植物组织游离脯氨酸含量的测定

第一篇：植物组织游离脯氨酸含量的测定

植物组织游离脯氨酸含量的测定

原理

植物在逆境条件下，游离脯氨酸便会大量积累，且积累指数与植物的抗逆性有关。因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。

采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减少了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态(干或鲜样)限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。材料、仪器设备及试剂 1．材料

植物叶片

2．仪器设备

分光光度计；水浴锅：漏斗：大试管(20m1)；具塞刻度试管(20m1)注射器或滴管(5～lOml)。3．试剂

(1)3％磺基水杨酸溶液

(2)甲苯；

(3)2.5％酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mo1.L-l磷酸以3:2混合，作为溶剂进行配制，此液在4℃下2～3天有效；

‘

(4)脯氨酸标准溶液：准确称取25mg脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至250ml，其浓度为100ug.mL-l。再取此液10ml，用蒸馏水稀释至lOOml，即成10μg．mL-1的脯氨酸标准液。

1．标准曲线制作

（1）取7支具塞刻度试管按表9.2-1加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min。

(2)取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照在波长520nm下比色。

（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程

表9．2．1各试管中试剂加入量 试管

0

脯氨酸标准溶液(m1)

0

0．2

0．4

0．8

1．2

1．6

2．0

水(m1)

1．8

1．6

1．2

0．8

0．4

0

冰乙酸(m1)

茚三酮显色液(m1)

样品测定

（1）脯氨酸提取：取不同处理的剪碎混匀植物叶片0．2～0．5g(干样根据水分含量酌减)，分别置于大试管中，加入5m1 3％磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。

(2)取出试管，待冷却至室温后，吸取上清液2m1，加2m1冰乙酸和3m1显色液，于沸水浴中加热40min，下步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色（向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照在波长520nm下比色）。

(3)结果计算：从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度 脯氨酸含量的百分数。

脯氨酸[μg.g-1(干或鲜重)](C．V)·(a·W)－1

式中：C一提取液中脯氨酸浓度(PS)，由标准曲线求得：

V － 提取液总体积（ml）

A---测定时所吸取得体积（ml）

W-----样品重（g）

第二篇：植物组织中淀粉含量的测定

植物组织中淀粉含量的测定 2007-01-12 08:55 Ⅰ 蒽酮硫酸法

一、原理

淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料 任何植物材料。

（二）试剂

浓硫酸（比重 1.84）。9.2mol/L HClO 4。

2%蒽酮试剂，同实验 24。

（三）仪器设备

电子天平，容量瓶： 100 mL 4 个、50 mL 2 个，漏斗，小试管若干支，电炉，刻度吸管 0.5mL 1 支、2.0 mL 3 支、5 mL 4 支，分光光度计，记号笔。

三、实验步骤

1.标准曲线制作

取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。

以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。

表24-3 各试管加入标准液和蒸馏水量

管 号 0 1～2 3～4 5～6

7～8 9～10 淀粉标准液(ml)

0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸 馏 水（ml）

2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0

淀粉含量（mg）

0 40 80 120 160 200 2.样品提取 称取 50 ～ 100 mg 粉碎过 100 目筛的烘干样品，置于 15 mL 刻度试管中，加入 6 ～ 7 mL 80 ％乙醇，在 80 ℃水浴中提取 30 min，取出离心（3000 rpm）5 min，收集上清液。重复提取两次（各 10 min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于 85 ℃恒温水浴，使乙醇蒸发至 2 ～ 3 mL，转移至 50 mL 容量瓶，以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。

向沉淀中加蒸馏水 3 mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化 15 min。冷却后，加入 2 mL 冷的 9.2 mol/L 高氯酸，不时搅拌，提取 15 min 后加蒸馏水至 10 mL，混匀，离心 10 min，上清液倾入 50 mL 容量瓶。再向沉淀中加入 2 mL 4.6 mol/L 高氯酸，搅拌提取 15 min 后加水至 10 mL，混匀后离心 10 min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀 1 ～ 2 次，离心，合并离心液于 50 mL 容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。

3.测定 取待测样品提取液 1.0 mL 于试管中，再加蒽酮试剂 5 mL，快速摇匀，然后在沸水浴中煮 10 min，取出冷却，在 620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出淀粉含量（mg）。

四、结果计算 ：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W

式中： C ——从标准曲线查得淀粉量，mg。V T ——样品提取液总体积 , mL。V 1 ——显色时取样品液量，mL。W ——样品重，g。

0.9 ——由葡萄糖换算为淀粉的系数。

Ⅱ 碘-淀粉比色法

一、原理

对于淀粉含量较少的植株样品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中，当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料 任何植物材料。

（二）试剂 ． 80 ％硝酸钙溶液。． 0.5 ％碘液：称 5.00 g 结晶碘和 10.00 g 碘化钾，放入研钵混合干研，然后加 10 mL 蒸馏水研至全部碘溶解，将溶液全部转入 1000 mL 容量瓶定容后，贮于磨口试剂瓶。

3 ． 5 ％含碘硝酸钙溶液：取 10 mL 80 ％的硝酸钙溶液，加入 160 mL 水再加入 3 mL 0.5 ％的碘液混匀，现用现配。．标准淀粉溶液：称取纯淀粉 50 mg 于研钵中，加 3 mL 80 ％硝酸钙溶液，研细并转移到 100 mL 的三角瓶中，用 15 mL 80 ％的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中。将三角瓶置于沸水浴中煮沸 5 min，冷却后全部转入 50 mL 容量瓶中并定容。此液为 1 mg/mL 的淀粉标准液。． 0.1 mol/L NaOH。6 ． 0.1 mol/L HCl。

（三）仪器设备

分析天平，研钵，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，电炉，离心机，离心管，试剂瓶。

三、实验步骤 ．称取 1 ～ 3 g 叶片，剪碎放入研钵，加 5 mL 80 ％的硝酸钙溶液，研磨成糊状移入 100 mL 的三角瓶中，用 10 mL 80 ％的硝酸钙冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中，瓶口盖上小漏斗，在沸水浴上煮沸 3 ～ 5 min（叶片含淀粉少的 3 min，含淀粉多的 5 min），使样品中淀粉转变为胶体溶液。．给三角瓶中加 20 mL 蒸馏水，混合液转入离心管中离心（2000 ～ 3000 rpm）2 ～ 3 min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入 100 mL 容量瓶（淀粉含量少时，可移入 50 mL 容量瓶），三角瓶及离心沉淀物用 5 ～ 10 mL 热蒸馏水冲洗并同样离心，离心液并入容量瓶中（共洗 2 ～ 3 次）定容，即为淀粉提取液。．取 5 ～ 10 mL 淀粉待测液，加入到盛有 2 mL 0.5 ％碘液的离心管中，混匀静置 15 min 后离心（3000 rpm）5 min，弃上清液。沉淀用 5 ％的含碘硝酸钙溶液冲洗两次，向冲洗后的沉淀中加入 10 mL 0.1 mol/L 的 NaOH 混匀，将离心管浸入沸水内 5 min，使沉淀溶解。将溶液转入 50 mL 容量瓶中，加入 0.3 mL 0.5 ％碘液，用 30 mL 左右的水冲洗并入容量瓶，加入 2 mL 1mol/L 的盐酸，用水定容并显色，在 590 nm 波长处测定光密度。4 ．绘制标准曲线 取标准淀粉溶液（1 mg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 6 个离心管中，用 80 ％硝酸钙溶液将各管的体积补足至 5 mL，再向各管加入 2 mL 0.5 ％碘液，混匀静置 15 min 后离心，其他操作同样品测定步骤，显色后在 590 nm 波长下测定光密度。此系列溶液的淀粉含量分别为 0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg，然后以光密度为横坐标，以淀粉含量为纵坐标绘制标准曲线。

四、结果计算 ：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W 式中： C ——从标准曲线查得淀粉量，mg。V T ——样品提取液总体积 , mL。V 1 ——显色时取样品液量，mL。W ——样品重（g）。

III 旋光法（谷物淀粉含量的测定）

一、原理： 酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮，可使淀粉轻度水解。同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合，这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中，成为淀粉溶液。淀粉分子具有不对称碳原子，因而具有旋光性，可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度（α），旋光度的大小与淀粉的浓度成正比，据此可以求出淀粉含量。溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的pH值必须保持2.30，密度须为1.30，加时间的长短也要控制在一定范围。因为只有在这些条件下，各种不同来源的淀粉溶液的比旋度［α］才都是203°，恒定不变。样品中其他旋光性物质（如糖分）须预先除去。

二、材料、仪器设备及试剂：

（一）材料：面粉或其他风干样品

（二）仪器设备：1.植物样品粉碎机；2.离心机；3.分析天平；4.粗天平；5.旋光仪及附件；6.三角瓶；7.分样筛（100目）；8.布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵；9.离心管；10.小电炉。

（三）试剂：

三、实验步骤：

1.样品准备：（1）称取样品：将样品风干、研磨、通过100目筛，精确称取约2.5g样品细粉（要求含淀粉约2g，请参考附注估计），置于离心管内。（2）脱脂：加乙醚数ml到离心管内，用细玻棒充分搅拌，然后离心。倾出上清液并收集以备回收乙醚。重复脱脂数次，以去除大部分油脂、色素等（因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难）。大多数谷物样品含脂肪较少，可免去这个脱脂手续。（3）抑制酶活性：加含有氯化高汞的乙醇溶液10ml到离心管内，充分搅拌，然后离心，倾去上清液，得到残余物。（4）脱糖：加80％乙醇10ml到离心管中，充分搅拌以洗涤残余物（每次都用同一玻棒），离心，倾去下清液。重复洗涤数次以去除可溶性糖分。

2.溶提淀粉：（1）加醋酸－氯化钙：先用醋酸氯化钙溶液约10ml加到离心管中，搅拌后全部倾入250ml三角瓶内，再用醋酸氯化钙溶液50ml分数次洗涤离心管，洗涤液并入三角瓶内，搅拌玻棒也转移到三角瓶内。（2）煮沸溶解：先用蜡笔标记液面高度，直接置于加有石棉网的小电炉上，在4min～5min内迅速煮沸，保持沸腾15min～17min，立即将三角瓶取下，置流水中冷却。煮沸过程中要时加搅拌，勿令烧焦；要调节温度，勿使泡沫涌出瓶外；常用玻璃将瓶侧的细粒擦下；并加水保持液面高度。

3.沉淀杂质和定容：（1）加沉淀剂：将三角瓶内的水解液转入100ml容量瓶，用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶，并入容量内，加30％ZnSO41ml混合后，再加15％K4Fe（CN）61ml，用水稀释至接近刻度时，加95％乙醇一滴以破坏泡沫，然后稀释到刻度，充分混合，静置，以使蛋白充分沉淀。（2）滤清：用布氏漏斗（加一层滤纸）吸气过滤。先倾清溶液约10ml于此滤纸上，使其完全湿润，让溶液流干，弃去滤液，再倾清溶液进行过滤，用干燥的容器接受此滤液，收集约50ml，即可供测定之用。

4.测定旋光度：用旋光测定管装满滤液，小心地按照旋光仪使用说明，进行旋光度的测定。淀粉（％）＝α×N×100/{[α]20D×L×(W－K)}×100 式中：α：用钠光时观测到的旋光度；［α］20 D：淀粉的比旋度，在这种方法条件下为203°；L：旋光管长度（cm）；W：样品质量（g）；K：样品水分含量（％）；N：稀释倍数；100：换算为百分率。也可以不用上列公式计算，改用工作曲线来求得淀粉含量，这样准确度高些。

Ⅲ、淀粉含量的测定

一、目的

掌握植物组织中淀粉含量测定的原理和方法。

二、原理

淀粉用盐酸水解转化成葡萄糖后，测定葡萄糖含量，根据葡萄糖含量换算成淀粉含量。

三、材料、仪器设备及试剂

材料、仪器设备及试剂与上述蔗糖的测定相同，另增加碘试剂；100ml、250ml容量瓶。碘试剂（碘化钾—碘溶液）的配制：称取碘化钾20g及碘10g溶于100ml蒸馏水中。使用前需稀释10倍。

四、实验步骤

1.葡萄糖标准曲线制作与上述还原糖含量测定相同。2.淀粉的水解

取上述还原糖含量测定中经85﹪乙醇浸提后的全部淀粉残渣，放入100ml三角瓶中，加 入6mol·L－1盐酸10ml，混匀，在沸水浴中加热10min－30min（用碘试剂检查淀粉水解程度，直至不显蓝色为止），再加蒸馏水20ml,摇匀并过滤于100ml容量瓶中，过滤后残渣再用蒸馏水冲洗3次，一并过滤入容量瓶，定容至100ml。准确取出10ml过滤液置入250ml容量瓶中，加酚酞2滴，用10﹪NaOH中和至微红色，用蒸馏水定容至250ml，待测。

3.还原糖含量测定

取4 支25ml刻度试管，编号，其中3支（三个重复）分别加入待测液2ml,1支空白管加2ml蒸馏水代替样品液，然后各管再加入DNS试剂1.5ml，摇匀，混合液在沸水浴中加热5min，然后用自来水冷却，各加入21.5ml蒸馏水使总体积为25ml，摇匀，在520nm波长下测定吸光度（A）值。

五、结果计算

根据待测液的吸光度从上述标准曲线中查出其相应的还原糖含量，然后按下公式计算出样品中还原糖（葡萄糖）含量和淀粉含量的百分率。

淀粉水解液总量（ml）从标准曲线上查得还原糖(mg)×————————————

测定时水解液用量（ml）

还原糖（﹪）= ———————————————————————————×100

（葡萄糖）样品重（mg）

粗淀粉含量（﹪）= 葡萄糖含量 × 0.9

式中系数0.9依据淀粉（C6 H10 O5）n水解时吸收n 个分子水。

第三篇：实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定

实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定

茚三酮显色法 氨基酸是组成蛋白质的基本单位也是蛋白质的分解产物。植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式进行运输。所以测定植物组织中不同时期、不同部位游离氨基酸的含量对于研究根系生理、氮素代谢有一定意义。

一、原理 氨基酸与茚三酮共热时能定量地生成二酮茚胺。该产物显示蓝紫色称为 Ruhemans 紫。其吸收峰在 570 nm 而且在一定范围内吸光度与氨基酸浓度成正比。氨基酸与茚三酮的反应分两步进行第一步氨基酸被氧化形成 CO 2、NH 3 和醛茚三酮被还原成还原型茚三酮第二步所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和一分子氨脱水缩合生成二酮茚–二酮茚胺 Ruhemans 紫反应式如下 在一定范围内反应体系颜色的深浅与游离氨基的含量成正比因此可用分光光度法测定其含量。

二、实验材料、试剂与仪器设备 一实验材料 各种植物组织。二试剂 1.水合茚三酮试剂称取 0.6 g 再结晶的茚三酮置烧杯中加入 15 mL 正丙醇搅拌使其溶解。再加入 30 mL 正丁醇及 60 mL 乙二醇最后加入 9 mL pH5.4 的乙酸–乙酸钠缓冲液混匀贮于棕色瓶置 4 ℃下保存备用 10 d 内有效。2.乙酸–乙酸钠缓冲液 pH 5.4 称取乙酸钠 54.4 g 加入 100 mL 无氨蒸馏水在电炉上加热至沸使体积蒸发至 60 mL 左右。冷却后转入 100 mL 容量瓶中加 30 mL 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至 100 mL。3.标准氨基酸称取 80 ℃下烘干的亮氨酸 46.8 mg 溶于少量 10 异丙醇中用 10 异丙醇定容至 100 mL。取该溶液 5 mL 用蒸馏水稀释至 50 mL 即为含氨基氮 5 μ g/mL 的标准氨基酸溶液。4.0.1 抗坏血酸称取 50 mg 抗坏血酸溶于 50 mL 无氨蒸馏水中随配随用。5.10 乙酸。三仪器设备 分光光度计分析天平研钵容量瓶试管移液管水浴锅三角瓶漏斗。

三、实验步骤 1.样品制备 取新鲜植物样品洗净、擦干并剪碎、混匀后迅速称取 0.5 1.0 g 于研钵中加入 5 mL 10 乙酸研磨匀浆后用蒸馏水稀释至 100 mL。混匀并用干滤纸过滤到三角瓶中备用。2.制作标准曲线 取 6 支 20 mL 刻度试管按表 27 – 1 操作。表 27-1 制作游离氨基酸标准曲线各试剂量及操作程序 试 剂 管 号 1 2 3 4 5 6 标准氨基酸 mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 无氨蒸馏水 mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮 mL 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸 mL 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 每管含氮量 μ g 0 1 2 3 4 5 加完试剂后混匀盖上大小合适的玻璃球置沸水中加热 15 min 取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化而褪去当呈现蓝紫色时用 60 乙醇定容至 20 mL。混匀后用 1 cm 光径比色皿在 570 nm 波长下测定吸光度以吸光度为纵坐标以含氮量为横坐标绘制标准曲线。3.样品测定 吸取样品滤液 1.0 mL 放入 20 mL 干燥试管中加无氨蒸馏水 1.0 mL 其他步骤与制作标准曲线相同。根据样品吸光度在标准曲线上查得含氮量。

四、结果计算 按下式计算样品中氨基态氮的含量。式中 C ——从标准曲线上查得的氨基态氮含量 μg。V T ——样品稀释总体积 mL。V S ——测定时样品体积 mL。W ——样品鲜重 g。思考题 1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物颜色都相同吗 为什么 2.抗坏血酸在测定中的作用是什么 【 附注 】 1.茚三酮重结晶的方法 合格的茚三酮应该是微黄色结晶若保管不当颜色加深或变成微红色必须重结晶后方可使用。其方法如下 5 g 茚三酮溶于 15 mL 热蒸馏水中加入 0.25 g 活性炭轻轻摇动溶液太稠时可适量加水 30 min 后用滤纸过滤滤液置冰箱中过夜后即可见微黄色结晶析出用干滤纸过滤再用 1 mL 蒸馏水洗结晶一次置于干燥器中干燥后贮于棕色瓶中。2.茚三酮与氨基酸反应所生成的 Ruhemans 紫在 1 h 内保持稳定故稀释后尽快比色。3.空气中的氧干扰显色反应的第一步。以抗坏血酸为还原剂可提高反应的灵敏度并使颜色稳定。但由于抗坏血酸也可与茚三酮反应使溶液颜色过深故应严格掌握加入抗坏血酸的量。4.反应温度影响显色稳定性超过 80 ℃溶液易褪色可在 80 ℃水浴中加热并适当延长反应时间效果良好。5.谷物籽粒等含蛋白质的样品可用酸水解法将蛋白质水解后用本法测定水解液中的氨基酸含量可计算出样品蛋白质含量。

第四篇：不同程度干旱对小麦幼苗体内游离脯氨酸含量的影响实验报告

不同程度干旱对小麦幼苗体内游离脯氨酸含量的影响

姓名：侯

菲

学号：201107010098 1实验目的

学习测定植物体内脯氨酸含量的方法，并了解植物体内游离脯氨酸的积累与植物抗逆性的关系。2实验设计

（1）取适量的小麦品种，先用0.1%的HgCl2消毒5 min，再用流动的自来水浸种24 h。

（2）在25 ℃下催芽后，选取露白一致的种子腹沟朝下均匀播在塑料盆中，并坚持每天给小麦浇水。

（3）等长到两叶一心时，每天用100ml 20%的 PEG-6000营养液处理一周。

（4）根据具体操作步骤，进行小麦幼苗体内游离脯氨酸含量的测定。3实验原理

胁迫条件下植物体内脯氨酸大量积累，而且胁迫时间越长,积累的脯氨酸越多；因此植物体内的脯氨酸含量在一定程度上反映了植物受胁迫影响的程度，可作为植物对逆境响应的一个参考指标。

在酸性条件下，茚三酮和脯氨酸反应，生成红色化合物，此产物在520nm波长下具有最大吸收峰，可用分光光度计测定，此法具有专一性。在pH1-7时用人造沸石可以除去一些干扰的氨基酸。4实验材料

小麦幼苗的叶片和根 5方法与步骤

1.取材

取0.5g叶片或根剪碎放入大试管中，2.浸提

用5mL3%的磺基水杨酸在沸水浴中加盖提取10分钟，3.冷却、过滤

4.取滤液2mL于具塞试管中，加2mL冰醋酸，再加入2mL酸性茚三酮，在沸水浴中加热30分钟。

5.冷却后加入4mL甲苯，充分振荡，静止分层。

6.取上层甲苯溶液于比色杯中在515nm处比色，计算Pro的含量。C=A/W·V1/V2

C：脯氨酸含量μg.g-1

W：样品重g

A：曲线查得脯氨酸μg（OD值×380）

V1：样品提取液体积ml

V2：样品反应液体积ml 6注意事项

1、配置的酸性茚三酮溶液仅在24h内稳定，因此最好现用现配；

2、甲苯萃取色素时必须注意要进行充分振荡，以防色素提取不完全。此外，甲苯有毒，需格外小心，注意教室通风；

3、离心前必须平衡，外管壁要干燥，离心机要水平放置等待离心机完全停止后再取出试管；

4、材料研磨得不够仔细，会使得组织中脯氨酸提取得不完全；同时离心后没有对离心的残渣进行再提取会有部分损伤；

5、沸水浴的温度一直要达到，防止反应不够充分，也不要让在沸水浴的过程中沸腾，避免溶液体积的减小和蒸汽中各种物质的污染影响；

6、使用分光光度计时，先调好波长，使用比色皿时只能拿粗糙面，使用前必须润洗。7 结果与分析

表1 不同程度干旱对小麦幼苗叶片内游离脯氨酸的影响 处理

0

10%

20%

30%

40%

50%

60% 脯氨酸172.14 152.76 210.14 1060.07 257.89 766.71 1198.14（μg·g-1FW）

如上表所示：在干旱条件下，小麦幼苗叶片中的游离脯氨酸的含量受到明显的影响，且随着干旱程度的增加，游离脯氨酸的量也相应的增加（30%处理的数据有些不合理，或许是由于实验误差引起），说明小苗幼苗叶片中的游离脯氨酸对干旱条件比较敏感，干旱条件对脯氨酸含量的影响作用不较大。

表2 不同程度干旱对小麦幼苗根内游离脯氨酸的影响 处理

0

10%

20%

30%

40%

50%

60% 脯氨酸

108.93 159.83 104.73 207.48 145.54 562.91 951.33（μg·g-1FW）

如表所示，干旱胁迫下，小麦幼苗根部的游离脯氨酸的含量也有很明显的变化，与干旱胁迫程度呈正比关系变化（20%处理下的数据有明显的误差）。

实验误差分析

1.材料研磨得不够仔细，使得组织中脯氨酸提取得不完全。

2.离心后没有对离心的残渣进行再提取，会有部分损伤。

3.制作标准曲线用的是蒸馏水来稀释标准液，虽然同样可以有结果，但应该和用酒精稀释有一定差异。

4.沸水浴的温度一直也达不到，所以反应不够充分，同时在水浴过程中怕溶液沸腾，有一段时间没有加塞，所以溶液体积有一定的减小，同时有蒸汽中各种物质的污染影响。8 讨论

脯氨酸具有偶极性，是植物细胞中一种游离氨基酸，它可以保持细胞膜系统，维持胞内酶的结构，减少胞内蛋白质的降解，脯氨酸含量的增高能降低细胞的渗透势，防止细胞脱水，它的积累可以防止氮素的流失，而且不产生毒性副作用。植物在逆境胁迫下，植物体内的生理活动受到严重干扰。与此同时，植物本身会通过改变生理代谢来作出反应，脯氨酸 质量分数的变化正是这样的一种生理响应。在本实验，不同干旱胁迫下，游离脯氨酸的含量变化，可分析出小麦幼苗不同部位对干旱条件的敏感情况以及抗干旱胁迫的能力。

当植物处于干旱条件下时，为了保护植物对干旱逆境的反应，在干旱胁迫下脯氨酸质量 分数呈急剧上升的趋势。在干旱条件下，叶片中的脯氨酸合成速度及质量分数明显增加，因此，脯氨酸与植物的抗旱性有密切关系。而对于植物的不同部位积累的脯氨酸的质量分数也表现不同，本实验中，对于小麦幼苗的叶片和根部游离脯氨酸含量均受到干旱的胁迫，但其变现的程度却有高低之分。如数据所示，叶片中脯氨酸的含量变化比根部的脯氨酸含量变化程度要大，这表明不同部位对干旱胁迫敏感程度不同，可以分析出根部对干旱的胁迫影响不及叶片的敏感，也表明了，叶片受胁迫同等程度上较根大。9 结论

由脯氨酸含量变化，可分析得出，干旱胁迫对小麦幼苗的生理生化有显著的影响，随着干旱胁迫的递增，其影响也呈递增趋势。而对于不同部位的影响大小却存在差异。

第五篇：杞菊地黄丸定性检查及含量测定解读

杞菊地黄丸定性检查及含量测定

前言：实验依据：有熟地之腻补肾水,即有泽泻之宣泄肾浊以济之;有英肉之温涩肝经,即有丹皮之清泻肝以佐之;有山药收摄脾经,即有获菩之淡渗脾湿以和之。药止六味,而大开大合,三阴并治,询补方之正鹊也”。本方配伍具有“三补”、“三泻”的特点,但中熟地黄用量是山萸肉、山药两药之和,且三辛佣明显重于三泻。枸杞和菊花增加了清肝明目的效果。现对杞菊地黄丸中各味药材进行定性鉴别和含量测定。

关键词;杞菊地黄丸；定性鉴别；含量测定；

1.地黄(鲜跃全)

定性鉴别（TLC法）

实验仪器：超声发生器、研钵、烧杯、微量移液管、、吹风机、研钵、烧杯、硅胶G薄层板、实验材料：杞菊地黄丸 熟地黄 泽泻 茯苓 枸杞子 牡丹皮 山茱萸 山药细粉 菊花

实验试剂：乙酸乙酯、冰醋酸、10%硫酸、蒸馏水正丁醇、甲苯、冰醋酸、无水乙醇、10%硫酸、蒸馏水

试验方法

1.1供试品溶液的制备

1.1.1取杞菊地黄丸(浓缩丸)6g，研碎，加乙醇超声处理分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液。

1.1.2供试品溶液的制备

称取颗粒剂2.2 g，研磨成细粉，加甲醇40 ml，超声振荡30 min。过滤。滤液浓缩至干,加乙酸乙酯2 ml溶解,得供试液。1.2对照品的制备

另取毛蕊花糖苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

1.3对照药材的制备

称取熟地黄浸膏粉0.5 g，按照供试品溶液制备方法，制得熟地黄药材的对照液。

1.4阴性对照液的制备

按处方比例，取除去熟地黄以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g,山茱萸1g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20 mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。1.5薄层色谱法

1.5.1照薄层色谱法《中国药典》(2010年版)附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—乙酸乙醋—冰醋酸((24 : 8 : 1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

1.5.2薄层色谱照薄层色谱法《中国药典》(2010年版)附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水-甲醇(6∶3∶3∶2)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。

2.山药（周开放）

【性味与归经】味甘，性平。归脾、肺、肾经。【功能与主治】补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。

实验材料：回流装置、冷凝装置、水浴锅、坩埚、烧杯、微量移液管、硅胶G薄层板、吹风机。

实验试剂：乙酸乙酯、甲醇、浓氨试液、无水乙醇、10％磷钼酸。试验方法

2.1供试品溶液的制备

取本品（杞菊地黄丸）粉末5g，加二氯甲烷30ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。2.2对照品的制备

另取山药对照药材5g，同法制成对照药材溶液。对照药材加二氯甲烷同法制成对照药材溶液。

2.3阴性对照液的制备

按处方比例，取除去山药以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。

1.称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；

2.取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度； 3.合并以上两种浓缩液;加70%乙醇20 mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。2.5薄层色谱法试验

照薄层色谱法《中国药典》(2010年版)附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(9：1：0.5)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。

3.茯苓（刘保松）

实验器材：50ml圆底烧瓶，冷凝管，蒸发皿，水浴锅，过滤装置，硅胶G薄层板，紫外检测仪，吹风机

实验材料：茯苓对照药材、杞菊地黄丸

实验试剂：乙醚，甲醇，甲苯，乙酸乙酯，甲酸，2%香草醛硫酸溶液，乙醇。

3.1供试品溶液制备

取杞菊地黄丸浓缩丸6g，研碎，加乙醚50ml(量筒)，超声处理10分钟，滤过(滤纸，漏斗)，滤液蒸干(蒸发皿，水浴锅)，残渣加甲醇1ml使溶解(移液管)，作为供试品溶液。3.2对照品药材制备

取茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

3.3阴性对照溶液制备

按处方比例，取除去茯苓以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺茯苓阴性对照液。3.4薄层色谱法试验

照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸((20 ：5 ：0.5)为展开剂(移液管)，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液一乙醇(4：1)混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰(吹风机)。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。或者照薄层色谱法(中国药典20015年版中国药典)试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸((24 : 8 : 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4.泽泻（王金龙）

实验器材：氧化铝柱，水浴锅，蒸发皿，过滤装置，硅胶H薄层板，紫外检测仪，吹风机

实验材料：泽泻对照药材、杞菊地黄丸

实验试剂：乙酸乙酯，23-乙酰泽泻醇B对照品，环己烷，乙酸乙酯，5%硅钨酸乙醇。

4.1供试品溶液制备

取杞菊地黄丸浓缩丸6g，研碎，加乙酸乙酯20 m1(量筒)，超声处理30分钟，滤过(滤纸，漏斗)，滤液加于氧化铝柱(200-300目，5g，内径为l cm，干法装柱)上，用乙酸乙酯10ml洗脱(移液管)，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯l ml(移液管)使溶解，作为供试品溶液。4.2对照品药材制备

取泽泻对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

4.3对照品溶液制备

另取23-乙酰泽泻醇B对照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。4.4阴性对照溶液制备

按处方比例，取除去泽泻以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺泽泻阴性对照液。称取泽泻0.75g、熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20 mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。

4.5薄层色谱法试验

照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯(1 : 1）为展开剂(移液管)，展开，取出，晾干，喷以5%硅钨酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰(吹风机)。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。或者照薄层色谱法(中国药典20015年版中国药典)试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸((24 : 8 : 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

5.丹皮（雷铭宇）

仪器：加热回流装置、薄层板、紫外光灯

材料：乙酸乙酯、蒸馏水、甲醇、牡丹皮对照药材、乙醚、丙酮、丹皮酚对照品、环己烷、盐酸、三氯化铁、乙醇 定性鉴别（TLC法）

5.1 供试品溶液的制备

取本品15g（天平），研碎，加水100ml，加热回流3 0分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯50ml（50ml量筒）振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干（水浴锅），残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。5.2对照药材溶液提取

取牡丹皮对照药材1g（天平），研碎，加乙醚40ml，加热回流1 小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮lml（量筒）使溶解，作为供试品溶液。5.3对照品溶液的制备

取丹皮酚对照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。5.4阴性对照溶液的制备

取处方中除丹皮外的其余药味，称取泽泻0.75g、茯苓0.75g、熟地黄2g和山茱萸1g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度（水浴锅）；取枸杞子0.5g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20 mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。5.5.1薄层条件

照薄层色谱法（通则0502)试验，吸取上述三种溶液各

10ul分别点于同一硅胶G 薄层板上，使成条状，以环己烷-乙酸乙酯（3：1)为展开剂（层析缸），展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5 %三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑。5.5.2薄层板

硅胶Ｇ薄层板20ｃｍ×20ｃｍ×0.4ｃｍ,105℃ ,活化30ｍｉｎ备用;展开剂:-环乙烷-乙酸已酯-冰醋酸(10∶1∶0.1);斑点观察:置紫外灯下(λ=254ｎｍ)检识定位 5.6丹皮酚的含量测定 5.6.1材料与方法

紫外分光光度计、型电热恒温鼓风干燥箱、紫外分析仪剂均为99.9%无水乙醇、水为二次蒸馏水 5.6.1.2材料

牡丹皮、丹皮酚对照品

5.6.1.3对照品标准溶液的制备

精确称取丹皮酚对照品0.005g置于 50ml烧杯中，以无水乙醇溶解’ 转至 100ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，得到 50ug/ml 的丹皮酚对照品溶液

5.6.1.4结果与分析

5.6.1.4.1测定波长的选择

以无水乙醇为对照品，在274nm出测的最大波长 5.6.1.4.2线性关系考察

分别吸取对照品溶液0.5ml，1ml，1.5ml，2ml，2.5ml，3.0ml，3.5ml，4ml，置于25ml容量瓶中!，用无水乙醇稀释至刻度摇匀。以无水乙醇为空白溶液在 274nm 波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标样品浓度为横坐标绘制标准曲线。

5.6.1.4.3丹皮酚含量测定

准确称取牡丹皮粉末 3.000g（分析天平），置于50ml锥形瓶中，加入25ml无水乙醇，60度恒温水浴2h，趁热过滤，置于25ml容量瓶中用无水乙醇溶液定容，作为供试品溶液。量取5份0.1ml牡丹皮供试品溶液分别置于25ml容量瓶中。用无水乙醇定容至刻度，摇匀，以无水乙醇为空白对照，于274nm波长处测定吸光度，测量三次，取平均值。丹皮酚含量测定结果如下表。

吸光度

检出量ug/ml

平均检出量ug/ml 丹皮酚含量

6.菊花（邬学良）

定性鉴别（TLC法）

实验器材：水浴锅，超声提取仪，过滤装置，硅胶H薄层板,聚酰胺薄膜，紫外检测仪、锥形瓶、分析天平、回流装置、蒸发皿、5ml量瓶、25ml棕色量瓶 实验材料：菊花，绿原酸供试品、杞菊地黄丸

实验试剂：稀盐酸，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，正丁醇，甲酸，冰醋酸、氯仿

实验方法

6.1供试品溶液制备方法

6.1.1取本品杞菊地黄丸（浓缩丸），研细(过一号筛)取约1g，精密称定（分析天平）,置锥形瓶中,精密加人50％甲醇50ml,称定重量,加热回流2小时,冷却,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取（10ml移液管）续滤液10ml,蒸干残渣加氯仿5ml,浸渍3分钟,弃去氯仿液,残渣挥去氯仿（水浴，蒸发皿）,加水适量使溶解,并转移5ml棕色量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。6.2对照品溶液的制备

取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1 ml含绿原酸35μg的溶液，即得(10℃以下保存)。6.3对照药材溶液制备

另取菊花对照药材粉末1g，同供试品溶液制法制成对照药材溶液。

6.4阴性对照溶液的制备

取处方中除菊花外的其余药味，按上述供试品溶液制备阴性对照溶液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g和山茱萸1g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20 mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。6.5照薄层色谱法 6.5.1薄层板

薄层板：硅胶板H 乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1：15：1：1：2)的上层溶液，乙酸乙酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层溶液，乙酸乙脂:甲酸:水:乙醇(1:1:1:0.2)上层液，乙酸乙酯-正丁醇-水（4:5:1）的上层溶液 6.5.2薄层板

聚酰胺薄膜板展开剂：36%乙酸吸取上述四种溶液各0.5～1μl，分别点于同一硅胶板上，用展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

7.山茱萸（陈明璐）

实验仪器：加热回流装置、高效液相色谱仪、渗漏装置、吹风机、十八烷基硅烷键合硅胶

实验材料：杞菊地黄丸、蒸馏水、乙酸乙酯、甲醇、山茱萸药材、熊果酸对照品、甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸、磷酸、莫诺苷、马钱苷 7.1.供试品溶液的制备

取本品15g，研碎，加水100ml，加热回流 30 分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯 50ml 振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇 lml 使溶解，作为供试品溶液。7.2对照药材溶液的制备

取山茱萸对照药材1g，加乙醚 40ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯 lml 使溶解，作为对照药材溶液。7.3样品溶液的制备

另取熊果酸对照品，加乙酸乙酯制成每lml 含 lmg的溶液，作为对照品溶液

7.4阴性对照品溶液的制备

按处方比例和制法制备不含山茱萸的阴性样品，制成阴性样品溶液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20 mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。7.5定性检测

照薄层色谱法（通则0502)试验，吸取〔鉴别〕（5)项下的供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品溶液各 5µl，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯乙酸乙酯-甲酸（15 : 2 : 1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm)检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。

8.4.2吸取上述三种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸（3：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。

参考文献：1.2015年《中国药典》第一部

2.中华民族民间医药 2015 年8 月第24 卷第16 期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2015，Vol.24，No.16 3.第41 卷第12 期2013 年6 月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.41 No.12June.2013 4.[1]邓如伟,冉兰,李颖,张榕.杞菊地黄颗粒中六味药材的薄层色谱鉴别[J].华西药学杂志,2005,03:264-266.5.李永霞，靳湘，杜霞.高效液相色谱法测定杞菊地黄丸中绿原酸的含量[J].中国医院药学杂志.1549-1550.1.杞菊地黄丸中山药的测定 2.杞菊地黄丸中茯苓的测定 3.杞菊地黄丸中泽泻的测定 4.杞菊地黄丸中菊花的测定 5.杞菊地黄丸中枸杞的测定 6.杞菊地黄丸中丹皮的测定 7.杞菊地黄丸中山茱萸的测定

读书的好处

1、行万里路，读万卷书。

2、书山有路勤为径，学海无涯苦作舟。

3、读书破万卷，下笔如有神。

4、我所学到的任何有价值的知识都是由自学中得来的。——达尔文

5、少壮不努力，老大徒悲伤。

6、黑发不知勤学早，白首方悔读书迟。——颜真卿

7、宝剑锋从磨砺出，梅花香自苦寒来。

8、读书要三到：心到、眼到、口到

9、玉不琢、不成器，人不学、不知义。

10、一日无书，百事荒废。——陈寿

11、书是人类进步的阶梯。

12、一日不读口生，一日不写手生。

13、我扑在书上，就像饥饿的人扑在面包上。——高尔基

14、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游

15、读一本好书，就如同和一个高尚的人在交谈——歌德

16、读一切好书，就是和许多高尚的人谈话。——笛卡儿

17、学习永远不晚。——高尔基

18、少而好学，如日出之阳；壮而好学，如日中之光；志而好学，如炳烛之光。——刘向

19、学而不思则惘，思而不学则殆。——孔子

20、读书给人以快乐、给人以光彩、给人以才干。——培根