 教育被收养人能力情况，送养人有特殊困难无力抚养子

1．《中国公民收养子女登记办法》第五条

村（居）民委员会

2．《民政部关于规范生父母有特殊困难无力抚养的子

提供证明

女和社会散居孤儿收养工作的意见》第四条

村（居）民委员会城乡低保申请人3

信息证明 民政部门 调查核实申请人员信息、经济情况等，办理城乡低保证

2．《重庆市城乡居民最低生活保障条例》第五条

查核实

1．《社会救助暂行办法》第十一条

社区专干协助调特困人员救助供调查核实申请人员信息、经济情况等，办理特困人员救4 养申请人信息证明 民政部门

助供养资格证

《农村五保供养工作条例》第七条

村（居）民委员会社区专干协助调查核实

对未成立业委会的居民小区住宅改为经营性用房，依法住所（经营场所）5

证明 部门

所用于从事经营活动提供证明，办理工商登记 工商行政管理登记住所（经营场所备案）；对无法提供产权证明的场

《重庆市物业管理条例》第六十条

提供证明 村（居）民委员会

1．《中华人民共和国农村土地承包经营权证管理办法》农村土地承包经用于农村土地承包经营权证变更；办理农村土地承包经6 营权证办理变更事项证明

办法》第五十条 农业部门

营权证

2．《重庆市实施〈中华人民共和国农村土地承包法〉

签署意见

第七条、第十四条

农村土地发包人

1．《流动人口计划生育工作条例》第八条

村（居）民委员会证明已婚夫妻生育情况；城镇职工计划生育年老奖励；卫生计生行政7 婚育情况证明

部门

办理再生育登记时核实生育情况并签署意见

三条

3．《重庆市人口与计划生育条例》第二十条、第二十

委员会提供证明 农村计划生育家庭奖励扶助；计划生育家庭特别扶助；

第八条

意见；村（居）民

2．《全国计划生育家庭特别扶助制度信息管理规范》

调查核实并签署城乡规划主管乡村建设规划许部门、乡（镇）8 可村民委员会书政府、街道办事面意见

处 体经济组织用地范围申请住宅建设

七条 证明申请人为本集体经济组织成员、同意申请人在本集

2．《重庆市农村村民住宅规划建设管理暂行办法》第签署意见

1．《重庆市城乡规划条例》第五十八条、五十九条

村（居）民委员会

1．《就业服务与就业管理规定》第四十一条、第六十

村（社区）公共就就业创业登记申9

请人信息证明 人力社保部门 记载就业和失业状况，申请就业援助，办理就业创业证

2．《人力资源社会保障部关于进一步完善就业失业登

核实或提供证明

记管理办法的通知》第四条 二条、第六十三条

业服务机构调查

村（居）民委员会

1．《征兵工作条例》第二十一条 政治考核证明 征兵办公室 对体格检查合格的应征公民进行政治审查

2．《征兵政治考核工作规定》第二十条

署意见 调查走访人员签