艾滋病的实验室诊断方法[样例5]

第一篇：艾滋病的实验室诊断方法

科研方法学

班级：2008级研3班 学号：2008128 姓名：段治华 艾滋病的实验室诊断方法

段治华

（山西医科大学，太原030001）

摘要:艾滋病是由人类免疫缺陷病毒感染引起的传染病，实验室检测是诊断艾滋病的主要手段，检测项目包括HIV抗原和抗体检测，病毒载量检测，CD4T淋巴细胞检测，HIV耐药性检测，基因芯片技术的运用，病毒分离等。近年来，基于分子生物学和免疫学方法的发展，HIV的实验室检测有了较大的进步，为艾滋病的准确诊断提供可靠的方法。

关键词:艾滋病 HIV 实验室诊断

艾滋病是获得性免疫缺陷综合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS)的英文音译，由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染引起的以免疫功能缺陷为主要特点的传染病[1]。目前在我国，艾滋病的流行已进入快速增长期，要有效地预防和控制艾滋病的流行，必须有可靠的诊断方法快速准确地诊断艾滋病。目前，艾滋病的诊断主要依靠实验室检测方法，近年来，基于分子生物学和免疫学方法的发展，HIV的实验室检测有了较大的进步。现简单叙述目前采用的实验室诊断HIV的方法。HIV结构特点

人类免疫缺陷病毒（HIV）外型呈球形或卵形，直径90～130nm，病毒特有的蛋白质附着于一薄层类脂质构成其包膜。核心含有两条相同拷贝的RNA 链，外周核膜由多种蛋白质形成。HIV属逆转录病毒，基因组中存在三个大的开放读框，其顺序是gag-pol-env。Gag基因编码55KD的前体蛋白，在病毒成熟过程中，被pol基因编码的蛋白酶加工，分别产生核心蛋白P17、核壳蛋白P24和核酸结合蛋白P15。P24是核壳组成蛋白，构成病毒的核衣壳，它的结构比较稳定，是HIV-1型的特异性蛋白。在HIV-2与P24对应的是主要核心抗原P32，为HIV-2型病毒感染的特异标志。Env编码包膜蛋白，由外膜糖蛋白gp120和跨膜糖蛋白 1 gp41组成(在HIV-2型病毒中与之相当的是gp110/ 130和gp36)[1]。HIV抗原检测

检测P24抗原可作为早期特异性诊断，因为在HIV感染的早期，血中未出现HIV抗体，血P24抗原常以低水平出现，但是该抗原检出率远比HIV 抗体为低，因为HIV 抗原出现不久即可产生抗体，抗原抗体以复合物形式存在，而游离很少。在感染后期，抗原再度升高，可作为HIV活动性感染的标志。P24抗原检测方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫(RIA)、免疫荧光技术(IFA)、免疫吸附电镜(ISEM)等，其中ELISA操作简单、经济、省时高效的实验方法，具有良好的敏感度和特异度 [2]。HIV抗原检测的灵敏度约50% ～ 80%，所以该结果只能作为HIV 感染的辅助诊断依据[3]。HIV抗体检测

3.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA为HIV抗体初筛最常用的筛检方法，其试剂已经发展到第4代[3]。

3.2 凝胶颗粒凝集试验（PA）此法快速、简便，适合对少量标本的检测，但是灵敏度和准确性不如ELISA法[1]。

3.3 金标快速反应试验 将颗粒凝聚法的简便性和酶免疫测定(EIA)技术相结合，用于快速检测抗-HIV，特异性较好，试剂稳定，检测时不需要任何设备，快速简便，适用于应急检测以及边远地区检测[1]。

3.4 尿液HIV抗体检测 尿液检测已成为艾滋病检测的一种全新手段，在安全、便捷等方面更具优势。HIV感染者的尿液、唾液、精液及泪液中均含有HIV抗体，其HIV抗体主要成分为IgG[3]。

3.5 免疫斑点印迹试验（western blot，WB）此法被称为抗-HIV检测的“金标准”。是将HIV病毒蛋白通过十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的蛋白带分离开来,再把这些已经分离的不同蛋白转移到醋酸纤维素膜上,再将此膜切割成条状，每一条醋酸纤维素薄膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。待检血清样本用稀释液稀释成1∶100，把它直接加到醋酸纤维素膜上，恒温振荡，使其充分接触反应。血清中若含有抗-HIV，就会与膜条上的抗原结合，冲洗除去多余的抗体，再加入抗人-IgG酶结合物并孵育，经洗涤后加入底物，有反应的抗原抗体结合带呈现紫褐色，根据出现条带情况判定结果[1]。3.6免疫荧光 将HIV感染的细胞作为抗原固定在玻片上，滴加待检血清，若含有HIV抗体，则与细胞膜上的病毒抗原结合，清洗后加荧光标记的抗人IgG，细胞膜染色为HIV抗体阳性。此法操作简便，敏感性及特异性均较ELISA法高，但存在对某些血清非特异性荧光难以去除，结果判断需较高级的荧光显微镜等缺点[3]。

3.7放射免疫沉淀试验 用同位素标记的HIV蛋白与待检血清反应，若血清中含有HIV抗体即可与HIV蛋白抗原结合，再加入葡萄球菌蛋白A，经低速离心，然后将沉淀复合物分离后电泳，放射自显影观察同位素标记蛋白带即可判定。本法灵敏度和特异度均好，但因试剂制备复杂，成本高，且同位素操作需要严格防护而限制其应用[3]。HIV 病毒载量检测

HIV病毒载量是指体内病毒复制的数量，一般以血清HIV-RNA表示，随着生物技术的发展，HIV病毒载量检测得到人们越来越多的重视，它可以直接检测HIV-RNA，可在发现血清学变化之前检测HIV感染，而且比P24抗原检测方法更灵敏，主要以RNA的拷贝数表示。检测方法有聚合酶链反应检测法，分枝DNA信号扩增检测法，核酸序列扩增实验。

[1]5 CD4T淋巴细胞计数

CD4T淋巴细胞是人体免疫系统最重要的细胞之一，HIV主要侵犯CD4T淋巴细胞，导致其数量减少和功能缺陷，使机体免疫功能低下，导致各种机会感染和肿瘤。CD4T淋巴细胞计数是AIDS诊断、疾病分期、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案的实验室标准指标。目前对CD4T淋巴细胞计数有手工操作法和自动检测法。流式细胞仪是目前最好的自动检测方法[1]。HIV耐药性检测

耐药性是指病毒对某种药物敏感性降低,药物抑制50%或90%病毒生长的浓度上升几倍或几十倍[4]。

6.1 基因型检测 原理为利用RT-PCR技术对HIV-1 病毒的POL基因区(蛋白酶区和逆转录酶区)序列进行反转录扩增(手工或自动仪器方法)，通过基因测序技术获得序列信息，与全球HIV耐药基因数据对比分析耐药位点，得出耐药结果。3 这种检测方法历时较短、费用较低，技术也相对容易[5]。

6.2 表型耐药检测 就是利用体外药敏分析方法，在逐渐增加的药物浓度下对HIV-1复制能力进行直接的评价。其结果以50%抑制浓度来表达(IC50)，并与野生株的IC50或临界值(cut-off值)相比，通过其倍数改变(fold change)来评估其耐药程度[4]。该试验耗时且价格昂贵、技术要求高[5]。基因芯片技术

HIV基因芯片技术是把PCR技术和核酸分子杂交技术完美结合。是在厘米见方的固相载体上，将基因以微点阵的形式排列，应用核酸杂交的原理来检测未知基因，具有操作简单、自动化程度高、检测靶分子种类多、成本低、结果客观性强等特点[1]。病毒分离培养

人体感染病毒后，便会终生携带。HIV广泛存在于人体的淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、组织、血液和其他体液中，从这些材料中分离培养HIV，可用于HIV感染的辅助诊断，以及研究HIV在人群中的分布、变异和耐药情况。HIV病毒分离需要在P3级生物安全实验室进行，实验条件要求高[1]。

总之，对HIV检测方法分析将有助于HIV的早期诊断，避免漏检，也有助于对治疗艾滋病药物的疗效评价、预测和监测疾病进程，提高检测的灵敏性，从而缩短检测的窗口期。随着对人类HIV/AIDS 研究的深入以及其他生物技术的发展，为HIV的检测提供更快更可靠的方法，为诊断和治疗艾滋病提供技术支持。

[参考文献] [1] 潘云.AIDS的实验诊断[J],右江民族医学院学报,2007,1:110-111.[2] 熊祝嘉.ELISA检测p24抗原用于诊断HIV感染的研究现状[J],实用医技杂志,2007,14(2):116-117.[3] 白浪,雷秉钧.HIV/AIDS实验室检测及其研究进展[J],中国循证医学杂志,2008,8(3):206-209.[4] 鲁俊锋,李珏,李敬云,吴昊.HIV的表型耐药及检测方法的研究进展[J],中国病原生物学杂志,2008,3(1):65-66.[5] 康来仪.HIV/AIDS目前实验诊断方法及其价值[J], 诊断学理论与实践,2007,6(3):187.

第二篇：《梅毒实验室诊断方法》

梅毒实验室诊断

梅毒的实验室诊断方法主要有显微镜检查法和血清学检测法。

一、显微镜检查法

（一）暗视野显微镜检查

【基本原理】

梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损的渗出液涂片，以及淋巴结穿刺液涂片等，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。

【仪器材料】

1．暗视野显微镜。

2．钝刀（刮勺）、载玻片、盖玻片、注射器具、无菌生理盐水。

【标本采集】

1．皮肤黏膜组织液：无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀轻刮、挤压皮损表层，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片镜检。

2．淋巴液：无菌操作下穿刺淋巴结，注入生理盐水并反复抽吸2～3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片镜检。

【操作步骤】

1．加镜油：在暗视野显微镜的聚光器上滴加镜油。

2．聚光：将标本玻片置载物台上，上升聚光器使镜油接触载玻片底面。

3．镜检：在镜下观察，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。

【结果判读】

XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX、告XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX梅毒螺旋体在暗视野显微镜镜下表现为纤细、白色、有折光的螺旋状微生物，长5～20mm，直径小于0.2mm，有6～12个螺旋，具有旋转、蛇行及伸缩等三种特征性的运动方式。暗视野显微镜下发现有上述特征的螺旋体为阳性结果。

【结果报告】

1．阳性：见到上述特征的梅毒螺旋体。

2．阴性：未见到上述特征的梅毒螺旋体。

【临床意义】

1．暗视野显微镜检查阳性,可确诊梅毒。

2．螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最好方法，世界卫生组织指定为性病实验室必备项目之一。

3．如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，应复查和血清学检查。

【注意事项】

1.取材时尽量避免出血，以免影响镜下观察。

2.取材后应立即置暗视野显微镜下观察。

3.镜下观察时应注意与其他螺旋体相鉴别。

（二）镀银染色检查

【基本原理】

梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体。

【仪器材料】

1．显微镜。

2．罗吉氏固定液、鞣酸媒染剂、Fontana氏银溶液。

【标本采集】

1.皮肤黏膜组织液：无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀轻刮、挤压皮损表层，取渗出液涂片。

2．淋巴液：无菌操作下穿刺淋巴结，注入生理盐水并反复抽吸2～3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上。

【操作步骤】

1．涂片干燥：将标本涂于干净载玻片作一薄片，于空气中自然干燥。

2．固定：用固定液将涂片固定2～3分钟。

3．洗涤：用无水乙醇洗涤玻片上的油污。

4．媒染：加媒染剂于涂片上，微加热产生蒸汽，染30秒。

5．银染：水洗，加银染液于涂片上，微加热产生蒸汽，染30秒。

6．镜检：水洗、待干，用油镜检查。

【结果判读】

显微镜下见到染成棕褐色的梅毒螺旋体为阳性结果。

【结果报告】

1．阳性：见到染成棕褐色梅毒螺旋体。

2．阴性：未见到染成棕褐色的梅毒螺旋体。

【临床意义】

同暗视野显微镜检查法。

【注意事项】

应注意与其他螺旋体加以鉴别。

二、血清学检测法

（一）非梅毒螺旋体抗原血清试验

非梅毒螺旋体抗原血清试验，包括性病研究实验室（VDRL）试验、快速血浆反应素（RPR）环状卡片试验、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等。

n

VDRL试验

【基本原理】

梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂抗原的抗体（反应素），与一定比例的心磷脂、卵磷脂及胆固醇混合物抗原反应，可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体。

【仪器材料】

1.水平旋转仪、显微镜。

2.试剂盒：VDRL抗原原液、VDRL缓冲液、抗原滴管及针头、带直径14mm漆圈的玻璃反应板、VDRL试验结果参照图片。

3.30mL平底玻璃小瓶、生理盐水。

【标本采集】

1.血清：抽取静脉血，室温静止凝固后，分离新鲜血清。也可采用冻存的血清。

2.脑脊液：采用腰椎穿刺术获得，应由相关专业人员操作。

【操作步骤】

1.VDRL抗原配制。

2.VDRL玻片定性试验

（1）灭活：血清标本56℃灭活30分钟。

（2）吸样：吸取0.05mL血清放入反应板圈中，将血清涂布到整个圈内。

（3）加抗原：用标准针头加入1滴抗原。

（4）反应：将反应板置水平旋转仪上旋转4分钟，〔(180±5)次/分钟〕，立即置低倍显微镜下观察。

3.VDRL定量试验

（1）加稀释液：在圈内加入0.05mL生理盐水（根据需要确定稀释度）。

（2）样本稀释：吸取0.05mL样本与各圈中盐水作系列稀释并涂布整个圈内。

（3）以下步骤同定性试验（2）～（4）。

【结果判读】

凝集反应强度分级：

3＋

～

4＋：大的或中等大小的絮状物，液体清亮

2＋：絮状物较小，液体较清亮

1＋：絮状物较小，均匀分布，液体混浊

±：抗原复合物颗粒稍粗

－：抗原颗粒均匀、细小

【结果报告】

1．定性试验：

（1）阳性：镜下可见1＋～4＋的絮状凝集物。

（2）阴性：不产生凝集反应。

2．定量试验：

滴度：镜下可见絮状凝集物的血清最高稀释倍数。

【临床意义】

对一期、二期、潜伏期和晚期梅毒患者的敏感性分别为78%、100%、96%和71%。脑脊液VDRL阳性对神经梅毒有诊断意义。

【注意事项】

1．VDRL用抗原需当天配制。

2．试验反应完毕，应立即观察结果。

n

RPR试验

【基本原理】

RPR试验是VDRL试验的一种改良方法。该法在心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原中加入活性炭颗粒，与待检血清（浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的黑色絮状物。

【仪器材料】

1．水平旋转仪。

2．RPR试剂盒：RPR抗原、直径为18mm圆圈的反应卡片、抗原滴管、针头。

【标本采集】

1．血清：抽取静脉血，室温静止凝固后，分离新鲜血清。也可采用冻存的血清。

2．血浆：各种抗凝剂制备的血浆。

【操作步骤】

1．定性试验

（1）

加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内。

（2）加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头[每毫升（60±1）滴]加1滴抗原。

（3）反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟[（100±5）转/分钟]。立即在亮光下观察结果。

2．定量试验

（1）稀释液准备：在圈内加入0.05mL生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。

（2）加样：吸取0.05mL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。

（3）同定性试验（2）～（4）。

【结果判读】

凝集反应强度分级：

3＋

～

4＋：圆圈内出现中到大的黑色絮状物，液体清亮

2＋：圆圈内出现小到中的黑色絮状物，液体较清亮

1＋：圆圈内出现小的黑色絮状物，液体混浊

－：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散

【结果报告】

1．定性试验：

（1）阳性：出现1＋～4＋强度的凝集反应。

（2）阴性：不产生凝集反应。

2．定量试验：

滴度：出现凝集反应的血清最高稀释倍数。

【临床意义】

1．RPR试验适用于梅毒筛查、疗效观察、复发或再感染的检查。

2．对未经治疗的一期、二期和潜伏梅毒患者的敏感性分别为86%、100%和98%。

【注意事项】

试验应在23～29℃环境中进行。

n

TRUST试验

TRUST试验是用甲苯胺红颗粒代替RPR试验中的碳颗粒作为指示物，所以阳性结果为红色絮状物。其基本原理、仪器材料、标本采集、操作步骤、结果判读、结果报告、临床意义及注意事项等与RPR试验基本相同。

（二）梅毒螺旋体抗原血清试验

梅毒螺旋体抗原血清试验是以梅毒螺旋体为抗原的特异性的抗原抗体反应，用以检测梅毒抗体，常用的方法有梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）和梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-WB）等方法。

n

TPPA试验

【基本原理】

TPPA试验是用超声裂解梅毒螺旋体制备的抗原，致敏明胶粒子，其致敏粒子与待检血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见的凝集。

【仪器材料】

1.微量震荡器。

2.试剂盒：“A”溶解用液、“B”标本稀释液、“C”致敏粒子、“D”未致敏粒子、“E”质控血清。

3．U型反应板。

【标本采集】

同RPR试验。

【操作步骤】

1．试剂准备：试验前将待检样本和试剂应恢复到室温。

2．加稀释液：每份样本做4孔，加B液至反应孔内，第1孔100µL，第2～4孔各25µL。

3．样本稀释：取血清25µL加至第1孔，混匀后取25µL至第2孔，连续倍比稀释至第4孔，最后1孔混匀后弃去25µL。

4．加对照液：第3孔加D液25µL，第4孔加C液25µL。

5．混合：将反应板置震荡器震荡30秒。

6．反应：置湿盒内，孵育2小时后，或放4℃冰箱过夜观察结果。

【结果判读】

观察凝集反应强度，分级如下：

4＋：

粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠

3＋：

粒子光滑覆盖大部分孔底

2＋：

粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环

1＋：

粒子光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显细胞环

±：

粒子沉集孔底，中央形成一小点

－：

粒子紧密沉积孔底中央

【结果报告】

1．阳性：未致敏粒子不出现凝集（第3孔），血清1︰80以上稀释与致敏粒子产生1＋～4＋凝集反应。

2.阴性：未致敏粒子和致敏粒子均不产生凝集反应。

【临床意义】

1.TPPA可作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。

2．梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA试验仍可阳性，故TPPA试验阳性不能作为疗效观察的指标。

3．TPPA阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。

【注意事项】

1.试验结果为“可疑”时，应选用其他的试验方法进行复验。

2.如未致敏粒子出现凝集反应，样本进行吸收后再进行试验，或改用其他试验方法。

n

TPHA试验

【基本原理】

TPHA试验用超声裂解的梅毒螺旋体菌体为抗原，致敏经醛化、鞣化的羊或禽类红细胞，与抗梅毒螺旋体抗体反应，产生肉眼可见的抗原抗体凝集。

【仪器材料】

1.微量震荡器。

2．TPHA试剂盒：“A”溶解用液、“B”标本稀释液、“C”致敏粒子、“D”

未致敏粒子、“E”质控血清。

3.U型反应板。

【标本采集】

同RPR试验。

【操作步骤】

1．试剂准备：试验前试剂恢复到15～25℃。

2．加稀释液：加B液至反应板，第1孔25mL，第2孔100mL，第3～5孔各加25mL。

3．样本稀释：取血清25mL加至第1孔，混匀后取25mL至第2孔，混匀后取25mL至第3孔，混匀后弃去25mL，再从第2孔取25mL至第4孔，混匀后取25mL至第5孔，混匀后弃去25mL。

4．加对照液：第3孔加D液（未致敏细胞）75µL，第4、5孔加C液（致敏细胞）各75mL。

5．混合：将反应板置震荡器震荡30秒。

6．反应：置湿盒内，15～25℃孵育4小时，或放4℃冰箱过夜观察结果。

【结果判读】

同TPPA试验。

【结果报告】

同TPPA试验。

【临床意义】

同TPPA试验。

【注意事项】

有些采用禽类红细胞为载体的TPHA试验，血清不用吸收，可直接进行试验。

n

FTA-ABS试验

【基本原理】

以完整的梅毒螺旋体作为抗原，与经吸收剂吸收的梅毒血清抗体反应形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FITC）标记的抗人免疫球蛋白，形成带有荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下螺旋体显出苹果绿色荧光。

【仪器材料】

1．荧光显微镜。

2．试剂盒：梅毒螺旋体抗原片、吸收剂、荧光素标记抗体、阳性对照血清、PBS缓冲液、固定剂。

3.血清稀释板。

【标本采集】

同VDRL试验。

【操作步骤】

1.血清灭活：将血清标本于56℃灭活30分钟，备用。

2.血清稀释：待检血清用吸收剂1：5稀释，阳性血清及阴性血清分别用PBS缓冲液和吸收剂1:5稀释。置37℃湿盒内，30分钟。

3.加样：每次试验必须设PBS缓冲液、吸收剂、PBS液1︰5稀释阳性和阴性血清及吸收剂1：5稀释阳性和阴性血清共6个对照涂片。每个涂片分别加入10µL稀释后的血清或缓冲液，置37℃湿盒内，30分钟。

4.洗涤：用PBS-

Tween-80液洗玻片2次，每次5分钟，最后用蒸馏水洗一次，冷风干燥。

5.加荧光抗体：每个涂片加10µL按要求稀释的荧光抗体,置37℃湿盒内30分钟。

6.洗涤：同步骤4。

7.封片镜检：用固定剂封片，读片。

【结果判读】

1.阳性对照：无论PBS缓冲液还是吸附剂稀释，荧光强度应相同。

2.阴性对照和空白对照：不产生荧光。

【结果报告】

1.阳性：荧光镜下见到不同程度发绿色荧光的螺旋体。

2.阴性：无荧光或密螺旋体微显淡绿色。

【临床意义】

1.FTA-ABS是梅毒螺旋体抗原血清学试验的“金标准”。

2．对未经治疗的一期、二期、潜伏梅毒和晚期梅毒患者的敏感性分别为84%、100%、100%和96%，特异性均可达97%。

3.其他同TPPA试验。

【注意事项】

1.抗原片每次洗涤要干净，避免其他杂质影响判读结果。

2.试验需有高质量荧光显微镜和技术熟练的操作人员。

n

TP-ELISA试验

【基本原理】

TP-ELISA试验是用包被在固相板条上经超声裂解、纯化处理或重组的梅毒螺旋体抗原，与待检血清中的梅毒特异性抗体结合，再与酶标记的抗人免疫球蛋白单克隆抗体反应，形成抗原抗体复合物而使底物显色。

【仪器材料】

1.酶标仪、洗板机。

2．试剂盒组成：96孔反应板、标本稀释液、洗涤液、酶结合物、底物液、终止液、阳性对照、阴性对照。

【标本采集】

同RPR试验

【操作步骤】

1.加稀释液：取标本稀释液加到反应板孔内。

2.孵育：分别加入阳性、阴性对照和待检血清，置37℃孵育一定时间,洗板。

3.加酶结合物：加酶结合物，置37℃孵育一定时间,洗板。

4.加显色剂：加底物，37℃避光孵育。

5.终止反应：加终止液，酶标仪测OD（光密度）值。

【结果判读】

1．每次试验的阳性、阴性对照应在规定的数值范围内

2．根据阳性、阴性OD值设定阈值（cut-off值）。

【结果报告】

1．阳性：标本OD值大于或等于cut-off值。

2．阴性：标本OD值小于cut-off值。

【临床意义】

（1）适用于流行病学调查或大样本量标本的检测。

（2）ELISA阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)结果进行诊断。

【注意事项】

1.不同批号试剂不能混用。

2.温度和时间必须严格控制。

■

TP-WB试验

【基本原理】

用超声粉碎的梅毒螺旋体或梅毒螺旋体重组的不同抗原，印迹至硝酸纤维膜条上。通过酶联反应，可检测梅毒血清中多种特异抗原成分的抗体。

【仪器材料】

1.水平摇床。

2.试剂盒:硝酸纤维膜条、酶标抗体、阳性质控血清、阴性质控血清、底物液、终止液、标准阳性反应带结果参比图谱。

【标本采集】

同RPR试验

【操作步骤】

1．反应：每反应槽加2.0mL工作缓冲液，浸湿膜条5分钟，加入0.02mL待检样本，置水平摇床上(50转/分)，18～25℃反应45分钟。

2．洗涤：弃去反应槽中液体，加入

2.0mL工作缓冲液，置水平摇床洗涤3次，每次5分钟。

3．加酶结合物：

加入酶标抗体，置水平摇床反应30分钟。

4．洗涤：同步骤2。

5．显色：每槽加2.0mL底物，置水平摇床上反应8～10分钟。

6．终止:

待阳性对照带显色清晰，加入1.0

mL终止剂2分钟后弃去槽中液体，用蒸馏水洗2次，用镊子取出反应条，置滤纸上。

【结果判读】

1．根据阳性结果参比图谱判定结果。

2.将试验的硝酸纤维膜条上端标记线与参比标记线对齐。

3．观察45KD、17KD及15.5KD带区显色带。

【结果报告】

1．阳性：

45KD、17KD及15.5KD带区均出现显色带。

2．阴性：

45KD、17KD及15.5KD三个条带均未显色。

【临床意义】

1．同TPPA试验

2．可以用于检测IgM或IgG抗体。

【注意事项】

1．洗涤要充分，否则易造成试验膜条带背景的颜色偏深。

2．硝酸纤维膜条有对照反应条带，在试验中应显示，如未显示，则试验无效。

3．当45KD、17KD及15.5KD中只有一个或两个条带出现明显色带为可疑结果，需重新试验。

n

快速免疫层析法

【基本原理】

利用免疫层析原理，采用吸附有显色标记的梅毒螺旋体重组抗原的滤纸条，快速检测标本中的梅毒螺旋体抗体。

【仪器材料】

试剂盒：测试板、一次性滴管。

【标本采集】

同RPR试验，可用全血。

【操作步骤】

1．加样：用一次性滴管滴加一定量标本于加样孔中。

2．加缓冲液：立即加入一定量的缓冲液。

3．观察结果：规定时间内判读结果。

【结果判读】

1.观察质控条带,判断试验有效性，如没有出现质控条带，说明试验无效，需重复试验。

2．观察标本条带。

【结果报告】

1．阳性:

出现标本条带和质控条带。

2．阴性：无标本条带，出现质控条带。

【临床意义】

1．可以用于标本的快速筛查。

2．快速检测阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)结果进行诊断。

【注意事项】

1．试剂盒从冷藏环境中取出时，应平衡至室温后方可使用。

2．本试验方法存在一定的假阳性和假阴性。

三、其它方法

（一）梅毒IgM抗体的检测

与其它细菌及病毒感染一样，在梅毒中特异性IgM抗体的合成是第一次感染后的体液免疫应答。在梅毒中螺旋体IgM抗体出现在早期梅毒患者中，在潜伏期及晚期患者也能发现。在自发痊愈的患者中IgM水平下降的速度比治疗痊愈的患者慢。IgM分子大使其不能通过胎盘屏障及完整无损的血脑屏障。因此若在新生儿血中检测到IgM抗体是儿童产前感染的诊断标志；如在患者的完整无损的血脑屏障的脑脊液（CSF）中出现，则表示患有活动性神经梅毒。在最近未接受治疗的患者血液中或CSF中出现抗梅毒IgM抗体均表示需要治疗。

测定IgM抗体方法的基本原理是采用分离柱，使血清中的IgM和IgG按其分子量大小在分离过程中的沉降速度不同，将IgM和IgG分别收集，再进行FTA-ABS等试验。亦可采用抗IgM单克隆抗体的酶标法、蛋白质印迹法等进行检测。目前测定IgM抗体的方法的敏感性还很不理想，但是检查到IgM抗体则有助于对以下病例中的试验结果更可靠的解释：先天性梅毒、早期一期梅毒、晚期梅毒、非梅毒螺旋体试验的血清阳转前的早期感染患者的判愈试验及有梅毒史或其它螺旋体感染史患者的再感染。

（二）胎传梅毒(或先天梅毒)的实验室诊断

具有下列实验室四个指标之一，可诊断为胎传梅毒(或先天梅毒)：①暗视野检查梅毒螺旋体阳性；②患儿非梅毒螺旋体血清抗体滴度持续上升；③患儿非梅毒螺旋体血清学定量试验结果比母亲高4倍（低于或等于该值并不排除胎传梅毒）；④患儿检出19S-IgM抗体。

（三）神经梅毒的实验室诊断

1．神经梅毒的实验室诊断标准包括：①梅毒血清学检查阳性；②脑脊液细胞计数或蛋白测定结果异常；③脑脊液VDRL试验阳性。

2．脑脊液VDRL试验是神经梅毒的标准试验，阳性结果可诊断为神经梅毒，但该试验存在假阴性。

3．脑脊液的FTA－ABS试验阴性可排除神经梅毒，但特异性不高，可能产生假阳性。

4．脑脊液检查内容

（1）细胞计数：正常时白细胞数应小于3×106/L，若白细胞数大于10×106/L，提示中枢神经系统有炎症现象。

（2）蛋白质量测定：总蛋白质量正常为0.1～0.4g/L，神经梅毒可稍升高，或高达1.0～2.0g/L。

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END

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第三篇：艾滋病实验室规章制度

艾滋病实验室规章制度

1、实验室工作人员要熟悉生物安全操作知识和消毒技术；

2、不得在实验室内喝饮料、吸烟、吃食物、和化妆打扮等；不得在实验室内会客；

3、实验室用品（包括工作服）不得用于其他用途；不可将私人和无关的物品带入实验室；

4、工作时，要带手套、穿工作衣和隔离衣，操作时手套破损应立即丢弃、洗手并带上新手套；

5、不要用戴着手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等；

6、尽量避免使用尖锐物品和器具；宜用不易破碎材料制品；禁止用口吸任何物质；

7、工作结束后，要对工作台面消毒，如用消毒液清洗后要干燥20分钟以上；操作时有标本、检测试剂外溅时应及时消毒；平时要保持环境整洁；

8、工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手；

9、遇有意外事故，应立即处理并以口头和书面报告上级部门。如工作人员皮肤被刺伤，可以用流动水局部清洗或用刺激性较轻的含氯创伤消毒剂锓泡皮肤创口；样品或检测试剂溅入眼内立即用生理盐水冲洗，溅入嘴内，先吐出残留的液体后，用水反复漱口；

10、遇有高危的意外事故发生，除进行局部处理外，同时应立即采取预防措施，包括对其随访、HIV检测、休息并暂时离开原岗位3个月，按医嘱服用抗HIV药物进行预防；

第四篇：艾滋病实验室工作制度

艾滋病实验室工作制度

1、工作人员必须经省级以上职能部门培训，取得合格资格后方能从事本工作，并定期接受复训；进入实验室必须着装，做好个人防护；遵守二级生物安全防护实验室要求。

2、实验室工作人员要熟悉生物安全操作知识和消毒技术。树立严肃科学态度，严格遵守《全国艾滋病检测技术规范》，操作正规，结果准确。

3、实验室内一切物品要妥善保管，整齐、清洁。不可将私人和无关的物品带入实验室。严禁吸烟、进食、会客、洗晾衣物。

4、进入实验时必须穿戴手套、工作衣和隔离服，加强自我防护。

5、实验过程中严禁用戴着手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。

6、工作结束后，要对工作台面消毒，操作时有标本、检测试剂外溅时应及时消毒，实验过程中的污物、垃圾必须经有效消毒处理后方可带出实验室弃去。

7、遇有意外事故，应立即处理并分别以口头和书面报告上级部门。

8、发生高危意外事故时，除进行局部处理外，要及时报告上级部门，立即采取综合预防措施。

9、离开实验室时，要细心检查水、电及门窗，防止事故。

10、筛查阴性结果要及时出具报告，筛查阳性结果要及时送上级实验室确认，在报告发出前后要做好保密和咨询工作。

11、实验记录要完整、真实，不得任意修改，并保存15年以上。对外发出的报告要履行严格的审核、签发手续。

艾滋病实验室保密制度

1、HIV抗体检测实验室要妥善保存各种实验记录、感染者档案，不得擅自修改和销毁。

2、全科室工作人员均有保守国家机密的职责，必须遵守保密制度，未经省级卫生行政部门许可，不得向无关人员或单位提供任何情况，做到不该说的机密接不说，不该知道的机密接不打听。

3、凡检验结果、科研资料等，未经签发，不得私自外传。仲裁样品、只写编号，对送检单位和样品来源必须保密，检验人员不的打听。

4、检验人员不得私自复制抄录检验报告。

5、在媒体、杂志、报刊上等外事活动过程中，不得泄露单位机密。初筛实验室检测的阳性结果不是最终结果，应及时作进一步确认，故本实验室不能出具HIV抗体阳性的结果报告，更不能告知受检者本人。

6、HIV抗体确认实验室确认的阳性结果，以机密级向送检单位出具阳性报告；送检单位接到阳性报告后，应报告当地卫生行政部门，在对阳性者告知检测结果前要先做好法律、医学、生活等方面的咨询。

7、所有经确认的阳性标本，包括实验室留存的标本，应送上级HIV抗体确认中心或省级卫生行政部门指定的单位保存，不得自行保存或擅自处理。

8、使用计算机保存各种文件和记录，并给文档加密，严防无关人员进入实验室致使文档泄密。

实验室工作制度

1、进入实验室必须着装，做好个人防护。离开时将着装放在固 定位置，着装如有污染应及时按规定先消毒处理并保持清洁。

2、实验室内一切物品要妥善保管，整齐、清洁。试剂分类存放，标签明晰。请领有登记，消耗有记录，损坏有报告。标准试剂要定期标定。

3、树立严禁科学态度，采用先进的实验技术，操作正规，结果 准确。

4、样品要及时登记、编号，明确检验目的，不合要求的样品必 要时重新采样。凡有时间性要求的检品随到随检，一般样品登记后妥善保存尽快检验。剩余样品保存一月，责任检品保存三月以上。不得擅自处理。

5、各实验室，应有设计方案和完整的实验记录，检验士以下人 员的实验记录要有上级医师（检验师）复核。实验报告书写必须工整。对外发出的报告要有主管检验师以上人员签名，科长或主任检验师核发。

6实验室内不得会客、吸烟、进食、洗晾衣物。

7、离开实验室时，要细心检查水、电及门窗，防止事故。

8、本制度自2006年1月1日起执行。

实验室样品接收、登记、送检保存制度

1、送检样品、凭介绍信由主办科室登记，与有关科室或送检人 员联系同意后，对样品进行编号，确定检验项目，开列送检单，将样品送交各有关实验室具体承办人员。

2、送检样品由科室监督人登记、编号、确定检验项目，开列送 检单，并将样品交各有关实验室。

3、科室样品的编号，要有统一的格式，并由中心办公室登记备案。

4、办妥手续的样品，由具体承办人员及时交给检验人员，需其它科室配合协同样品、项目，由科室负责人负责与有关科室协商解决。

5、接收协同检验的科室，检验完毕，应按规定将检验结果交回主管科室汇总。

6、样品的保管应在检验前留取样品的1/3作为保留样品，保留样品须包装完整，密封并贴上标签，以备复查。保留样品根据样品的性质分别存放于室温或冰箱保存。保存时间从发出报告之日起计算。

7、定期检查保管样品的保存质量，核对存放数量。废弃样品按不同样品的规定保存期限，需报请主管领导批准后再进行处理。

8、本职责自2006年1月1日起执行。

实验室安全事故处理制度

病毒学实验室标本含有强致病性病原微生物，工作中经常使用电源和易燃物品，为防止发生实验室内传染与火灾、烧伤、触电等意外事故，特制订《安全事故处理制度》：

1、严格按操作规范操作，对感染性及非感染性实验要在特定区域及工作台面操作，以防交叉感染。标本及毒株应严格按有关规定妥善保藏。

2、如有传染性物品污染桌面或地面，应立即选用敏感消毒液倾覆其上半小时后方可抹去。

3、如有传染物污染工作服，应立即将工作服脱去，进行消毒处理。如传染物污染手臂，应立即将手臂侵入敏感消毒液浸泡5----10分钟，再以肥皂及流水刷洗干净。

4、如有酸或碱溅在皮肤上或溅入眼内，应立即用水反复彻底冲洗，再进行医护治疗。

5、易燃物品如酒精、氯仿、乙醚、丙酮等有机溶剂应远离火源保管及操作，烤箱、电炉、等电器用后立即切断电源。如遇有着火情形，应立即进行扑灭或报告，必要时按规定使用消防栓及报警装置。

6、工作结束后，要注意检查电器工作状态是否良好，电器是否关闭，以确保水、电及仪器的安全。工作人员应将双手用肥皂与水刷洗干净，如有特别注意事宜应先细告知同室人员，确保安全。

病原生物实验室安全制度

1、实验室内保持整洁、干燥，在进行病毒接种无菌操作前后，均应用紫外线照射灭菌，必要时用消毒液擦拭或用甲醛、高锰酸钾进行熏蒸消毒。

2、进入操作室，须先洗净双手并用消毒液浸泡双手，更换拖鞋、戴口罩和帽子，穿洁净隔离服，戴手套操作。

3、实验操作中，如果有液体溅出应及时进行消毒处理。实验完毕后，所穿拖鞋、口罩、帽子，实验服不得穿出室外，须经消毒清洗两手后方能离开实验室。

4、一个接种操作室，严禁同时进行两株病毒株的传种，吸取病毒材料时，勿于悬空吹出或打出，以防止局部形成气溶胶。

5、凡粘病毒材料的吸管、试管等器具，须用适合的消毒液浸泡，或煮沸消毒后方能进行洗涤。

6、凡带有感染性的实验材料或动物尸体，须盛入容器内高压消毒后，方能携出室外进行深埋处理或丢弃。

7、实验室人员在收到送检样品时，应立即进行登记并妥为保存，严格按照操作规程进行并做好实验记录。根据送检要求尽快进行检验并出具检验报告单。

8、实验人员要注意个人安全防护和操作，建立医学健康档案。定期进行医学健康体检和从事的相关疾病的抗体水平检测，上岗前作好疫苗的免疫接种工作。患有相关疾病是应暂时离开实验工作。

第五篇：山东艾滋病实验室

山东省艾滋病检测实验室建设管理规范

为加强全省艾滋病检测工作的规范化管理，提高检测工作质量，根据原卫生部《全国艾滋病检测工作管理办法》（以下简称《办法》）和中国疾病预防控制中心《全国艾滋病检测技术规范》（2009年版）（以下简称《规范》），制订本规范。

一、艾滋病检测实验室的设置

艾滋病检测实验室实行分类管理。按照实验室的职能、检测工作的性质及范围，全省的艾 滋病检测实验室分为艾滋病确证中心实验室、艾滋病确证实验室、艾滋病筛查中心实验室、艾滋病筛查实验室、艾滋病检测点五类。

山东省艾滋病确证中心实验室设在山东省疾病预防控制中心；确证实验室可设在市级疾病预防控制中心、三级甲等医疗机构等具有艾滋病病毒抗体(以下简称HIV抗体)确证条件的医疗卫生、保健和计生机构；筛查中心实验室设在市级疾病预防控制中心；筛查实验室可设在具备条件的各级疾病预防控制中心、医疗保健机构、采供血机构、计划生育技术服务机构等；检测点可设在有检测需求但不具备建立实验室条件的医疗卫生和计划生育技术服务机构，如乡镇卫生院、社区卫生服务中心和一级医疗机构等。

二、艾滋病检测实验室的职能

（一）艾滋病确证中心实验室职能

1、负责全省艾滋病检测实验室建设与管理的技术指导与评价，开展艾滋病检测实验室人员技术培训。

2、建立艾滋病检测实验室质量控制体系，组织省级实验室能力验证和艾滋病诊断试剂的临床质量评估。

3、承担省卫计委指定的HIV抗体筛查、确证和其他艾滋病检测任务。

4、开展应用性研究，承担与艾滋病防治相关的病原学鉴定、现场综合防治、调研、监测、临床治疗等工作中相关的检测任务。

5、建立全省的艾滋病检测样品库和质控品库。

6、收集、整理和分析艾滋病检测数据及相关资料，建立艾滋病检测实验室基本资料库和艾滋病检测数据库。定期向省卫计委和中国疾病预防控制中心报告艾滋病检测数据及相关资料，并配合有关部门做好个案调查、登记等随访工作。

7、对辖区内艾滋病检测实验室进行质量考评和督导。

8、将HIV抗体检测情况及时通过实验室信息管理系统和网络直报上报。

9、出具艾滋病相关检测报告。

（二）艾滋病确证实验室职能

1、承担当地卫生计生行政部门指定的HIV抗体确证、抗体筛查和其他艾滋病检测工作。

2、向艾滋病确证中心实验室报告经确证的阳性结果，每

半年将确证可疑、阳性样本移交艾滋病确证中心实验室统一保存，并配合做好个案调查、登记等工作。

3、承担当地卫生计生行政部门指定的艾滋病筛查实验室的技术指导、培训和评价任务。

4、定期汇总艾滋病检测资料，并上报艾滋病确证中心实验室和同级卫生计生行政部门。

5、对开展自愿咨询检测工作的艾滋病检测实验室给予技术支持和指导。

6、将HIV抗体检测情况及时通过实验室信息管理系统和网络直报上报。

7、出具艾滋病相关检测报告。

（三）艾滋病筛查中心实验室职能

1、负责职责范围内HIV抗体筛查试验，根据需要开展其他艾滋病检测工作。

2、负责将HIV抗体筛查和复检呈阳性反应的样品送艾滋病确证实验室。

3、定期汇总艾滋病检测资料，并上报艾滋病确证实验室。配合有关部门做好个案调查、登记等工作。

4、负责辖区内艾滋病筛查实验室的技术指导；协助艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点开展自愿咨询检测工作。

5、负责辖区内艾滋病筛查实验室、艾滋病检测点的质量考评和督导。

6、将HIV抗体检测情况及时通过实验室信息管理系统和网络直报上报。

7、出具HIV抗体阴性报告。

（四）艾滋病筛查实验室职能

1、开展HIV抗体的筛查工作，根据需要可开展乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒等相关检测工作。

2、负责将HIV抗体筛查试验呈阳性反应的样品送当地艾滋病筛查中心实验室进行复检。

3、定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查中心实验室。

4、对自愿咨询检测工作提供技术支持。

5、县级疾病预防控制中心艾滋病筛查实验室负责对辖区内HIV检测点提供技术指导。

6、将HIV抗体检测情况及时通过实验室信息管理系统和网络直报上报。

7、出具HIV抗体阴性报告。

（五）艾滋病检测点职能

1、开展HIV抗体筛查工作。

2、负责将HIV抗体筛查试验呈阳性反应的样品送当地县级疾病预防控制中心艾滋病筛查实验室进行复检。

3、定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地县级疾病预防控制中心艾滋病筛查实验室。

4、开展艾滋病自愿咨询检测工作。

5、将HIV抗体检测情况及时通过实验室信息管理系统和网络直报上报。

6、出具HIV抗体阴性报告。

三、艾滋病检测实验室建设标准

（一）艾滋病确证（中心）实验室

1、人员条件：至少由5名医疗技术人员组成，其中专职人员至少2名，具有副高级卫生技术职称人员至少1名。负责确证试验的技术人员需具有3年以上从事HIV抗体检测工作经验，接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。

2、建筑条件：需有独立的血清学检测实验室，符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。根据需要设置核酸检测、免疫学检测等区域。

3、仪器设备：配备血清学检测和BSL-2所需仪器设备，包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、低温冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、旋转震荡器、全自动免疫印迹仪、加样器、专用计算机、洗眼器、条码机、传真机、摄像器材、消毒和污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。具有建立血清库和数据库的设备条件。

4、质量保证文件

（1）规章制度：实验室管理制度，档案管理制度，保密制度，疫情上报制度等。

（2）标准操作程序（SOP）：样本的接收、管理、登记和处理，质量控制样品的应用方法，仪器的使用与维护，结果解释与报告，检测数据的记录，实验室的清理和消毒等操作步骤与方法。

（3）实验室安全：实验室生物安全制度或安全守则，人员健康监护档案，废弃物品处理方式，职业暴露登记，实验室意外与事故发生情况处理等。

（二）艾滋病筛查（中心）实验室

1、人员条件：至少由3名医疗技术人员组成，其中具有中级及以上卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。

2、建筑条件

（1）疾病预防控制中心：需有独立的血清学检测实验室，布局合理，符合生物安全二级标准。在实验室入口处必须贴有生物安全标识，并标明级别。所有盛装传染性物质的容器表面明显位置处必须贴有生物安全标识，并按所在生物安全防护实验室的级别予以标明。

（2）医疗保健机构、采供血机构、计划生育技术服务机构等：有条件的可设立独立的血清学检测实验室，也可根据工作需要与其他血清学检测共用一个实验室，但要设立艾滋病检测专用工作台或工作区域。实验室要达到生物安全二级标准。在

实验室入口处必须贴有生物危险标识，并标明级别。所有盛装传染性物质的容器表面明显位置处必须贴有生物安全标识。根据需要，可设置核酸检测和免疫学检测等区域。

3、仪器设备：配备HIV抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪（或化学发光仪）、洗板机、普通冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、加样器、条码机、消毒与污物处理设备（单位集中消毒可不配备高压灭菌器）、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜、洗眼器、计算机等。

4、质量保证文件

（1）规章制度：实验室管理制度，档案管理制度，保密制度，疫情上报制度等。

（2）SOP：样本的接收、管理、登记和处理，质量控制样品的应用方法，仪器的使用与维护，结果解释与报告，检测数据的记录，实验室的清理和消毒等操作步骤与方法。

（3）实验室安全：实验室生物安全制度或安全守则，人员健康监护档案，废弃物品处理方式；职业暴露登记，实验室意外与事故发生情况处理。

（三）艾滋病检测点

1、人员条件：至少由2名经过艾滋病检测技术培训并获得培训合格证书的专业人员组成。

2、建筑条件：需有艾滋病检测区域或专用工作台，能开展简便、快速检测。

3、仪器设备：需配备快速试验所必须的物品，至少包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。根据需要，有条件的可配备洗眼器、加样器、普通离心机、条码机和免疫层析结果判读仪等。

4、质量保证文件

（1）规章制度：实验室管理制度，档案管理制，保密制度，疫情上报制度等。

（2）SOP：样本的接收、管理、登记和处理；质量控制样品的应用方法，仪器的使用与维护，结果解释与报告，检测数据的记录，实验室的清理和消毒等操作步骤和方法。

（3）实验室安全：实验室生物安全制度或安全守则，人员健康监护档案，废弃物品处理方式，职业暴露登记，实验室意外与事故发生情况处理。

四、艾滋病检测实验室的验收

（一）开展艾滋病检测工作的实验室应经过卫生计生行政部门组织的验收，未经验收或验收不合格的实验室不得开展艾滋病检测工作。

（二）艾滋病确证（中心）实验室、筛查(中心)实验室的验收工作由省级卫生计生行政部门负责；艾滋病检测点的验收工作由市级卫生计生行政部门负责。卫生计生行政部门可委托同级疾病预防控制中心负责艾滋病检测实验室的验收工作。

（三）各级卫生计生行政部门应按照职责分工，对各类艾滋病检测实验室分别进行验收：

1、艾滋病确证（中心）实验室

（1）申报。符合条件的艾滋病筛查(中心)实验室，可申报艾滋病确证（中心）实验室。申报单位应填写《艾滋病确证实验室申请表》（附件1-1），经市级卫生计生行政部门审查合格后，报请省级卫生计生行政部门验收。

（2）验收。省卫计委组织专家对申请材料进行审查，材料齐全，符合条件的，组织专家进行现场验收；材料不齐全或不符合申报条件的，书面通知申请单位补充材料或进行整改。现场验收应按照以下程序进行：

①专家组现场听取艾滋病确证（中心）实验室建设情况汇报； ②专家组现场进行考核和验收； ③进行盲样检测及报告考核； ④现场验收情况反馈。

（3）验收结果公布。通过验收的实验室，由省级卫生计生行政部门进行公布，同时报国家卫生计生委备案；未通过验收的，由省级卫生计生行政部门书面通知申请单位。未通过验收的实验室经整改合格后可重新提出申请。

2、艾滋病筛查(中心)实验室

（1）申报。符合条件的实验室可申报艾滋病筛查(中心)实验室。申请单位应填写《艾滋病筛查实验室申请表》（附件1-2），经市级卫生计生行政部门组织专家进行材料审查、现场初审合格后，报请省级卫生计生行政部门验收。

（2）验收。省卫计委组织专家对申报单位的申请材料进行审查，材料齐全，符合条件的，组织专家进行现场验收；材料不齐全或不符合申报条件的，书面通知申请单位补充材料或进行整改。现场验收应按照以下程序进行：

①专家组现场听取艾滋病筛查（中心）实验室建设情况汇报；

②对实验室工作人员进行理论考试； ③专家组现场考核和验收； ④进行盲样检测及报告考核； ⑤现场验收情况反馈；

（3）验收结果公布。通过验收的实验室，由省级卫生计生行政部门进行公布；未通过验收的，由省级卫生计生行政部门书面通知申请单位。未通过验收的实验室经整改合格后可重新提出申请。

3、艾滋病检测点

（1）申报。艾滋病检测点申报单位填写《艾滋病检测点申请表》（附件1-3），报请市级卫生计生行政部门验收。

（2）验收。市级卫生计生行政部门组织专家对申请材料进行审查，对符合规定、材料齐全的，由市级实验室验收专家组进行现场验收；材料不齐全或不符合申报条件的，书面通知申请单位补充

材料或进行整改。现场验收应按照以下程序进行：

①专家组现场听取艾滋病检测点建设及准备情况汇报； ②艾滋病检测点工作人员进行理论考试； ③专家组现场考核和验收； ④盲样检测及报告； ⑤现场验收情况反馈。

（3）验收结果公布。通过验收的实验室，由市级卫生计生行政部门进行公布，并报省级卫生计生行政部门备案；未通过验收的，由市级卫生计生行政部门书面通知申请单位。未通过验收的检测点经整改合格后可重新提出申请。

（四）艾滋病检测实验室迁移地点或变更艾滋病检测实验室的类别，按上述规定重新申请验收。

五、艾滋病检测实验室的监管

（一）各级卫生计生行政部门应加强对辖区内艾滋病检测实验室的监督管理，规范艾滋病检测实验室的设置和验收，确保艾滋病检测工作质量。

（二）各级卫生计生行政部门应定期组织对辖区内艾滋病检测工作进行督导检查。对于未经卫生计生行政部门验收或验收不合格擅自开展艾滋病检测工作的，应责令其限期改正，并给予通报批评。对于虽然经过验收并取得艾滋病检测资格，但有下列情形之一者，责令其限期整改，整改后仍不合格的取消其艾滋病检测资格。

1、艾滋病筛查实验室出具艾滋病病毒抗体阳性报告，以及筛查呈阳性反应的样品不按规定送检的；

2、使用未经国家食品药品监督管理局注册、且不符合相关要求试剂的；

3、未开展实验室内质量控制或未参加实验室能力验证的；

4、使用非卫生专业技术人员或未经培训合格的专业技术人员从事艾滋病检测工作的；

5、未按规定对实验室废弃物、污物进行消毒处理的；

6、在艾滋病检测工作中弄虚作假，出具虚假报告的；

7、擅自修改检测记录或未按规定保存记录，造成严重后果的。

（三）各级疾病预防控制中心负责辖区内艾滋病检测实验室的技术指导，定期组织开展实验室能力验证和业务培训工作。

附件：

1、山东省艾滋病检测实验室申请表

2、山东省艾滋病检测实验室验收标准