广式月饼微生物检测

第一篇：广式月饼微生物检测

广式月饼从原料到餐桌的食品微生物检测 食安

一、摘要：本文通过对月饼原料、馅料、广式月饼生产线的工序、设备及微生物污染状况的检验，介绍了国家规定的糕点常用的微生物检测的原理，采样要求，操作步骤。

二、关键词：馅料 广式月饼 生产工艺 微生物检测

三、前言：月饼是使用面粉等谷物粉、油、糖或不加糖调制成饼皮，包裹各种馅料，经加工而成在中秋节食用为主的传统节日食品。广式月饼闻名于世，最基本的还是在于它的选料和制作技艺无比精巧，其特点是皮薄松软、油光闪闪、色泽金黄、造型美观、图案精致、花纹清晰、不易破碎、包装讲究、携带方便，是人们在中秋节送礼的佳品，也是人们在中秋之夜，吃饼赏月不可缺少的佳品。月饼作为我国中秋的传统美食，花色品种丰富，也各具特色，深受人们喜爱。

四、月饼中的微生物指标

月饼本身营养丰富，加之在生产、销售季节多遇高温高湿天气，因此，月饼的霉变和菌落总数超标问题常有发生。同时与它的馅料、原料、生产加工工艺、运输、设备、贮存、销售、包装等环节中污染都有密切关系。月饼中的主要微生物指标：菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、霉菌和酵母菌。

1．原料中的微生物检测

菌落总数测定 按GB/T 4789.2规定执行标准 大肠菌群测定 按GB/T 4789.3规定执行标准 沙门氏菌检验 按GB/T 4789.4规定执行标准 霉菌和酵母菌计数 按GB/T 4789.15规定执行标准

2．原料检测材料与方法

实验材料：原料购自个体加工厂 培养基和试剂

普通营养琼脂，伊红美蓝琼脂(EMA)，乳糖发酵管 磷酸盐缓冲液

2.1 细菌总数测定

2.1.1样品稀释及培养

称取样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液的无菌均质杯,8000r/min-10000r/min均质1min—2min,制成1:10的样品匀液。

根据卫生标准，无菌条件下，用原料样品l：10匀液按l：100、l：1000倍稀释制成稀释液，标记为S。

用灭菌移液管分别吸取0．1mL1：10倍稀释液于4个普通营养琼脂制成的平板上，标记为Sl0、Sl1、Sl2、Sl3。吸取l：100倍稀释液做4个平板，标记为S100、S101、S102、S103。吸取l：1000倍稀释液做2个平板，每个平板0．2ml，标记为S1000、S1001。

将平皿培养倒置于36± l℃ 温箱内培养24± 2h取出，进行菌落计数，然后乘以5(由0．2mL换算成l mL)，再乘以样品稀释液的倍数，即得l mL检样中所含菌落数。

2.1.2 菌落计数

2.1.2.1平均菌落的选择

选取菌落数在30～ 300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度用两个平板，采用平均数。2.1.2.2 稀释度的选择

选择平均菌落在30～ 300之间，乘稀释倍数。2.1.2.3 菌落数的报告

菌落数在100以内时，按实有数报告，大于100时，采用2位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，也可用l0的指数来表示。

2.2大肠菌群的测定

2.2.1 样品的稀释

以无菌操作将检样制成l：l0、l：100、l：1000稀释液。根据卫生标准或对样品的估计，选择2～ 3个适宜的稀释度。2.2.2 乳糖发酵试验

将待检乳样接种于乳糖胆盐发酵管内，每一个稀释度接种三管，标记为Sl0、Sl1、Sl2，Sl00、Sl0l、Sl02、Sl000、Sl00l、Sl002，置36± l℃温箱中，培养24±2h。如所有乳糖胆盐发酵管均产气，则可报告大肠菌群阴性。如有产气者，按下列程序进行。2.2.2.1 分离培养

将产气的发酵管分别接种到伊红美蓝琼脂平板上，置于36± l℃温箱内培养l8～24 h，然后取出，观察菌落形态，革兰氏染色和证实试验。2.2.2.2证实实验

在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落l～2个进行革兰氏染色 同时接种乳糖发酵管，置于36± l℃ 温箱内培养24±2h，观察产气情况，凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢短小杆菌，即可报告大肠菌群阳性。2.2.2.3 报告

证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL大肠菌群的最近似数(MPN)。

2.3原料中致病菌的检测（沙门氏菌）

2.3.1 基本原理 2.3.2 实验材料

微生物实验室常规灭菌及培养设备 培养基和试剂

缓冲蛋白胨水（BPW 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 亚硫酸铋（BS）琼脂 HE琼脂

木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂 三糖铁（TSI）琼脂 蛋白胨水、靛基质试剂 2.3.3实验方法与步骤 2.3.3.1 检验程序

尿素琼脂（pH 7.2）氰化钾（KCN）培养基 赖氨酸脱羧酶试验培养基 糖发酵管 半固体琼脂

邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培养基

丙二酸钠培养基

2.3.3.2操作步骤 2.3.3.2.1前增菌

称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。2.3.3.2.2 增菌

轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于42 ℃±1 ℃培养18 h～24h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC内，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。2.3.3.2.3 分离

分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板。于36 ℃±1 ℃分别培养18 h～24 h，观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。

2.3.3.2.4 生化试验

2.3.3.2.4.1自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h，必要时可延长至48 h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。

2.3.3.2.4.2 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h，必要时可延长至48 h，按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于2 ℃～5 ℃或室温至少保留24 h，以备必要时复查。

2.3.3.2.4.3 反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。

2.4 霉菌和酵母的计数

2.4.1设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 冰箱：2 ℃～5 ℃

恒温培养箱： 28 ℃±1 ℃ 均质器

恒温振荡器

显微镜：10×～100× 电子天平：感量0.1 g 无菌锥形瓶:500 mL、250 mL 无菌广口瓶：500 mL 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)无菌平皿：直径90 mm 无菌试管: 10 mm×75 mm 无菌牛皮纸袋、塑料袋

培养基和试剂

马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基 孟加拉红培养基

2.4.2检验程序

2.4.3操作步骤 2.4.3.1 样品的稀释 固体和半固体样品：称取25 g 样品至盛有225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10 的样品匀液。

液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品至盛有225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。

取1 mL 1:10 稀释液注入含有9 mL 无菌水的试管中, 另换一支1 mL 无菌吸管反复吹吸,此液为1:100 稀释液。按以上操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管。

根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL样品稀释液加入2 个无菌平皿作空白对照。

及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。2.4.3.2 培养

待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养5d，观察并记录。

2.4.3.3菌落计数

肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位（colonyforming units，CFU）表示。

选取菌落数在10 CFU～150 CFU 的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。

2.4.4 结果与报告

2.4.4.1 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。2.4.4.2 若所有平板上菌落数均大于150 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

2.4.4.3 若所有平板上菌落数均小于10 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

2.4.4.4 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。2.4.5 报告

2.4.5.1 菌落数在100 以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。

2.4.5.2菌落数大于或等于100 时，前3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位数字，后面用0 代替位数来表示结果；也可用10 的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。

2.4.5.3 称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。

3.原料检测结果与分析

3.1 细菌总数的报告

本次实验所检测的原料中的细菌总数为**

3.2 大肠菌群数的报告

依据上述大肠杆菌的测定结果进行报告

3.3致病菌的报告

根据GB 9961-2008标准。沙门氏菌不得检出，月饼原料才符合标准。沙门氏菌是致病菌，所以要严格避免沙门氏菌的污染。

五、月饼生产设备及环境中微生物的检验

月饼营养丰富，作为中秋的传统节日必备佳品，以及日益成为精美礼品，倍受消费者青睐。由于其生产季节的特殊性，特别容易发生霉变等问题，因此，在生产过程中采取严格的质量控制方法使月饼达到商业无菌和安全消费，是十分必要的。

1、生产线微生物检测

实验对象为食品厂罐月饼生产线。

1.1 车间用水：从车间各龙头采样后，带回微生物室培养；

1.2 车间台面、用具、及加工售货员手的卫生监测：5支无菌棉签擦拭25cm2面积，擦拭后立即用无菌剪刀将棉签头剪入无菌容器中，带回微生物室培养； 1.3 车间空气采样：将5个直径90mm的普通琼脂平板分别置于车间的四角和中部，打开平皿盖5min，然后盖盖后带回微生物室培养。

2、环境卫生

2.1 月饼生产企业除必须具备必备的生产环境外，其生产场所、厂房设计应当符合从原料到成品出厂的生产工艺流程要求。各生产场所的卫生环境应采取控制措施，并能保证其在连续受控状态。

2.2 企业应具备原辅材料库、与生产相适应的生产车间及成品库房。

3、设备保洁

及时清洗所用器具，输送设备的卫生十分重要。每班次生产结束后立即清洗，按照水--碱--水--酸--水顺序来进行，使输送设备中的细菌总数<=20个/cm2。

4、个人卫生

员工必须是健康人群，进车间前双手应消毒液浸泡30s以上，清水冲洗，并经隔离区消毒。

5、出厂检验、标志、包装、运输、贮存

5.1 出厂检验

5.1.1产品出厂须经工厂检验部门逐批检验，并签发合格证。

5.1.2出厂检验项目包括：感官要求、净含量、馅料含量、菌落总数、大肠菌群。

超过两项或微生物检验有一项不符合本标准，则判定该批产品为不合格品。

5.2运输包装标志

应符合GB 191和GB/T 6388的规定。

5.2.1包装

5.2.1．1月饼包装应符合国家相关法律法规的规定，应选择可降解或易回收，符合安全、卫生、环保要求的包装材料。

5.2.1.2月饼宜采用单粒包装。

5.2.1.3包装可有箱装、盒装等形式。包装应对月饼的品质提供有效保护。5.2.1.4包装材质应符合环保要求及食品卫生要求。

5.3运输和贮存

5.3.1运输

5.3.1.1运输车辆应符合卫生要求。

5.3.1.2不得与有毒、有污染的物品混装、混运。应防止爆晒、雨淋。5.3.1.3装卸时应轻搬、轻放，不得重压。

5.3.2贮存

5.3.2.1应贮存在清洁卫生、凉爽、干燥的仓库中。仓库内有防尘、防蝇、防鼠等设施。

5.3.2.2不得接触墙面或地面，间隔应在20cm以上，堆放高度应以提取方便为宜。

5.3.2.3应勤进勤出，先进先出。不符合要求的产品不得入库。

六、结束语

近年来，月饼从简单的传统节日食品，日益变为人们所喜爱的送礼佳品，对月饼的生产工艺提出了更高的要求，同时对月饼的色、香、味的要求也更高，包装精美的月饼中，微生物的菌落总数等指标得到了更严格的控制，以及各个生产环节微生物指标也得到了广泛的关注。因此，检测月饼生产线的工序、设备及环境中微生物的指标，对保证产品的安全性，生产出优质的月饼制品具有重要意义。

第二篇：广式月饼质量若干问题分析及改进措施568324

广式月饼质量若干问题分析及改进措施

近年来，广式月饼在全国非常流行，受到广大消费者的喜爱。除了广东地区生产的正宗月饼以外，其它地区生产的月饼与广东地区生产的月饼相比，还存在着一些的差距，有的产品在回油、回软方面达不到质量标准。其原因，就是对广式月饼的制作技术关键没有掌握。笔者将自己多年的体会总结出来，供业内同仁参考。

一、月饼饼皮不回软、不回油、不光亮原因及改进措施：

首先是转化糖浆质量不过关，糖浆煮制工艺，配料比例不合理。造成广式月饼回油慢、回软差，甚至不回油、不回软，越放越干硬。应注意以下几方面：

(1)糖水比例：即，糖：水＝100：40—50比较适宜。加水量过少，蔗糖无法充分转化。这样的转化糖浆制的作月饼皮一般很难回油、回软。

(2)转化剂种类及用量：煮制转化糖浆时，必须加入适量的酸性物质。酸性物质是蔗糖的转化剂。目前全国各地普遍使用柠檬酸作为蔗糖的转化剂。广东等一些南方厂家有使用新鲜果汁(如菠萝汁、柠檬汁等)来煮制转化糖浆的。柠檬酸的使用量，以蔗糖作为添加基准，一般为0．05％—0．1％。柠檬酸使用量不宜过多。熬制糖浆时，柠檬酸一定要在糖液煮沸以后再加入。

(3)糖浆成熟温度：一般在110—115℃。

(4)煮制时间和糖浆浓度：应以转化糖浆的浓度达到要求为准。浓度是决定转化糖浆质量的重要指标。糖浆的浓度一般应在75％—80％之间。月饼的回油、回软效果较好。

(5)加热容器：使用铜锅和不锈钢锅为宜。大规模工业化生产，应使用能控制温度的蒸汽夹层锅，确保加热温度恒温。

(6)转化糖浆的转化率：是指糖浆中蔗糖转化成葡萄糖和果糖的量，转化率是决定转化糖浆质量的最重要指标。转化糖浆的正常转化率为75％，转化越充分，葡萄糖和果糖的生成量越好，月饼越易回油、易回软。

其次，馅料质量有问题莲蓉、椰蓉、豆沙、枣泥、豆蓉等馅料中掺杂使假，以次充好，加油量少，抺人淀粉多。馅料从饼皮中吸引油脂，造成饼皮失油干燥、变硬。正确制作工艺应搯馅料与饼皮相辅相成，馅料应使用纯正芲蓉、豆沙、枣泥、豆葉、枣蓉等，挈标准配方加入足量的油脂，既保持馅料柔软、细腺，又能使部分油脂转移到餼皮部分，俗称“回油”，使饼皮光亮、柔软

二、烤制后月饼皮頜色为什么会过深，甚至焦糊?

原囀及改进措施：

1．表皮刷蛋液过多，蛋液刷不儀、诇稠。应先将鸡蛋液加兤等量的蛋白搅拌均匀，稠度适当。这样就可以拉开刷子，刷匀蛋液。一般情况下刷两遍蛋液，第一遍刷完后几分钟再轻轻刷一遍，一定要刷匀，不能刷厚厚一层造成烘焙时着色过深过重。

2．蛋液中加入奶粉过多。有的厂家喜欢在蛋液中加入奶粉以加强月饼表面着色，这在月饼工艺中是允许的。但如果制作广式月饼则不应加人奶粉。因为广式月饼饼皮中加入了一定量的视水，使饼皮呈现碱性。在碱性条件下月饼饼皮特别易着色，在蛋液中再加入奶粉刷上月饼表面上，无疑是雪上加霜，造成月饼皮颜色过深、过重，失去光泽。

3．搅拌月饼面团时加入酱色或酱油影响月饼的口感，最好不使用。

4．月饼面团中加入小苏打或视氤过量。月饼饼皮中加入小苏打，视水的主要目的是中和转儔糖浆中辇多的酸，防止月饼产生酸味而幱响口感。同时，小苏打和裆水也能起到使饼皮适度膨松，改善勣感的作用。但如果加入量过多则会造成着色迆深、过重，还会砰坏饼皮外观质构，使餼皮产生裂缝 漏馅、花纹不清、字迹不清而严重嵱响月饼质量。因此，小苏恃和视水一定不能过量。

5．转化粖浆輬化过高。广弋月饼使用转化糖浆，一般要求蔗糖的转化率达到75＄即合乎标准。如果蔗糖转化率大大超过75％，就意味着葡萄糖、果糖的量大大超标。这两种糖均是单糖，具有较强的吸湿性和保水性，是广式月饼饼皮保持长时间柔软、不干、不硬的主要原因。但另一方面，这两种糖的熔点均较低(＜150Y)，而月饼烘烤温度超过200℃，故烘烤月饼时这两种单糖极易提前发生褐变着色反应，等到月饼烤熟时，饼皮已经焦黑了。因此，熬制转化糖浆时一定要控制蔗糖的转化率，使用前一定要检验一下糖浆中的转化糖浓度。

6．烘烤温度过高。正常烤制广式月饼时，一般入炉后上火大于下火。但如果上火过大，烤制时间过长，则也极易造成月饼饼皮颜色过深、过重。因此，烤制广式月饼时，一定要按照烘烤规程正确操作。

三、月饼为什么会收腰、凹陷、凸起、变形，花纹不清?

原因及改进措施：

月饼烘烤完成出炉后，月饼常出现边墙收腰、表面凸起、底部凹陷，即月饼形态收缩变形等现象。造成上述现象的原因有：

1．面粉筋力过大，面团韧性太强。大多数月饼面团属于可塑性面团，即无筋性、无韧性、无弹性面团，以保证月饼不变形，表面花纹清晰可辫。所以，应使用低筋粉或中筋粉。如果使用了高筋粉，则势必造成面团内部形成面筋，造成弹性过强，使月饼在烘烤过程中面筋受热膨胀，出炉后又冷却收缩，造成月饼产品变形，表面花纹图案模糊、不清晰，质量大大下降。

2．转化糖浆浓度过低，即糖浆较稀、水分含量较高，调制面团时易于形成面筋，增强了面团弹韧性，使月饼产品坚硬、收缩变形。转化糖浆的浓度要适当。糖浆浓度是决定面团软硬度和加工工艺性能的重要因素。

可根据以下几方面因素来调节使用不同浓度的转化糖浆。

(1)面粉的筋力。在糖浆面团中主要靠糖的反水化性质来限制面筋蛋白质的吸水和胀润，防止面团形成过多的面筋。

(2)气温的影响。适宜的温度(30—40℃)可促进面筋大量形成，气温、室温、原辅料的温度都直接影响着糖浆面团加工工艺性能。其中气温的变化是主要因素。因此，当气温很高时应增大糖浆的浓度，即糠浆浓度与温度的升高成正比。在夏季高温季节调制糖浆面团时可用浓度稍大一些糖浆，冬、秋、春季低温季节可用浓度稍小一些的糖浆。

(3)油脂用量的影响。糖浆面团中含有一定量的油脂，油脂既限制面筋蛋白质吸水、胀润，又与糖浆相互作用。糖浆具有很大的粘性，可以使油脂在面团中保持稳

定，辟免发生“走油”等质量问题。因此，调制糖浆面团时如果配方中用油量

增加，糖浆的浓度也应增大，即糖浆浓度与油脂用量成正比。

四、为什么月饼底部会产生焦糊、有黑色斑点?

原因及改进措施：

1．底火烘烤温度过高。正确的烘烤工艺为：饼坯入炉后，上火大(210—250℃)、下火小(180—200Y)，达到炉温后，饼坯人炉，目的是使月饼先定形，防止变形和底部焦糊。烤至月饼皮呈金黄色时(一般3—5分钟)，将整盘月饼取出，先薄薄地刷一次鸡蛋液，再薄薄地刷第二次鸡蛋液，一定要刷均匀，这道工序对广式月饼的饼皮着色和光亮非常重要。再次入炉烘烤8—12分钟，烤至月饼呈均匀的枣红色为止。

2．皮馅比例不适当，馅料包人过多，造成饼坯底皮过薄，破皮、漏馅、漏糖、渗油，产生焦化现象。皮馅比例3／7比较合适。

3．烤盘不干净，前次加工使用的烤盘内污物末清理。每次在饼坯装盘前，应严格清除掉盘内的污物。

五、为什么月饼会漏馅、表面开裂?

原因及改进措施：

1．包馅时剂口封闭不紧，应封严剂口。

2．馅料质量差，配比不合理，烘焙时造成“胀馅”、破皮，应严格控制馅的质量。

3．饼皮中加入了过量膨松剂视水，小苏打等。每批视水使用前应先小批量试验，确认取得理想的月饼色泽后，再大批量投入使用。

4．馅料中使用了较多的膨胀原料如椰蓉、大豆蛋白、面包废渣等。

六、馅料质量问题?

原因及改进措施：

1．馅料不纯正。有的厂家掺杂使假，以次充好。红白莲蓉中加入了大量淀粉和白云豆粉冒充莲蓉。检验方法：制成月饼后，用刀将月饼切开，如果馅料不沾刀，切口断面处光滑细腻，即表示这是纯正莲蓉馅。如果切口断面处非常粗糙，即表示这是假莲蓉。

2．馅料不细腻，有的厂家为了降低成本，在馅料中少加油，造成馅料粗糙、干燥、发渣、不油润、不光滑、不细腻。此外，馅料还从饼皮中吸油，影响饼皮回油，使饼皮不油润，不光亮，不柔软。

第三篇：表面微生物检测方法

空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准 目的：

检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。参照标准：

中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。采样与检测方法：

3.1空气的采样与测试方法 3.1.1样品采集：(1)取样频率：

a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。

c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。

d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。e)正常生产状态的采样，每周一次。（2）采样方法

在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。3.1.2菌落培养：

（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。（2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。（3）菌落计算：

a)记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。

b)若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法： 3.2.1样品采集：(1)取样频率：

a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。

b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。

c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。

d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。f)正常生产状态的擦拭，每周一次。（2）采样方法：

a)工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2 的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。

b)工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。（3）采样注意事项： 擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间 3.2.2 细菌·大肠菌群的检测培养: 样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml 1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。3.2.2.1 细菌总数：

（1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。

（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。（3）结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数 3.2.2.2大肠菌群：（1）平板法: a)以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的去氧胆酸盐琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。待琼脂凝固后,再覆盖一层培养基，约3-5 ml。

b)待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养24h后计数。c)结果计算：以平板上出现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得出。d)结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数（2）试管法: a)以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到BGLB肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。

b)置BGLB肉汤管于36℃±1℃培养48±2h。记录所有BGLB肉汤管的产气管数。

c)结果报告：按BGLB肉汤管产气管数，查MPN表报告每25cm2食品接触面中或每只手的大肠菌群值。

3.2.3 金黄色葡萄球菌检测（1）定性检测

a)取1ml 稀释液注入灭菌的平皿内，倾注15-20ml的B-P培养基，（或是吸取0.1稀释液，用L棒涂布于表面干燥的B-P琼脂平板），放进36±1℃的恒温箱内培养48±2小时。b)从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验。

c)结果报告：B-P琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性，即报告手（工器具）上有金黄色葡萄球菌存在。（2）定量检测 a)以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到含10﹪氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。

b)置肉汤管于36±1℃的恒温箱内培养48小时。划线接种于表面干燥的B-P琼脂平板，置36℃±1℃培养45～48小时。

c)从B-P琼脂平板上，挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基，36℃±1℃培养20～24小时。

d)取肉汤培养物做血浆凝固酶试验，记录试验结果。

e)报告结果：根据凝固酶试验结果，查MPN表报告每25 cm2食品接触面中或每只手的金黄色葡萄球菌值。

3.3工厂环境中病原体的检测计划与方法

检测计划：为了保证食品安全，工厂应该对生产环境中的病原微生物进行检测和评估，检测项目包括李斯特菌，沙门氏菌等病原体微生物，化验室应该按照一定的计划对生产场所环境中的病原体进行检测，其中包括地面、下水道、排水沟、墙壁、天花板、设备框架、运输的支架，冷藏装置、速冻机、传送带、设备的螺丝、维修工具等部位。当某个点检测到病员微生物时，应该对环境中的相似点加大检测频率；在把所有的预定点检测完后，应该对环境中的病原微生物的存在状况进行全面评估，在下一次环境检测循环过程中加强检测容易出现病原体的环境点，达到持续改进的目的。

检测频率: 每月两次,每次每个区域至少选取5个检测点,分别进行检测。

3.3.1 环境李斯特菌的检测方法（3MTM PetrifilmTM 环境李斯特菌的测试片）3.3.1.1 用涂抹棒，海绵或者其他采样设备收集环境样本。

3.3.1.2 将收集的样本添加10毫升灭菌的缓冲蛋白胨水，将样本与缓冲蛋白胨混合1分钟，将样品置于室温（20-30℃）1小时，最久不超过1.5小时，以修复损伤的李斯特菌。3.3.1.3 将测试片放在平坦处，掀起上层膜。

3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升样品到下层膜中央，将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。3.3.1.5 轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上，不要压，扭转或者滑动压板。提起压板等至少十分钟，以使胶体凝固。

3.3.1.6 将测试片透明面朝上，可叠放至十片，在37℃±1℃培养26-30小时，可以用标准菌落记数器或者其他光学放大器判读，不要记数圆形轮廓上的菌落，因为他们不受选择性培养基的影响。

3.3.1.7 对于定性检测，根据紫红色菌落是否存在，结果记为检出或者未检出。3.3.2 环境中沙门氏菌的检测方法

3.3.2.1采样地点: 选取采样点时因尽量选取微生物容易滋生的地方 冷冻车间

FD车间

东区初加工

传递窗口表面、排水沟、排水沟出口、墙壁、地面

卸料间 墙壁、墙角、地面、天花板、物料车表面

东区精加工

地面、墙壁、墙角、排水沟、排水沟出口、速动机链条、天花板

暂存间

墙壁、地面、天花板、墙角、墙缝

西区初加工

传递窗口表面、地面、墙壁、排水沟、排水沟出口

挑选间

墙壁、地面、天花板、墙角、垫板

西区精加工

地面、墙壁、墙角、排水沟、排水沟出口、速动机链条、天花板

包装室

墙壁、地面、天花板、金探传送带表面、落地料存放处

3.3.2.2 操作步骤

3.3.2.2.1采样应在生产开始后进行，用已浸润过的棉拭在选定的被测表面旋转涂抹约100cm2的面积，然后将棉拭放回涂抹试管并盖紧。3.3.2.2.2将样品带回实验室，每5个点混合成一个样品, 登记编号,按照SN0170-92标准及时检测，若有阳性结果出现，应逐步对所混合的每个点分别检测。

物体表面涂抹菌落总数计算方式：物体表面细菌总数（cfu/c㎡）=平皿上菌落的平均数*采样液稀释倍数/采样面积（cm2）

根椐GB15979－2002《一次性卫生用品卫生标准》的标准,生产环境卫生指标 1 装配与包装车间空气中细菌菌落总数应≤2 500 cfu/m3。2 工作台表面细菌菌落总数应≤20 cfu/cm2。

3.工人手表面细菌菌落总数应≤300 cfu/只手，并不得检出致病菌。人员和环境卫生检测方法

一、空气采样及检验方法

1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制 2采样（空气沉降法）

2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。

2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。

2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。3培养：于37℃培养24小时。4检测频率：每周 空气质量标准：

生车间、熟车间、成品车间：低于100个 半成品库、成品库：低于10个

二、设备的采样与检验方法

根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。1采样方法

1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）

取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。

1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）

将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。2检验方法

2.1细菌总数的检验

将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。结果计算

表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2 2.2致病菌的检验

沙门氏菌，参照GB4789.4进行 金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行

4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2 一般区域：细菌总数≤100个∕cm2

三、人员手表面细菌污染情况的检验

1.采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。

2.检验方法：同工器具表面细菌总数检验方法。

3.结果计算：每只手表面的细菌总数（cfu/只手）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数

四、消毒液药效的微生物学鉴定法

1采样对象：正常使用的消毒液，和已知配制好备用的消毒液 2采样及检验方法

在无菌条件下，用无菌吸管吸取1毫升样液，加入9毫升稀释液中混匀，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂，需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠，对洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%（W/V）土温80和0.3%卵磷脂；对醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入（W/V）土温80，以中和被检样液中的残效作用，将注入了样液的稀释液充分摇匀，取1毫升注入平皿，随之倒入普通营养琼脂，待琼脂凝固后，翻转平皿，将平皿于37℃条件下培养24小时后计平板上生长的菌落数。3结果分析

平板上有菌生长，表明被检样液中有残存活菌，若每个平板菌落数在10个以下，仍可用于消毒，若每个平板菌落数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量已超过100个，即不宜在用于消毒。

该公式是一个经验公式.它的理论模式依据是:100CM2的面积上10MIN降落的菌落数, 等于1升空气中所含的细菌总数.系数50000基于上述假说和单位换算而来.细菌总数(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT

5/10T:实际放置了5MIN;

100/A:A单一培养皿面积;

1000:1M3=1000L啊,换算成m3

1、空气细菌落菌数单位既然是cfu/m3，那采样时应该还要记录放置平皿的高度。

2、食品安全管理体系中罐头行业有个标准如下：

落下菌数

空气污染程度

评价

30以下

清洁

安全

30～50

中等清洁

50～70

低等清洁

应加注意

70～100

高度污染

对空气要进行消毒

100以上

严重污染

禁止加工

3、是否可根据企业相应的加工产品微生物指标进行自行制定？

第四篇：微生物检测课后习题

绪论：

1.食品的卫生标准内容包括那些？感官指标、理化指标、微生物指标

2.对食品进行微生物检验具有何意义？是衡量食品卫生质量的终于指标，也是判断被检食品是否能食用的科学依据；可以判断食品加工环境及食品卫生的情况，为卫生管理工作提供科学依据；可以有效地防止人畜共患病的发生；保证产品质量，避免不必要的损失

3.食品微生物检验的范围包括那些？生产环境的检验；原辅料的检验；食品加工、储藏、销售等环节的检验；食品的检验

4.食品卫生标准中的微生物指标有那些？菌落总数；大肠菌群；致病菌；霉菌及其毒素；其他指标 菌落总数概念和测定意义

1.什么是菌落总数？是指食品检验经过处理，在一定条件下培养后，所得1mL（g）或1cm2面积检样中所含菌落的总数

2.测定食品、饮料等产品的菌落总数有什么意义？（1）判定食品被细菌污染的程度及卫生质量（2）预测食品存用的期限长短（3）了解细菌在食品中的繁殖动态

3.画出平板倾注法测定菌落总数的示意图：步骤:检样—稀释处理—选择3个适宜稀释度—倒平板—培养—菌落计数—报告结果

4.在测定菌落总数时，如何选择菌落进行计数？(1)选取菌落数在30-300之间的平板,若有两个稀释度均在30-300之间时,比值小于或等于2取平均数,比值大于2则取稀释度较低平板菌落数(2)如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告(3)如均小于30,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告(4)如菌落数有的大于300,有的又小于30,不再30-300之间,以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告(5)如所有稀释度均无菌落生长,则应按小于1乘以最低稀释倍数报告

5.在菌落总数的检验中，要注意哪些事项？(1)对照平板出现几个菌落时,要追加对照平板(2)吸管进出瓶子或试管时,吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分（3）吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm，调整时要使管尖与容器内壁紧贴（4）进行稀释时，吸管口不得与稀释液接触（5）检验从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min（6）稀释倍数越高菌落数越少，如出现逆反现象，不可作为检样计数报告的依据。

6.在菌落总数的检验中，如何根据样品的特性选择培养温度和时间？普通食品37℃48h倒放平板；清凉饮料、调味品、糕点、酒类：37℃24h；水产品：30℃48h 大肠菌群测定

1.什么是大肠菌群？大肠菌群由那些微生物组成？指一群需氧及兼性厌氧，在37℃能分解乳糖，产酸产气的革兰氏染色阴性无芽孢杆菌；组成：大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属、阴沟肠杆菌

2.测定食品、饮料等产品的大肠菌群数有什么意义？（1）判断食品是否受到粪便的污染（2）有利于控制肠道传染病的发生和流行（3）有利于控制食品在生产加工、运输、保存等过程中的卫生状况

3.大肠菌群具有那些生物学特性？形态与染色：革兰氏阴性，无芽孢杆菌，发酵乳糖产酸产气；培养特性：在EMB琼脂平板上的典型菌落：呈深紫黑色或中心深紫黑色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，常有金属光泽

4.在大肠菌群数的检验中，要注意哪些事项？（1）抑菌剂（2）菌落特征（3）产气量（4）MPN检索表

5.在水的大肠菌群数检验中，如何进行水样的采集？自来水（未含氟）：龙头火烧灭菌，畅流5-10秒后取样；地面水源水，江湖河，水库，水池等浸入水下20cm下取样，水井50cm下取样；漂白粉处理的水样：自来水，游泳池水，应在瓶内加入0.03g硫代硫酸钠/500,或2ml1.5%硫代硫酸钠液/500ml,除氯;运送:2小时内送检.6-10℃<6h立即检验;检验前将水样震荡5-10min 病原性球菌检测

1.金黄色葡萄球菌可产生哪些毒素和酶?溶血毒素；杀白细胞素；血浆凝固酶；脱氧核糖核酸酶；肠毒素；溶纤维蛋白酶；透明质酸酶

2.金黄色葡萄球菌在B-P平板上的菌落特征如何?说明其原理？特征：圆形，光滑凸起，湿润，成灰色至黑色，边缘色淡周围为浑浊带，在其外层有一透明带；原理：氯化锂、甘氨酸：抑制非致病性葡萄球菌的生长；丙酮酸钠：促进葡萄球菌生长；亚碲酸钾：抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原为碲盐呈黑色。

3.金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征如何?菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有透明溶血圈（β型）

4.确认葡萄球菌为金黄色葡萄球菌的依据至少应该包括那几个试验? 5.金黄色葡萄球菌的形态与染色、培养特征如何？形态与染色：革兰氏阳性球形菌，排列呈葡萄状。无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气；培养特征：需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、PH7.4；对营养要求不高，在普通培养基中生长良好，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛；耐盐性强，在含NaCL7.5-15%培养基中能生长；在肉汤中是浑浊生长，时间过长，有少量沉淀；在普通培养基上生长，可形成圆形凸起，表面光滑，边缘整齐，不透明，直径1—2mm的菌落能产生黄色色素；血琼脂平板：菌落大、产生完全溶血圈；BP平板：灰色到黑色边缘淡，菌落周围有一浑浊带，在其外有一透明带

食品中溶血性链球菌的检验

1.链球菌的溶血现象有那几个类型，各类型的溶血特征如何？甲型α-溶血性链球菌（菌落周围有1-2mm宽的草绿色溶血环，也称甲型溶血，这类链球菌多为条件致病菌。）、乙型β-溶血性链球菌（菌落周围形成一个2-4mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环，也称乙型溶血，该菌的致病力强，常引起人类和动物的多种疾病，与人类疾病有关的血清型90%属于A族链球菌）、丙型γ-链球菌（不产生溶血素，菌落周围无溶血环，也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染。）

2.溶血性链球菌在血平板和葡萄糖肉汤中生长有何特征？在血平板上形成灰白色，半透明、表面光滑、有乳光圆形突起的细小菌落，直径0.5-0.75mm，针尖大小，菌落周围出现溶血环；在葡萄糖肉汤中：

3.溶血性链球菌能产生什么毒素和酶？溶血毒素、致热外毒素、透明质酸酶、链激酶、链道酶、杀白细胞素

4.写出链球菌的检验程序，并说明链激酶的反应原理。检验程序：固体检验—样品处理—增菌培养—分离培养—纯化培养—生化鉴定—报告；原理： 肠道致病菌

1.肠道致病菌具有那些生物性特性？均为革兰氏阴性杆菌，中等大小，无芽孢，多数具有周鞭毛能运动；需氧或兼性厌氧，菌落中等大小，表面光滑，液体培养基浑浊生长；肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳糖、葡萄糖产酸或产酸产气；可还原硝酸盐为亚硝酸盐

2.肠道致病菌具有那些抗原？又称为什么？有什么特点？O抗原：也称菌体抗原，细胞壁脂多糖，耐热100℃不被破坏

H抗原：也称鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐热，60℃30’可破坏

K抗原:也称表面抗原(荚膜抗原),多糖,具有阻抑O抗原发生凝集的现象,加热60℃30’可消除抑阻作用 菌毛抗原: 3.写出肠道致病菌检验的基本程序？检样—处理—增菌培养—分离培养—生化实验—血清学鉴定—报告 沙门氏菌

1．典型沙门氏菌的五项生化试验结果如何？

2.沙门氏菌的形态特征，培养特性是什么？形态特征：革兰氏染色阴性，无荚膜，无芽孢，多数有鞭毛，有动力，短小杆菌；培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温37，PH7.2-7.4；对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，37，24h能形成菌落中等大小，直径2-3mm，圆形或卵圆形，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐的菌落；在液体培养基中，呈均匀浑浊性生长，无菌膜。3.沙门氏菌检验时为什么要进行前增菌和增菌？

4.沙门氏菌有哪些抗原？各有何特点？O、H抗原如何表示，A-F群沙门氏菌中，代表每群O特异性抗原的独特因子是什么？O抗原（主要抗原OA~OZ，O51~63，O65~67）、H抗原、表面抗原（K抗原）、菌毛抗原。

5.沙门氏菌哪几个菌型具有Vi抗原，Vi抗原对O抗原血清连实验有何影响，对含Vi抗原菌，如何做O抗原血清学实验？含有Vi 抗原的沙门氏菌：伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌。Vi抗原位于菌体的最表层，包围了O抗原，可阻碍O抗原的血清学凝集试验。破坏Vi抗原：60℃30秒，100℃5秒，石炭酸处理或人工培养后消失。

6.沙门氏菌在SS平板，TSI培养基上生长的现象如何，说明其原理

7.分离纯化后怎样选用最少的生化试验方法初步鉴定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌

8.如何进行沙门氏菌的血清学试验 志贺氏菌 1.志贺氏菌分几个群各称为什么？抗原结构如何？K抗原对O抗原试验有何影响？A群痢疾志贺氏菌、B群福氏志贺氏菌、C群鲍氏志贺氏菌、D群宋内氏志贺氏菌；抗原结构：ABCD均是O抗原；A群、C群具有K抗原；影响：K抗原可阻碍O抗原的血清学凝集实验，煮沸处理即可。

2.写出志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌在SS、EMB平板上生长的菌落特征？志贺氏菌：无色透明，不发酵乳糖，中等大小，光滑圆形菌落；沙门氏菌：SS圆形或卵圆形，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐的菌落；大肠杆菌：EMB呈深紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，常有金属光泽

3.志贺氏菌在三糖铁培养基上生长结果如何？斜面产碱仍为红色或粉红色；底层产酸不产气，变黄色；不产硫化氢，不出现黑色。

4.在志贺氏菌中，接种三糖尿病铁培养基和葡萄糖半固体培养基后，那些培养物可认为不属于本菌生长现象的范围而可弃去？在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物；在18h-24h发酵乳糖、蔗糖的培养物；不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的培养物；产气的培养物；有动力的培养物；产硫化氢的培养物。5.如何用生化反应来区分志贺氏菌各群？用4中志贺氏菌多价血清检查，如果呈现凝集，则用A1，A2、B群多价和D群血清分别试验；如是B群，则哟个群和型因子血清分别检查；4中志贺氏菌多价血清不凝集的菌株用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1-15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3-12型多价血清及各型因子血清检查。

6.写出沙门氏菌、志贺氏菌的检验程序及其所用培养基。沙门氏菌：检验—增菌（前增菌）--分离培养—生化实验初步鉴定—血清学反映最后鉴定—报告；培养基：BS琼脂平板和XLD琼脂平板；志贺氏菌：检验—样品处理—增菌培养—SS、EMB平板分离培养—初步生化鉴定—最后血清学鉴定—报告。培养基：强选择性（SS或HE）、弱选择性（EMB或麦康凯）副溶血性弧菌

1.副溶血性弧菌的形态与染色有和特点？革兰氏阴性无芽孢多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染。杆状、棒状、甚至球状、丝状等；需氧或兼性厌氧，生长最好；在2~3%NaCL培养基中生长最好,无盐或食盐>10%不能生长;最适温度36℃,PH7.5-7.8;在专用选择性平板上,菌落呈圆形凸起,浑浊不透明,表面光滑,较湿润,边缘不整齐;血平板:可见溶血环

2.副溶血性弧菌的生化特性中最有特点的是那个项目，如何利用这个项目，诊断某细菌是否是副溶血性弧菌？

3.副溶血性弧菌在TSI，Nacl蔗糖，嗜盐选择性平板上培养特征如何？Nacl蔗糖平板：圆形，半透明或不透明，无粘性，绿蓝色；嗜盐性平板：圆整或不齐，隆起混浊，无粘性，无色，湿润。镜检：两端浓染 蜡样芽孢杆菌

1.引起蜡样芽孢杆菌事物中毒的常见食物有那些？什么条件下可引起蜡样芽孢杆菌食中毒？乳类、肉类、米饭、淀粉类、甜点心、凉拌蔬菜，水果，色拉 2.蜡样芽孢杆菌的形态与染色特性如何？革兰氏阳性大杆菌，芽孢不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列，周身鞭毛，有动力

3.蜡样芽孢杆菌在普通营养琼脂和甘露醇卵黄多粘菌琼脂平板上生长的菌落特征如何？普通：菌落灰白色，不透明，边缘不整齐，表面粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状；甘露醇卵黄多粘菌素平板：菌落呈粉红色，具有白色浑浊环。血平板：菌落呈浅灰色，不透明，似白色毛玻璃状，有溶血环。4.写出蜡样芽孢杆菌检验的基本程序？检验—稀释处理—平板分离—证实实验—培养特性观察—生化实验—报告结果 霉菌、酵母菌数测定

列表说明霉菌、酵母菌数的测定与菌落总数的测定有什么不同的地方和相同的地方？

检验程序：检验—处理—稀释—平板分离培养—菌落计数—报告 罐头类

1.罐头食品的商业无菌检验中，保温的目的是什么？目的：观察是否胖听或泄漏 2.在罐头食品的商业无菌检验中，开罐前要做好那些准备工作？用75%酒精稀球擦试无代号端，并点燃灭菌（胖听不能烧），然后开罐，但不能伤及卷边结构。3.如何判断罐头为商业无菌？该批罐头食品经审查生产记录，属于正常，抽取样品经保温试验未见胖听或泄漏，保温后开罐，经感官检查PH测定，涂片镜检，或接种培养，确证无M增殖现象。

第五篇：微生物检测技术复习资料

名词解释

1病原微生物：感染人、动植物，导致疾病发生的有害微生物。

2无菌操作：用于防止微生物进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作 3灭菌：用物理和化学方法杀灭或清除传播媒介上一切微生物的方法

4菌落总数：指食品检样经过处理，在一定条件下培养后所得1g或1mL检样中所含细菌菌落的总数。

5大肠菌群：寄居于人及温血动物肠道内的肠居菌，随大便排出体外。食品中大肠菌群数越多，说明食品受粪便污染的程度越大。微生物：一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。包括病毒、细菌、真菌、原生动物和某些藻类。

7微生物检测：基于微生物学的基本理论，利用微生物实验技术，根据各类产品卫生标准的要求，研究产品中微生物的种类、性质、活动规律等，用以判断环境、产品等卫生质量的一门应用技术。菌落：将细菌接种在固体培养基上经18∽24小时培养，长出肉眼可见的来源于一个细胞的细菌集团。荚膜：在某些细菌细胞外壁外存在着一层松散透明、厚度不定的胶状物质叫荚膜。10消毒：杀灭或清除传播媒介上病原微生物,使其达到无害化的FF。

填空简答

1饮用水的微生物检测

大肠菌群是指示水质受粪便污染的指示菌，细菌总数指示水体受污染物污染的情况。我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准 生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个，大肠菌群每升不得超过3个。培养基的分类（按物理性质）：液体、固体、半固体、脱水培养基

3病毒的组成：核酸和蛋白质革兰氏染色：阴红阳紫 5 细菌特殊结构的功能：

鞭毛：是细菌的运动器官，鞭毛菌在液体环境下可自由移动，速度迅速，抗原性 1化学趋向性运动，有助于细菌向营养物质处前进，而逃离有害物质.2.与细菌致病性相关

3.可用以细菌的鉴定和分类

菌毛：菌毛是在某些细菌表面存在着一种比鞭毛更细、更短而直硬的丝状物，须用电镜观察。特点是：细、短、直、硬、多，菌毛与细菌运动无关，根据形态、结构和功能，可分为普通菌毛和性菌毛两类。前者与细菌吸附和侵染宿主有关，后者为中空管子，与传递遗传物质有关。

芽孢：芽孢是细菌的休眠体，对不良环境有较强的抵抗能力。耐热性、抗逆性强（抗热、抗辐射、抗化学物质和抗静水压等能力）

荚膜：①抗吞噬作用②黏附作用③抗有害物质的损伤作用④抗干燥作用⑤当缺乏营养时，荚膜可被利用作碳源和能源，有的荚膜还可作氮源。肺炎双球菌：光滑型(简称S型)产生荚膜，有毒；粗糙型(简称R型)不产生荚膜，无毒。7 芽孢：抗逆性强

8疯牛病

牛海绵状脑病（Bovine spongiform encephalopathy, BSE），又称疯牛病，是一种侵犯牛中枢神经系统的慢性的致命性疾病，由一种非常规的病毒——朊病毒（Prion）引起的一种亚

急性海绵状脑病，这类病还包括绵羊的搔痒病、人的克-雅氏病（Creutzfeldt-Jakob Syndrome , CJD）（又称早老痴呆症）、库鲁病以及最近发现的致死性家庭性失眠症等等。

朊病毒是一类非正常的病毒，它不含有通常病毒所含有的核酸，而是一种不含核酸仅有蛋白质的蛋白感染因子。

朊病毒属于亚病毒，亚病毒包括：类、拟、朊病毒三类。人类三大流行病原：线虫（原生、无脊椎动物动物）分类：包括自由生活线虫（海洋、淡水和土壤中）和危害植物的病原线虫人类病原真菌的分类：

1）浅部真菌：侵犯皮肤、毛发、指甲，为慢性，顽固性，但影响身体较小；

2）深部真菌：可侵犯全身内脏，严重的可引起死亡。

3）此外，有些真菌寄生于粮食、饲料、食品中，能产生毒素引起中毒性真菌病。12原核微生物常见类群

1）真细菌：细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体和衣原体

2）古生菌 13真菌类群

鞭毛菌亚门、接合菌亚门、子囊菌亚门、担子菌亚门、半知菌亚门细菌的基本形态

细菌的种类虽然很多，但其基本形态只有三种：球菌（葡萄球菌、双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌）、杆菌、螺旋菌（弧菌和螺菌）。15 病毒的分类

1）按感染的对象分

动物病毒、植物病毒、细菌病毒、昆虫病毒及真菌病毒，另外尚有亚病毒——类病毒(Viroids)拟病毒(Virusoid)和朊病毒(Prion)。

2）按遗传物质分类分

DNA病毒和RNA病毒两大类

（噬菌体寄生于细菌中病毒的总称。）高压蒸汽灭菌指标： 0.10MPa，121℃，20min左右纯种分离的技术方法

1）固体培养基纯种分离技术:① 稀释倒平板法；② 涂布平板法 ③平板划线分离法；④稀释摇管法——厌氧微生物的分离

2）液体培养基纯种分离技术——稀释法（不可靠）

3）单细胞（孢子）分离——显微分离

4）选择培养: ① 选择平板培养② 富集培养

问答题

1、微生物有益方面

1）微生物与粮食增产

固氮、解磷、解钾、生长激素、分解大分子碳源等促生产功能，抗病虫害。

2）微生物与能源供应

产乙醇、产甲烷、分解长链烃或脂肪酸为短链燃料，微生物电池、微生物采油。

3）微生物与资源开发

发酵产乙醇、丙酮、水杨酸等化工产品。

4）微生物与环境保护

微生物修复:重金属、降解塑胶废品、净化污水、监测环境污染等。

5）微生物与人类健康

生物制品：菌苗、疫苗、类毒素等；

代谢产物：胰岛素、白细胞介素、干扰素、链激酶及青霉素等抗生素。

2、微生物有害方面

1）人类疾病

1347年，鼠疫造成欧洲约2500万人死亡。

2）动植物疾病，降低食物产量及品质

1843-1847年，欧洲马铃薯晚疫病，饿死100万人，164万逃往北美。

3）污染水源、加工食品、医药

完达山刺五加致死事件、太湖蓝藻污染等。

4）破坏人类生活用品

家具、化妆品等损害、污染

3样品采集的原则

1）根据检验目的、样品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。

2）采样、保存、运输、接收过程应遵循无菌操作程序，采取必要的措施保持样品的原有状态，防止样品中原有微生物的种类、数量变化(避免采样引入新的污染或者对微生物的杀灭因子)。

3)采样要讲究方法、有代表性，不同的样品有不同的要求，特别是某些特殊样品。

4)注意采样时间和种类：一般原则是根据不同疾病的特点和临床表现，确定采样时间和标本种类。

5)注意生物安全：采样中避免造成人员感染、标本和环境的污染。采用防护装备，注意安全操作和安全包装样品。

6)样品的包装、密封标志要明确，以备查询。（用于卫生质量评价的样品，应标明样品名称、编号、采样时间、采样量、采样者、检测项目等。）

利用某一特定微生物特有的基因序列，设计特异性引物进行PCR扩增。若有条带，则说明待测样品中含有目的菌，且目的菌的含量与条带的亮度呈正相关；若无条带，则说明待测样品中无目的菌。微生物检验的任务

1）研究各类产品的样品采集、运送、保存以及预处理方法，提高检出率。

2）根据各类产品的卫生标准要求，选择适合不同产品、针对不同检测目标的最佳检测方法，探讨影响产品卫生质量的有关微生物的检测、鉴定程序以及相关质量控制措施；利用微生物检验技术，正确进行各类样品的检验。

3）正确进行影响产品卫生质量的有关微生物的快速检测方法、自动化仪器的使用，并认真进行检验结果的分析和试验方法的评价。

4）及时对检验结果进行统计、分析、处理，并及时准确地进行结果报告。

5）对影响产品卫生质量及人类健康的相关环境的微生物进行调查、分析与质量控制。微生物的特点：个体小、比表面大；分布广、种类多；代谢强、繁殖快；易变异、抗性强 7 科赫法则:①分离、纯化单菌落;②分别接种寄主;③从致病寄主分离出相应菌株 8 微生物检测的意义

1）衡量动植物性产品卫生质量的重要指标，也是判定被检产品能否食用的科学依据。

2）可以判断产品加工环境卫生状况，对产品被微生物污染的程度作出正确的评价，为各项

卫生管理工作提供科学依据，提供传染病和人类、动物和食物中毒的防治措施。

3）“预防为主”：可以有效地防止或者减少食物中毒、人畜共患病的发生，保障人民的身

体健康。

4）对提高产品质量、避免经济损失、保证出口等方面具有政治上和经济上的重要意义。*微生物检测与植物检疫

植物检疫目的：发现、检出和鉴定有害微生物、昆虫、杂草等，作为出证或检疫处理的依据。外来有害生物爆发的因素：天敌、环境、寄主、潜在危害的认识（人为因素）。

关系：植物检疫的一部分，主要负责检测引起植物病害的微生物，防治病原物的进入或流出，保证农林园艺业安全。

设计题

病原微生物采集、分离、鉴定方案