课题2
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计
一、教学目标
1.掌握筛选微生物的实验原理，对分离不同微生物能熟练配制不同的选择培养基
2.分析研究思路的形成过程，为本节课的细菌筛选提供思路启迪
3.掌握微生物培养过程的无菌操作
二、教学重点
1.对土样的选取和选择培养基的配制
2.实验流程的设计
三、教学难点
对分解尿素的细菌的计数
四、教学方法
启发式教学
五、教学工具
多媒体课件
六、教学过程
（一）新课引入
1.尿素是一种重要的氮肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为
氨和CO2，这是因为细菌能合成脲酶。
2.在体外将DNA大量复制的扩增技术被称为DNA多聚酶链式反应，该技术的自动化需要用到一种酶———耐高温的DNA聚合酶，我们应该从哪去寻找这种酶呢？到高温环境中去找，聪明的科学家从热泉中找到了一种耐热细菌Taq，从中筛选出了耐高温的TaqDNA聚合酶，是因为：热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，那么这个过程是否可以给我们一种思路，这种分解尿素的细菌应该如何分离出来？
（二）内容讲解
1.实验基础知识点讲解
1.1实验室中微生物得筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
1.2据教材22页左上角的培养基配方回答下列问题：
〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是
葡萄糖，提供氮源的的是
尿素，琼脂的作用是
凝固剂。
〖思考2〗该培养基对微生物
具有
选择作用。其选择机制是
只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。
1.3在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是
稀释涂布平板法
。除此之外，显微镜直接计数法
也是测定微生物数量的常用方法。
1.4采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌
。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是
（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数。
〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是
正确的选择稀释度。
〖思考5〗教材22页案例一，哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？
第二
位同学的结果接近真实值。这两位同学的实验都需要改进：第一位同学需设置重复实验组；第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需重新实验。
1.5统计的菌落数比活菌的实际数目
低
。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用
菌落数
来表示。
1.6设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
1.7对照实验是指除了
被测试的条件外，其他条件都
相同的实验。满足该条件的称为
对照组，未满足该条件的称为
实验组。
〖思考6〗教材22页案例二，你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？：
方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。
方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。
2．实验设计
2．1
实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。
2．2
土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性土壤中，约70％～90％为细菌。
2．3
分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。
2．4
培养不同微生物往往需要不同的培养温度。细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。
2．5
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。
2．6菌落的特征包括
形状、大小、隆起程度、颜色
等方面。
〖思考8〗土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜等。
2．7
实验过程
1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
2）应在火焰旁称取土壤
g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。
3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。
4）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。
5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。
〖思考9〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。
3．结果分析与评价
在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶
将尿素分解成了
氨
。氨会使培养基的碱性
增强，PH
升高
。因此，在以
尿素
为唯一氮源的培养基中加入
酚红
指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变
红，说明该细菌能够
分解尿素。
七、板书设计
1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
2、实验室中微生物的筛选原理
3、菌落数目的统计方法：稀释涂布平板法和显微镜直接计数法
4、设置对照实验应注意的问题和原则
5、实验设计流程
6、对尿素分解菌得进一步鉴定：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂进行培养，若指示剂变红，则该细菌能分解尿素。
八、作业布置：
同步解析与测评学考练上相应章节习题
九、教学反思：
本节课主要从尿素在农业上的重要应用引入，介绍能分解尿素的细菌类型，进而说明这种细菌的作用是能够合成分解尿素的酶。在教学过程中，可以联系生产生活实际，使学生对尿素以及分解尿素的细菌形成一定的认识。对于实验中的对照原则以及生物实验时所应遵循的基本原则规范，可以通过实验练习进行熟练掌握。
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